狂犬病毒载体的构建与鉴定

目的构建狂犬病毒载体,为新型疫苗研究提供依据。方法将狂犬病毒减毒株SAE基因组分段扩增,然后经逐步拼接得到全基因组克隆,并在其中引入转录终止-起始元件和多克隆位点获得重组质粒pSAETOPO。将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和西尼罗病毒prME基因分别克隆至pSAETOPO,然后将带有这两个基因的狂犬病毒全长cDNA切下并克隆至pcDNA3.1(+)载体。将获得的重组质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME转染细胞,分别观察辅助病毒对外源基因表达的影响。结果获得狂犬病毒载体质粒pcSAE-GFP和pcSAE-ME,经酶切分析和序列测定表明所构建克隆是正确的。pcSAE-GFP及pcSAE-ME转染细胞后,在辅助病毒存在下可表达相应外源基因。结论构建的狂犬病毒载体质粒可表达外源基因,为进一步获得表达外源基因的重组狂犬病毒奠定了基础。

热量限制延缓衰老相关研究的知识图谱分析

目的可视化分析近十年关于热量限制延缓衰老相关研究文献,探讨该领域的研究现状和热点。方法检索Web of Science核心合集数据库2012年1月至2021年12月的相关文献,运用CiteSpace 5.8 R3软件对筛选文献的作者、机构、国家、关键词及共被引文献和作者进行知识图谱分析。结果共纳入2986篇文献,主要的研究国家和机构是美国的国家老龄化研究所;发文最多和被引频次最高的作者分别是RAFAEL DE CABO和FONTANA L;热点关键词主要是热量限制、氧化应激、基因表达、胰岛素抵抗、肥胖等。结论近十年热量限制延缓衰老相关研究的年发文趋势较为平稳,不断探索热量限制延缓衰老的潜在机制,发现更多药物作用靶点和干预措施是该领域的研究热点。

凝血酶对骨髓基质干细胞功能的影响

目的探讨凝血酶对骨髓基质干细胞功能的影响。方法小鼠骨髓基质干细胞取自于4周龄C57BL/6J小鼠双侧胫骨和股骨的新鲜骨髓,细胞增殖的检测采用5-溴-2-脱氧尿嘧啶嵌入测定试剂盒,细胞迁移的测定通过细胞计数法,细胞凋亡是根据4,6-二氨基-2-苯基吲哚所染细胞核形态的改变来辨认。结果凝血酶可以促进骨髓基质干细胞剂量依赖性的增殖、抑制细胞的凋亡,但不影响细胞的迁移。结论结果表明凝血酶对骨髓基质干细胞增殖和凋亡均有影响,这种影响可能有助于保障组织修复过程中所需的细胞的数量,这种功能可能是凝血酶在组织损伤修复过程中起保护作用。

汉滩病毒核壳蛋白（NP）在杆状病毒系统的表达及其免疫原性研究

应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒７６－１１８株（ＨＴＮＶ）核壳蛋白。将ＨＴＮＶＳ基因插入杆状病毒转染质粒ｐＡｃＹＭＩＢ的多角体基因启动子下游附近，与经Ｂｓｕ３６Ｉ酶切线性化的杆状病毒（ＡｃｖＥＰＡ）ＤＮＡ共同转染Ｓｆ９细胞，经空斑筛选获得了高效表达ＮＰ的重组杆状病毒（ＡｃＶＨａｎＳ）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实，表达产物与ＨＴＮＶ毒粒ＮＰ分子量均为５０ｋＤ左右，紫外扫描显示表达量约占细胞总蛋白量的１２．１％，ＥＬＩＳＡ滴度达１：３２００～１：６４００。用一批抗ＮＰ单克隆抗体和病人血清证实，重组ＮＰ与毒粒ＮＰ的免疫反应性完全一致。

依布硒诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其机制的研究

目的探讨依布硒对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法应用CCK-8法观察不同浓度依布硒作用于人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞8、24、48、72 h后细胞活力及增殖情况,同时应用Hoechst染色检测细胞凋亡,JC-1检测细胞线粒体膜电位,ROS探针观察依布硒对细胞内活性氧的影响,Western blot检测Bcl-2、Bax、细胞色素C等凋亡相关蛋白及Caspase9激活情况。结果依布硒能够显著抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡,40μmol/L依布硒使凋亡率达(80.8±3.9)%;同时依布硒能升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位;此外依布硒可诱导细胞色素C从线粒体向胞浆释放但并不激活Caspase9。结论依布硒可诱导多发性骨髓瘤细胞发生非Caspase依赖的细胞凋亡,其机制可能与ROS水平升高有关。

饮食热量限制延缓衰老作用的研究进展

本文综述热量限制延缓衰老及其机制。无论是整体动物还是器官组织或细胞水平的研究均提示热量限制能延缓衰老,但其机制至今不明。目前有能量代谢理论、氧化应激理论、神经内分泌假说和细胞凋亡抑制等几种解释,并得到一定的实验研究支持,但没有一种理论能完全阐明热量限制延缓衰老的现象,在将实验研究结果推广于临床前仍有许多工作要做。

免疫因素在特发性炎症性肌病中的作用机制

特发性炎症性肌炎包括多发性肌炎,皮肌炎及包涵体肌炎,是一组以肌肉组织的炎细胞浸润,肌无力为主要特点,浸润的炎细胞是以T淋巴细胞和巨噬细胞为主,个别也有B淋巴细胞。本文主要综述了T、B淋巴细胞、DC及其它APCs在IIMs中的病理生理作用。

β_2-糖蛋白I/ox-LDL免疫复合物与抗磷脂综合征血管疾病关系的研究进展

β_2-糖蛋白I(β_2-GPI)是抗磷脂综合征(APS)患者体内的主要自身抗原,其可以同氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)等阴性物质结合形成稳定的β_2-GPI免疫复合物。β_2-GPI免疫复合物以及抗β_2-GPI免疫复合物抗体的免疫机制显著促进抗磷脂综合征患者动脉粥样硬化斑块损伤和血栓形成。本文从β_2-GPI/ox-LDL免疫复合物及其抗β_2-GPI/ox-LDL免疫复合物抗体的形成和病理作用进行综述,并重点介绍β_2-GPI-DⅤ阻断β_2-GPI/ox-LDL复合物形成的机制,为β_2-GPI/ox-LDL免疫复合物引起的动脉粥样硬化等心血管疾病提供可能的药物靶点和治疗思路。

城乡少年儿童的行为问题及防制对策探讨

目的探讨分析城乡少年儿童行为问题及防制对策。方法随机选取市区与农村的普通幼儿园、小学、初中各一所，年龄在5～15岁的学生，展开Conners儿童行为问卷调查，有效的Conners父母问卷以及教师问卷共998份，城市样本500份，农村样本498份。结果Comers父母问卷调查中，农村少年儿童行为问题评分高于市区少年儿童（P〈0．05）；Comers教师问卷调查中，农村少年儿童的品行问题、注意力／被动行为、多动指数评分高于市区少年儿童（P〈0．05），具有统计学意义。结论农村少年儿童存在的行为问题要多于城市少年儿童，特别以13--15岁年龄组最为明显，对少年儿童的心理健康发展有着重大影响。为此，一定要深入分析少年儿童的行为问题，给予高度重视，开展健康教育，采取有效的防制对策，确保少年儿童身心的健康成长。