Peyer’s结淋巴细胞对上皮屏障功能的影响

目的 :体外建立稳定的上皮细胞与Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)共培养体系 ,进一步研究该体系中的上皮细胞生理学特性。方法 :采用短路电流检测单层上皮细胞跨上皮电阻 (TER)的变化、半定量RT PCR方法检测上皮细胞间的紧密连接相关蛋白ZO 1和ZO 2mRNA的表达。结果 :①Caco 2细胞单层与PPL共培养的第 2天 ,无论是混合共培养还是上下共培养组的TER均与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;②同时上下共培养或混合共培养组在第 8天TER仍保持较高水平 ,与对照有统计学差异 (P <0 0 5 ) ;③在上下共培养和混合共培养组中 ,半定量RT PCR检测ZO 1mRNA的表达也均明显高于对照。结论 :Peyer’s结淋巴细胞 (PPL)可以较好地维持上皮屏障功能。

ALOX5AP的SNPs与我国北方汉族脑梗死的关联研究

目的探讨5-脂氧合酶激活蛋白基因(ALOX5AP)与脑梗死免疫遗传相关性。方法采用双脱氧末端终止法(dideoxy chain termination method)基因测序技术分析方法,对29例脑梗死(CI)患者和41例性别、年龄相匹配健康人的脂肪氧合酶激活蛋白基因(ALOX5AP)的SNPs进行了检测分析。结果各组ALOX5AP基因5个SNPs的检测结果表明:①CI病例组ALOX5AP基因SG13S100的杂合型(A/G)出现频率与对照组比较,差异显著(x^2=3.542,P<0.05);②CI病例组ALOX5AP基因SNPs位点SG13S114(A/T)和SG13S32(A/C)频率高于对照组,差异不显著(P>0.05);③CI病例组男女间SG13S100(A/G)分布差异显著,男性患者SG13S100(A/G)频率明显高于女性(P<0.05)。结论认为ALOX5AP基因上的部分SNPs位点SG13S100的杂合子(A/G)基因型可能与我国北方汉族人的男性脑梗死相关。SG13S100的变异(A/G)可能改变了FLAP的活性,从而造成动脉粥样硬化而致病。

华支睾吸虫CsSP16.4基因的克隆、序列分析和功能预测

目的通过筛选cDNA文库识别华支睾吸虫新基因;克隆并构建重组表达载体,为进一步研究其功能及其应用价值奠定基础。方法对华支睾吸虫cDNA文库进行筛选,通过Blastn程序进行序列比对,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifscan,NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行结构域分析及进化树分析。结果筛选得到的序列长725bp,应用VecterNTI分析,理论分子量为16.4kDa,理论等电点(pI)为6.44,疏水氨基酸(AILFWV)占36%,带电荷氨基酸(RKHY-CDE)占29%,极性氨基酸(NCQSTY)占28.8%,酸性氨基酸(DE)占8.65%和碱性氨基酸(KR)占9.21%。应用NCBI站点的ORFFinding分析发现其含4个可能的ORF,其中最长的ORF,从第42到第494bp,起始密码为ATG、终止密码为TAG,完整阅读框含450bp,编码150aa。发现该基因有潜在的2个糖激化位点、3个N肉豆蔻酰化位点和1个蛋白激酶C磷酸化位点。结论确定该基因为华支睾吸虫分泌蛋白基因,为作为诊断候选抗原提供了依据。

贴壁法体外培养纯化鼠骨髓间充质干细胞

目的研究贴壁法体外分离、纯化及增殖鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),并进行鉴定。方法取出生5d的Wistar乳鼠的股骨及胫骨,冲取骨髓,采用贴壁法分离筛选分离鼠的MSCs,通过传代进行纯化,增殖,测定其生长曲线,检测生长周期,流式细胞仪分析表面抗原。结果贴壁培养法能够有效地分离鼠的MSCs,MSCs形态为均一的梭形,生长曲线呈S型,细胞周期显示第三代细胞约有80.89%处于G0/G1期,第三代以后细胞表面抗原CD90阳性,CD34、CD45阴性。结论建立了一种较好的体外培养、纯化及扩增鼠MSCs的方法,适用于MSCs的进一步研究。

