DNA修复基因XPD多态性在中国汉族(四川泸州)和泰国人群中的分布特点

目的:分析DNA修复基因着色性干皮病基因DLys751Gln基因型频率和等位基因频率在中国汉族(四川泸州)和泰国人群中的分布特点,并比较其在两个群体中的分布有无差异。方法:实验于2006-01进行。选择150名无血缘关系的泸州医学院附属医院健康体检者,均为汉族,25～65岁,平均45岁;140名泰国无血缘关系个体,均来自曼谷地区,年龄25～63岁,平均46岁。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性、聚丙烯酰胺凝胶电泳银染显色方法检测所有受试者的Lys751Gln等位基因频率和基因型频率。采用Promega公司的统计学软件PowerStats进行Hardy-Weinberg平衡检测,应用χ2检验或Fisher确切概率法分析Lys751Gln等位基因及基因型频率在中国汉族、泰国及其他人群中的分布是否有差异,采用SPSS11.5软件完成。结果:290名受试者全部进入结果分析。①基因型Lys/Lys,Lys/Gln和Gln/Gln在泸州汉族人群中的频率分别为72.67%,27.33%和0.00%,在泰国人群中的频率分别为87.86%,12.14%和0.00%。②基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,采用χ2检验或Fisher确切概率法进行统计分析,两个人群中基因型频率和等位基因频率分布有显著性差异(P<0.05)。结论:Lys751Gln基因多态性在中国汉族(四川泸州)和泰国人群中的分布有显著性差异,其多态性分布存在地域和种族差异。

人可溶性白介素1受体编码区基因的体外扩增

目的 研究可溶性白介素 1受体 (sIL 1R)在哺乳动物真核细胞中的表达 ,为牙周病的基因治疗奠定基础。方法 从人牙龈成纤维细胞中提取总RNA ,设计特异性引物 ,上游引物 (P1)为 :5′ggccggtaccATGAAAGTGTTACTCAGACTTATT 3′ ;下游引物 (P2 )为 :5′gagctcgagttaCTTTCTGGAAATTAGTGACTGG 3′。采用RT PCR技术体外扩增人IL 1R(Ⅰ )胞外部分成熟肽编码区基因。结果 抽提得到的人牙龈成纤维细胞总RNA经 1 5 %琼脂糖凝胶电泳得到 2 8s、18s两条清晰条带 ;RT PCR产物经 1 5 %琼脂糖凝胶电泳 ,在 1kbmarker条带处出现特异性条带。结论 通过RT PCR技术 ,成功地扩增得到人sIL 1R(Ⅰ )编码区基因 ,大小约 1kb 。

听神经病谱系障碍患者DIAPH3基因临床遗传学特征研究

目的对中国听神经病谱系障碍患者进行DIAPH3基因的筛查,了解中国听神经病谱系障碍人群中是否存在DIAPH3基因的新突变及热点突变位点,并结合临床表型与基因型进行研究,探讨DIAPH3基因相关的听神经病谱系障碍患者的临床遗传学特征。方法选取2003—2013年我院确诊的并接受血样采集的125例听神经病谱系障碍患者,同时选取100例听力正常的健康志愿者作为对照。采集外周静脉血,提取基因组DNA,采用直接测序法进行DIAPH3基因突变的检测,选用DNAStar软件和Sequence Scanner软件进行序列比对分析。同时分析患者的临床特征,从临床表型与基因型两方面进行系统研究,探讨DIAPH3基因相关的听神经病谱系障碍患者的临床遗传学特征。结果在125例听神经病谱系障碍患者中,共发现DIAPH3基因外显子区域的22处变异,包括可能致病突变7处(c.1425G>A,c.1749T>C,c.2605A>C,c.-44C>G,c.-179G>A,c.-27C>T和c.*196A>T)。结论此7种突变均于中国听神经病谱系障碍人群中发现,在国内外尚未见报道,可能为听神经病谱系障碍相关的突变,有待于进一步的研究。

