不同细胞因子对脐血CD_(34)^+细胞扩增的影响

目的探讨不同细胞因子促进脐血CD34+细胞扩增的效应,为下一步的临床应用奠定基础。方法采用EasySep免疫磁珠阳性选择系统分离脐血中CD34+细胞,在无血清、无基质细胞培养体系中添加不同细胞因子培养2周,分组:A组,SCF+FL+TPOB组,SCF+FL+TPO+IL-3C组,SCF+FL+TPO+G-CSF。结果CD34+细胞数目于培养后7d达到峰值,3组间差异无显著性;B组扩增至14d时细胞总数达(384.40±17.48)倍,显著高于另外2组。扩增7d后的脐血细胞经体外培养可形成造血集落。结论体外扩增脐血CD34+细胞理想的细胞因子组合为SCF+TPO+FL,以7d为宜。

脐血体外同时扩增T、NK及干祖细胞移植治疗BALB/c小鼠白血病

目的:观察体外同时扩增T、NK及干祖细胞脐血用于移植治疗BALB/c小鼠白血病效果。方法:在不同的细胞因子组合作用下定向扩增脐血干祖细胞及T、NK免疫细胞。扩增7天后,5×106个/只脐血细胞经尾静脉接种X射线照射的白血病小鼠,观察各组小鼠存活时间及检查存活证据及微小残留白血病细胞。结果:1.细胞因子SCF,IL-3,IL-6,IL-7,IL-2组合能显著扩增脐血中的CD34+、CD3+T、NK细胞。2.尾静脉接种2×106个/只K562产生可移植性白血病BALB/c裸鼠。3.BALB/c白血病小鼠移植6周后,实验组共存活鼠12只。而未移植者在60天内死于肿瘤。4.流式细胞分析移植30天后小鼠外周血中人CD3+细胞从最低新鲜脐血移植组(0.48±0.40)%,最高SCF+IL-3,6,7组中为(3.01±1.25)%。RT-PCR检测发现,在12只扩增后移植存活6周小鼠中,检测不到bcr/abl基因。在3只新鲜脐血移植存活6周的小鼠中,1只呈现阳性,说明移植取得了造血与免疫重建。所有脐血移植小鼠均未出现明显临床GVHD症状。结论:这种扩增后含一定水平T、NK免疫细胞的脐血能重建可移植性BALB/c白血病小鼠的造血和免疫。

NF-κB信号通路在肾移植排斥中作用的研究进展

肾移植是临床上治疗终末肾脏疾病的一种重要手段,而移植后的急、慢性排斥反应是术后移植失败的重要原因。许多研究表明在同种异体移植中,核因子κB(NF-κB)的活化诱导炎性因子释放,因而患者发生排斥反应的风险随之增高。许多药物能通过抑制NF-κB的活性来发挥作用,如糖皮质激素、免疫抑制剂可减轻肾移植术后的排斥反应,PPAR-γ激动剂能缓解肾脏疾病引起的炎症,而吡咯烷二硫基甲酸盐则能起到保护肾脏的作用。本文回顾了NF-κB及其信号通路的构成、NF-κB在肾移植排斥反应中的作用,以及通过阻断NF-κB信号通路来降低肾移植排斥反应发生的方法,以期对预防和治疗肾移植术后的排斥反应有所帮助。

自体骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死

目的:将大体动物自体骨髓间质干细胞移植至心肌梗死后的心肌瘢痕组织中,观察细胞在梗死区的存活以及对心功能的改善情况。方法:实验于2003-04/2004-03在徐州医学院第二附属医院介入导管室完成。①选择21只中国小型家猪,三四个月龄,体质量30～40kg。随机分为实验组11只和对照组10只,应用闭胸经股动脉介入的方法制作动物心肌梗死模型。②10余天后实验组将培养的自体骨髓干细胞移植于梗死区,对照组在梗死区植入营养液。③8周后,以心脏彩超及放射性核素心肌扫描观察梗死心肌的恢复及心功能的变化。④最后行组织学分析。结果:①21只家猪,实验过程中死亡3只,1只建模未成功,进入结果分析实验组9只,对照组8只。②心脏彩超显示实验组移植后左室射血分数较移植前增加犤(42.07±2.06)%,(47.00±2.36)%,P<0.05犦。③99Tcm-MIBI显示实验组梗死面积比移植前缩小犤(34±12)%,(21±10)%犦。④实验组微血管密度较对照组显著增加(8.32±1.26)个/0.2mm2,(4.61±1.32)个/0.2mm2,P<0.05犦。结论:自体骨髓间质干细胞移植至梗死区后,可使梗死面积缩小,心脏功能改善。