应用Caco-2细胞模型进行毒性中药研究的思路

本文概述了Caco-2细胞模型的基本特点、培养方法及其在中药研究方面的应用,提出了应用Caco-2细胞模型对毒性中药进行研究的新思路。

脑梗死与HLA-DRB亚型的关联研究

目的探讨HLA-DRB基因与我国北方汉族人脑梗死(cerebral infarction,CI)免疫遗传相关性。方法采用基因芯片分析方法,对31例脑梗死患者及无血缘关系阴性对照组41例检测分析人类白细胞抗原(HLA)-DRB等位基因及亚基因。结果CI病例组DRB1*04、DRB1*3(17)位点频率与对照组比较,差异显著(P<0.05);CI病例组DRB1*12与对照组比较,差异非常显著(P<0.01),HLA-DRB其他位点在病例组及对照组未见明显差异。结论DRB1*04、DRB1*3(17)可能为CI的易感基因表现型,DRB1*12可能为该病的保护基因表现型。

衰老细胞中热休克转录因子1的异常调节和定位

为评估人热休克转录因子1(HSF1)在衰老细胞中呈现年龄依赖功能失调机制,通过凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)和RNA酶保护实验等了解低总体倍增水平(PDLs)的年轻和高PDLs的衰老IMR90双倍体人肺纤维母细胞的HSF1 DNA结合活性、HSF1蛋白质及其编码转录子mRNA水平和亚细胞分布.使用H2O2诱导年轻IMR90细胞成为“应激诱导早熟性老化(SIPS)”细胞,并与复制性衰老细胞比较HSF1 DNA结合活性、HSF1亚细胞分布和细胞内过氧化物含量.在不同年龄的IMR90细胞中,无论体内或体外,HSF1激活能力与细胞年龄呈反相关,但细胞内HSF1蛋白质与其mRNA水平并无改变.HSF1的亚细胞定位分析显示,HSF1主要存在于年轻细胞胞质中,热刺激促使三体形成和核转移;而在衰老细胞中,37℃时HSF1大部分存在于细胞核内,热刺激后形成三体,与DNA结合能力明显比年轻细胞弱;用H2O2诱导的应激成熟前老化细胞内,HSF1功能和亚细胞分布都与复制性衰老细胞相似.结果显示,细胞年龄与HSF1的激活和定位相关,而与HSF1含量无关,这些变化可能是通过氧化修饰所致.

芍药苷对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型T细胞作用机制研究

目的:探讨芍药苷(Paeoniflorin)对牛Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型(Collagen-induced arthritis,CIA)T细胞作用机制。方法:采用牛Ⅱ型胶原诱导DBA/1J小鼠建立CIA模型,二次免疫时随机分为两组,一组用芍药苷治疗,另一组用磷酸盐缓冲液治疗作为对照,每天进行临床评分;发病高峰期处死小鼠,HE染色法观察关节病理学变化;3H-甲基胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法检测小鼠脾脏细胞和CD4+T细胞增殖反应;流式细胞技术检测T细胞亚群比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠脾脏细胞培养上清中炎性因子分泌情况。结果:芍药苷治疗组小鼠临床评分显著低于对照组(P<0.05);治疗组CD3抗体和CD28抗体刺激的脾脏细胞和CD4+T细胞增殖能力明显减弱(P<0.05),治疗组CII刺激的脾脏细胞和CII特异性CD4+T细胞增殖能力明显减弱(P<0.01);治疗组Th1和Th17细胞亚群比例低于对照组(P<0.01);治疗组脾脏细胞培养上清中IFN-γ和IL-17含量低于对照组(P<0.05)。结论:芍药苷可能通过抑制致病性T细胞增殖,降低Th1和Th17细胞亚群比例,减少炎性细胞因子分泌,从而缓解CIA病情。