MICA分子在器官移植免疫反应中的作用

MICA（Major histocompatibility complex classⅠrelated chain A）是人类主要组织相容复合体（MHC）Ⅰ类相关基因A编码的多态性细胞膜糖蛋白分子。MICA基因位于人类第六号染色体MHC基因复合体Ⅰ类区域,包含长而紧密开放的阅读框,编码MICA分子[1]。该基因由6个外显子组成。分别编码L-信号肽,胞膜外α1、α2和α3结构域。

中医药配合造血干细胞移植治疗血液病思路探讨

探讨中医药配合造血干细胞移植治疗血液病的原则和方法。认为在促进造血干细胞归巢、防治移植后急慢性移植物抗宿主病等环节方面充分发挥中医药的减毒增效作用,对于避免移植失败、防治移植物抗宿主病、降低移植相关死亡率具有重要意义。

小鼠MD-1表达的影响因素及其在移植排斥反应中的作用

目的:探讨影响小鼠MD-1表达的因素以及MD-1在移植排斥反应中的作用。方法:实验采用C57BL/6-BALB/c小鼠同种皮肤移植模型,以非特异性免疫抑制剂CsA、FK506、MMF和SRL,以及特异性MD-1反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)为干预手段,于术后第11天留取标本检测脾细胞MD-1表达水平和增殖反应强度、血清IL-2和IL-10水平以及皮肤移植物组织学改变,并记录移植物存活时间。结果:CsA、MMF和AS-ODNs处理能减少脾脏MD-1表达阳性细胞数、降低脾细胞增殖反应强度、下调血清IL-2水平和上调IL-10水平,并显著延长皮肤移植物平均存活时间(MST);FK506与CsA和MMF处理结果的差异在于其对血清IL-10水平无明显影响;SRL处理仅能减低脾细胞增殖反应强度和延长皮肤移植物MST,对MD-1表达及IL-2与IL-10分泌无明显影响。MD-1表达水平与脾细胞增殖反应强度和血清IL-2水平呈极显著正相关,和IL-10水平呈极显著负相关。结论:CsA、FK506、MMF和AS-ODNs处理均能有效抑制小鼠MD-1的表达。免疫抑制剂干预MD-1表达的作用与血清IL-2水平下调有关。MD-1通过影响淋巴细胞增殖反应和血清IL-2、IL-10水平,在移植排斥反应中发挥重要作用。

睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞的毒性作用

目的:分析睾丸支持细胞(塞尔托利氏细胞)对异基因T淋巴的细胞毒性作用。方法:实验于2006-01/07在解放军广州军区武汉总医院实验科完成。睾丸支持细胞取材于二三周龄SPF级Wistar雄性大鼠,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。T淋巴细胞取材于体质量为200-250g的SPF级SD雄性大鼠脾脏,由湖北省实验动物中心提供(许可证号:SCXK(鄂)-2003-005)。将Wistar大鼠睾丸支持细胞与异基因SD大鼠T淋巴细胞共同培养。按睾丸支持细胞含量将实验分6组:对照组(0个睾丸支持细胞+DMEM/F12培养基100μL)、睾丸支持细胞1×103组(100μL)、睾丸支持细胞1×104组(100μL)、睾丸支持细胞1×105组(100μL)、睾丸支持细胞1×106组(100μL)及FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(经0.2μg抗FasL单克隆抗体封闭过的睾丸支持细胞1×106,100μL),每组均加1×105T淋巴细胞,6复孔培养48h,应用噻唑蓝比色法测定睾丸支持细胞对T淋巴细胞的毒性作用,用酶标仪于570nm处测各孔吸光度(A值),细胞毒性百分比(%)=(对照组A值-试验孔A值)/对照组A值×100%。结果:睾丸支持细胞1×103组、睾丸支持细胞1×104组、睾丸支持细胞1×105组及睾丸支持细胞1×106组对T淋巴细胞的细胞毒性百分比显著高于对照组、FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组(8.75%,20.37%,65.07%,62.96%;0,3.85%,P<0.01);睾丸支持细胞1×103组-睾丸支持细胞1×105组随睾丸支持细胞数量增加,对T淋巴细胞的毒性作用也明显增加,当睾丸支持细胞数增加至1×105,杀伤作用的增加不再显著。FasL单抗处理的睾丸支持细胞1×106组与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:睾丸支持细胞对异基因T淋巴细胞有明显毒性作用,随着睾丸支持细胞增加,对异基因T淋巴细胞的抑制和杀伤作用也越大;但是当睾丸支持细胞达到一定数量后,其毒性作用不再增加;这种作用也可以被抗FasL单克隆抗体阻断。表明睾丸支持细胞FasL的表达是发挥免疫豁免作用的主要作用途径。

BAFF分子在部分肾移植受者外周血淋巴细胞异常高表达及其可能的生物学意义

目的:分析BAFF分子在肾移植受者外周血淋巴细胞的表达情况以及初步分析其异常表达的生物学意义。方法:以来院随访的肾移植受者为研究对象,采集患者外周血,以EDTA-Na2抗凝。采用单色和多色标记的免疫荧光分析法,分析BAFF分子在外周血淋巴细胞的表达情况,同时检测淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD134、CD25和CD127的表达。结果:共分析了86位肾移植受者。BAFF分子在受者外周血淋巴细胞的表达率分别介于0.18%至76.97%之间。以15%为界将所有数据分成两组(表达率>15%组和表达率<15%组),对所获得的数据进行统计分析。在BAFF分子表达率>15%组其BAFF分子表达的平均值为36.91%;BAFF+细胞群的增加与外周血CD4+/CD8+比值、与循环中CD4+CD25+CD127-/low T细胞群等没有显著相关性;但是与循环中CD134+ T细胞群和CD4+CD134+ T细胞群的增加存在显著相关性(P<0.01和P<0.05),具有统计学意义。而BAFF表达率<15%组所检测的相关指标均没有统计学意义。结论:BAFF分子在部分肾移植受者外周血淋巴细胞的异常高表达可能与移植排斥反应相关。

扩增后脐血CD_(34)^+细胞对SCID小鼠重建造血中的影响

目的探讨脐血CD34+细胞体外扩增后的体内重建造血功能,为临床脐血移植提供实验依据。方法分离新鲜脐血中的CD34+细胞,培养7d后收集扩增的细胞,自尾静脉注射入经265cGy辐照的6周龄SCID小鼠体内,饲养6周后检测其骨髓中的人源细胞。结果脐血CD34+细胞经体外培养7d,CD34+细胞扩增(9.74±1.52)倍;移植6周后流式细胞仪检测实验组SCID小鼠骨髓中的CD45+细胞百分含量为5.37%～11.31%;RT-PCR分析可同时检测到387bp人β-actin和203bp小鼠β-actin,而对照组只能检测到小鼠β-actin。结论脐血CD34+细胞经体外扩增后可以重建经辐照SCID小鼠的造血功能。

间充质干细胞移植抑制小鼠急性移植物抗宿主病的实验研究(英文)