RhoC、Bmi-1在食管鳞癌中浸润转移及其与预后的关系

目的探讨食管鳞癌组织中RhoC、Bmi-1基因表达及其对预后的影响。方法采用免疫组织化学方法检测RhoC、Bmi-1基因在80例食管鳞癌患者中的表达,应用检验、COX回归模型和Kaplan-Meier生存曲线检测分析其与患者预后的关系。结果在食管癌组织中RhoC、Bmi-1蛋白表达明显高于食管正常黏膜组织(72.5%和30.0%,78.8%和5.0%,P<0.05)。RhoC、Bmi-1的表达与食管浸润深度、淋巴结浸润有关(P均<0.05),但与年龄、民族无关。RhoC和Bmi-1的表达呈正相关(r=0.338,P<0.05)。10年总生存率为20.0%。单因素Kap-lan-Meier生存分析表明,食管癌RhoC、Bmi-1高表达组较低表达组有生存优势,但差异无统计学意义。Cox模型多因素分析表明,RhoC和Bmi-1不是影响生存期的独立因素,而肿瘤浸润深度和转移是影响生存期的独立因素。结论 RhoC、Bmi-1在食管癌组织中表达均较高,其表达水平与食管肿瘤的发生发展有一定的关系,结合临床病理可作为判断预后的指标。

血吸虫病免疫病理研究进展

血吸虫病主要病理变化是宿主肝组织内虫卵的沉积诱发虫卵肉芽肿及其后的纤维化病变。在动物模型的相关研究已显示Th1细胞主要参与血吸虫虫体抗原的免疫调节反应,而虫卵衍生抗原主要介导Th2细胞免疫反应。研究证明Th1细胞、Th2细胞、巨噬细胞、Treg细胞和IL-17分泌型淋巴细胞对调节虫卵肉芽肿反应和肝脏的纤维化过程起重要作用。

一例中国重型肝炎病人乙型肝炎病毒基因组全序列的测定

用聚合酶链反应（PCR）产物直接和克隆后序列分析，测定1例重型肝炎病人感染的HBV变异毒株全基因组序列，该毒株长3221个碱基，为adw亚型，与同一地区HfuAg阳性无症状携带者感染的adw亚型全序列比较，有35个罕见和独特的核着酸改变，导致27个氨基酸替代，其中前C和C基因变异最多，这一毒株在多种调节序列，包括启动子SPI、SP11、XP、增强子ENI和EN11，也存在变异。但并无日本毒株的X区和ENHll－CP的聚集变异。结果说明我国重肝HBV毒株有独特的变异特点。

高脂饮食诱导小鼠血糖增高损伤睾丸微血管功能

目的观察高脂饮食诱导C57BL/6雄性小鼠血糖升高对睾丸微血管功能及雄性生殖的影响。方法将小鼠随机分为对照组(control)和高脂组(HFD),各20只。HFD组高脂饮食20周,每周测血糖及体质量;腹腔注射伊文思蓝观察血睾屏障通透性;激光多普勒检测睾丸微循环血流量及微血管自律运动频率和振幅;HE染色观察睾丸组织形态;免疫组化检测睾丸微血管血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)及生精细胞增殖细胞核抗原PCNA表达;TUNEL染色法观察生精细胞凋亡。结果 HFD组小鼠体质量及血糖均高于对照组(P<0.01);血睾屏障完整性破坏,生精小管通透性增高;睾丸平均血流灌注水平及微血管自律运动频率和振幅均低于对照组(P<0.01);生精上皮细胞数量减少、生精上皮变薄;微血管内皮细胞CD31及生精细胞PCNA表达水平均低于对照组(P<0.01);生精细胞凋亡水平高于对照组(P<0.01)。结论高脂饮食可诱导小鼠血糖水平增高致睾丸微血管损伤破坏血睾屏障完整性使小鼠生精上皮结构受损。

抗乙肝免疫核糖核酸对乙肝病毒标志物临床转归初探

我院自1993年4月对慢性乙型肝炎病毒感染者32例采用抗乙肝免疫核糖核酸(抗乙肝iRNA)治疗进行对比观察,现将资料总结如下:

浓缩人用狂犬病疫苗的免疫效果观察

浓缩人用狂犬病疫苗的免疫效果观察扬裕华，陶小润，张进贵，苏军英，崔嵩，郑大明我国自１９８１年开始使用地鼠肾细胞培养狂犬病疫苗（ＰＨＫＣＶ）以来，仍有免疫失败的病例［１］。国内外普遍采用的暴露后治疗性接种，对于狂犬病短潜伏期者很难予以保护［２，３］。我...