目的研究间充质干细胞的体内免疫调节活性。方法将C57/BL脾脏细胞输注入受亚致死量照射的BALB/c小鼠,建立急性移植物抗宿主病模型,受体小鼠或同时接受密质骨骨髓来源的间充质干细胞,流式细胞技术检测脾细胞表面表达的活性分子。结果模型经输注间充质干细胞后,鼠脾脏CD11b+细胞表达的CD86和CD69减少,提示抗原呈递细胞的成熟度下降。此外,作为一种效应T细胞早期活化和发育的标记,CD3+CD69+细胞/CD3+细胞的比值降低,导致脾内CD3+细胞的绝对和相对数目减少。但是,在同系脾细胞输注模型中,CD11b+细胞表面的CD69和MHCⅡ表达以及CD3+细胞表面的CD69不受影响。结论 MSCs可以分3个阶段抑制急性移植物抗宿主病,有望成为急性移植物抗宿主病的有效治疗手段,但仍需进行深入研究。

胚胎脊髓干细胞移植联合甲基强的松龙修复脊髓损伤的实验效果

目的:大剂量甲基强的松龙治疗脊髓损伤已被临床广泛应用,探讨胚胎脊髓干细胞移植与大剂量甲基强的松龙联合应用治疗脊髓损伤的效果。方法:实验于2003-05/2004-02在大庆市第四医院骨科完成。选用SD大鼠50只,随机分为甲基强的松龙联合胚胎脊髓干细胞组、甲基强的松龙组、胚胎脊髓干细胞组、单纯损伤组、空白对照组,每组10只。将前4组制作成T12脊髓右半切损伤动物模型(麻醉后暴露T12脊髓,制成约3mm×3mm的脊髓半切损伤区),甲基强的松龙联合胚胎脊髓干细胞组及胚胎脊髓干细胞组移取14d孕鼠一段长约3mm纯净颈胸段胚胎干细胞,立即移植入刚完成的脊髓损伤的半切损伤处。8h内,甲基强的松龙联合胚胎脊髓干细胞组、甲基强的松龙组两组动物自鼠尾静脉推注甲基强的松龙30mg/kg,其后的23h按同样方法应用甲基强的松龙5.4mg/(kg·h)。单纯损伤组损伤后未予治疗。空白对照组未进行干预。治疗后即开始观察实验动物的一般状态及运动功能改变,并于第8周从每组中选取6只大鼠,对其损伤区脊髓横断面神经纤维数进行统计学分析。结果:①甲基强的松龙联合胚胎脊髓干细胞组损伤区神经纤维计数多于甲基强的松龙组、胚胎脊髓干细胞组、单纯损伤组(25.4±3.1,0,11.6±1.1,0,P<0.05)。②除甲基强的松龙联合胚胎脊髓干细胞组、胚胎脊髓干细胞组有部分感觉功能恢复外,各组均无行为学改变。结论:大剂量甲基强的松龙与胚胎脊髓干细胞移植联合应用可协同促进损伤脊髓的修复。

人类白细胞抗原(HLA)基因分型在造血干细胞移植中的应用

目的提高造血干细胞移植供、受者HLA配型的精确度,有效防止移植物抗宿主病Graft-vs host disease(GVHD)的发生。方法采用准确、简便的DNA提取方法和PCR-SSP基因分型方法。建立HLA-A,B,DR基因分型方法。结果对167例临床标本进行基因水平的研究发现,DNA提取方法可以满足此项研究对样本的要求。HLA PCR-SSP基因分型方法具有良好的稳定性、可靠性和特异性。结论HLA基因分型方法准确、特异、重复性好,可作为临床造血干细胞移植配型和正常人群无关供者筛选的常规方法,对(GVHD)的发生必将起到重要的预防作用。

聚左旋丙交酯纳米纤维支架与大鼠脊髓组织相容性的研究

目的探讨聚左旋丙交酯[Poly(l-lactic acid),PLLA]纳米纤维支架与大鼠脊髓组织的相容性。方法以PLLA为原料,采用液-液相分离技术构建纳米纤维支架(Nanofibrous scaffolds)。在体外构建骨髓间充质干细胞(MSCs)-PLLA纳米纤维支架复合体;将12只SD大鼠随机分为两组,即损伤对照组和MSCs移植组。暴露大鼠胸10脊髓段做半横断损伤,其中在损伤对照组脊髓损伤处移植PLLA纳米纤维支架,在MSCs移植组脊髓损伤处移植MSCs-PLLA纳米纤维支架复合体。术后两组动物观察60d。HE染色观察结构改变,免疫组织化学方法观察炎症细胞及MSCs的存活情况。结果体外成功构建MSCs-PLLA纳米纤维支架复合体。扫描电镜显示,PLLA纳米纤维支架由相互贯穿的微孔组成。荧光显微镜和扫描电镜下均可见MSCs能够很好地黏附在支架上,分布较均匀。移植术后60d,HE染色显示,PLLA纳米纤维支架与脊髓组织融合较好,无明显空洞和瘢痕。CD68免疫组织化学显示,在移植物与宿主脊髓交界处有少量阳性细胞,表明有轻微炎症反应。GFP免疫组织化学显示,移植在脊髓损伤处的PLLA纳米纤维支架内有大量阳性MSCs,表明MSCs在移植术60d仍有存活。结论PLLA纳米纤维支架与大鼠脊髓组织有较好的生物相容性。

白细胞介素10与肝移植急性排斥反应研究进展

肝移植患者术后虽然使用免疫抑制剂,但也可能发生急性排斥反应,出现肝功能下降、移植物损伤等不良预后,是早期移植失败的主要原因及影响移植后患者长期生存的危险因素。白细胞介素10(IL-10)是主要由Th2细胞产生的抑制性细胞因子,具有抑制体内Th1型细胞因子的产生、降低单核细胞表面主要组织相容性复合体Ⅱ的表达、阻断巨噬细胞作用等功能,下调一系列免疫反应。由于对免疫耐受的重要作用,在肝移植排斥反应的机制、预测、诊断以及治疗方面,IL-10得到了广泛深入的研究,是最有研究前景和价值的细胞因子之一。

胚胎嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤影响功能恢复的因素

目的:探讨胚胎嗅鞘细胞移植晚期脊髓损伤患者后,影响其功能恢复的因素。方法:①取胚胎嗅球,消化成单个嗅鞘细胞后培养12～17d待用。②选择2001-11/2004-01首都医科大学附属北京朝阳医院和北京西山医院收治的脊髓损伤、志愿接受胚胎嗅鞘细胞移植的患者300例,其中完全性损伤222例,不完全性损伤78例。病程0.5～31年,平均3.1年。将胚胎嗅鞘细胞移植到脊髓损伤部位的上下处。③所有患者在胚胎嗅鞘细胞移植手术前和手术后2～8周按ASIA标准评价和随访,比较年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平对胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的影响。结果:①按ASIA标准评价神经功能有部分功能快速恢复,其中运动功能由术前(39.1±20.6)分提高到(45.9±20.3)分(P<0.001),轻触觉由术前(51.7±24.9)分提高到(63.4±23.0)分(P<0.001),痛觉由术前(53.0±24.2)分提高到(65.3±22.7)分(P<0.001)。②手术前ASIA级别为A级者222例,术后38例改善为B级,46例为C级。③除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外,年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平等因素比较没有显著性差异。结论:胚胎嗅鞘细胞移植能快速帮助晚期脊髓损伤患者恢复部分神经功能,但除损伤水平中颈段运动和轻触觉分数高于胸段外,年龄、受伤时间、性别、损伤程度和损伤水平并不是影响胚胎嗅鞘细胞移植后功能恢复的因素。

供体特异性抗体在肾移植中的诊治进展

随着免疫抑制剂的不断更新及应用,抗体介导的排斥反应(AMR)正逐渐成为肾移植术后排斥反应发生的主要类型,其发生与供体特异性抗体(DSA)存在密切的关系。DSA不但能介导急性AMR,也能介导慢性排斥反应,此外,即使术前淋巴细胞毒交叉配型阴性结果的患者,也不能排除AMR的发生。所以对于肾移植术后的排斥反应,应特别关注其是否由DSA引起。本文就供体特异性抗体(DSA)概念、DSA介导的AMR发生的机制、DSA介导的AMR诊断、DSA介导的AMR治疗及预防策略进行综述,以期有助于后续的临床和实验研究。