基于《黄帝内经》中“气象医学观”探讨类风湿性关节炎的发病规律

从《黄帝内经》中的气象病因病理学思想探讨类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)的发病规律,即从季节、天气、时辰和环境四个方面阐述气候环境变化与该疾病的关系;发现冬春两季类风湿性关节炎的发病率和疾病活动度较高,夏季较少,而秋季最少;其次,天气转凉或气流昏暗、夜间及阴暗潮湿的环境是类风湿性关节炎发病的高危因素。揭示《黄帝内经》中的气象医学思想对类风湿性关节炎的认识和防治工作仍然具有现实指导意义。

6种抗体联合检测类风湿性关节炎的临床意义

目的比较类风湿因子(RF-IgM,IgA,IgG)、抗角蛋白抗体(AKA)、抗核周因子(APF)、抗环胍氨酸肽抗体(anti-CCP)诊断类风湿性关节炎(RA)的敏感性及特异性,并探讨6种联合检测对RA诊断的意义。方法采用ELISA检测RF-3(RF-IgM,IgA,IgG)和抗CCP抗体,间接免疫荧光法检测AKA和APF。共检测76例RA患者、98例非RA患者和30例健康者。结果 RF-IgM、RF-IgA、RF-IgG、AKA、APF和抗CCP对RA的敏感性分别为71.1%、44.7%、28.9%、42.1%、48.7%、68.4%,特异性分别为78.9%、85.9%、89.1%、89.8%、91.4%、93.8%。联合检测3种抗体、4种抗体、5种抗体和6种抗体,敏感性及特异性分别是RF-3(RF-IgG,IgA,IgM)为27.6%和92.2%,RF-3/AKA为19.7%和94.5%,RF-3/APF为23.7%和96.1%,RF-3/抗CCP抗体为26.3%和96.1%,RF-3/AKA/APF为18.4%和97.7%,RF-3/AKA/抗CCP抗体为15.8%和99.2%,RF-3/APF/抗CCP抗体为15.8%和99.2%,RF-3/AKA/APF/抗CCP抗体为13.2%和100.0%。结论诊断RA的6种相关抗体中RF-IgM的敏感性最高,但特异性最低;抗CCP的特异性最好,抗CCP最具诊断价值;RF与AKA、APF、抗CCP联合检测可进一步提高对RA诊断的特异性,对RA的早期诊断具有重要的应用价值。

云南省12例并殖吸虫病临床资料分析

目的探讨并殖吸虫病的流行病学特征、临床表现、实验室检查、诊断、治疗与预后的特点,提供完善的资料供临床参考。方法收集和分析2011-2019年云南省收治的12例并殖吸虫病患者临床资料。结果患者来自云南省7个地市,人群特征以男性、汉族及学生为主;流行病学史明确日临床表现多样;血常规检验嗜酸性粒细胞及血小板增高、像学检查可发现受损组织器官的改变、并殖吸虫抗体ELISA检查阳性率为100%。病理检查获斯氏狸殖吸虫幼虫2例;临床分型为胸肺型2例,肺外型6例,混合型4例;10例病例有肺外感染,其中皮下包块5例、腹腔4例、肝脏3例、心包2例、脑1例。患者确诊前往往长期误诊误治,予吡喹酮和阿苯达唑联合治疗1~4疗程后均痊愈。结论并殖吸虫能侵犯人体不同组织器官,临床表现缺乏特异性,常误诊误治;血常规检验嗜酸性粒细胞及血小板增高应高度怀疑并殖吸虫感染,并殖吸虫抗体ELISA检查阳性率高,发现病原体可确诊;流行病学对诊断有重要意义;吡喹酮和阿苯达唑联合治疗效果较好。