稳定转染EDA基因的人牙乳头间充质细胞的建立

目的建立稳定转染EDA基因的人牙乳头间充质细胞。方法构建EDA真核载体pIRES2-EGFP-EDA,用脂质体将其转染人牙乳头间充质细胞,加G418选择培养液筛选稳定转染EDA的人牙乳头间充质细胞,并采用免疫荧光法鉴定。结果成功构建了EDA真核载体pIRES2-EGFP-EDA质粒,并筛选出稳定转染EDA的人牙乳头间充质细胞。结论EDA基因可以在人牙乳头间充质细胞中得到稳定的表达。

IL-1β及IL-1Ra基因VNTR多态性与儿童热性惊厥的相关性研究

目的探讨IL-1β基因外显子5多态位点Taq I及IL-1Ra基因可变串联重复序列(VNTR)多态性与儿童热性惊厥的相关性。方法应用聚合酶链反应法和限制性片段长度多态性方法,观察60例热性惊厥患儿、60例年龄和性别相匹配的同期体检健康儿童(对照组)的IL-1β基因外显子5多态位点Taq I及IL-1Ra基因VNTR多态性的分布情况。结果 IL-1β基因外显子5多态位点Taq I三种基因型(C/T、C/C、T/T)及等位基因C、T分布频率在FS组和对照组中比较差异无统计学意义(P﹥0.05)。IL-1Ra VNTR基因型(A1/A1、A1/A2、A1/A3)及等位基因A1、A2、A3在FS组和对照组中有统计学意义(P<0.05)。采用logistic回归分析,对照组中A2型等位基因和A1/A2基因的分布频率与FS组相比明显增加(P<0.05)。结论 IL-1Ra A2等位基因在热性惊厥的发生发展过程中可能具有潜在的保护作用。

加强眼底病基因研究，为防盲治盲作出更大贡献

难治的致盲性眼底疾病许多与基因变异密切相关。其中，部分由基因变异直接致病；部分由于基因变异增加了发病的风险。基因研究将会为难治的致盲性眼底疾病的预防和治疗带来革命性变化。新一代测序技术结合外显子组分析技术的广泛应用，将推动眼底病基因研究的飞速发展；针对常见眼底病开展大样本合作研究，推动眼底病基因研究成果在防盲治盲的临床转化应用，将是未来几年的发展趋势。加强眼底病基因研究，有望为防盲治盲作出更大贡献。

MTHFR基因多态性对宝安地区女性卵巢早衰的影响及其治疗

目的研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因多态性对宝安地区女性卵巢早衰的影响,从而为临床治疗方案的制定提供指导作用。方法选取2017年9月至~2018年9月就诊于深圳市宝安区石岩人民医院的卵巢早衰汉族育龄妇女100例为研究对象,检测并分析患者MTHFR基因多态性分布情况,对比治疗前后患者叶酸治疗前后的AMH水平,分析患者MTHFR基因多态性与卵巢早衰的关系。结果患者MTHFR基因CC型人数占比最低,而MTHFR基因CT型、TT型人数占比高于CC型(均P<0.05)。患者治疗后血清AMH水平相比治疗前较高较高(P<0.05)。根据Pearson法分析相关性后发现,患者MTHFR基因多态性与卵巢早衰呈正相关(P<0.05)。结论 MTHFR基因多态性可能参与了宝安地区女性卵巢早衰的发生、发展过程,叶酸可能是有效治疗卵巢早衰的手段之一,值得重点关注。

淮安市男男性行为人群感染HIV-1的分子特征研究

目的了解江苏省淮安市男男性行为(men who have sex with men,MSM)人群感染HIV-1的基因亚型分布和分子特征。方法以现住址为淮安的HIV-1确证感染者为研究对象,利用巢式逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法扩增env基因片段,测序并进行分子进化分析。结果淮安市MSM人群感染的HIV-1基因亚型有5种,分别是CRF01-AE(68.21%,118/173)、CRF07-BC(16.76%,29/173)、CRF08-BC(0.58%,1/173)、CRF55-01B(1.16%,2/173)及B亚型(13.29%,23/173)。系统进化分析显示淮安流行的毒株与云南、辽宁、广西、江苏及湖南分离的同源性高,在进化树上与对应亚型的参考株聚集成簇。流行的优势亚型CRF01-AE中共检测出58个单倍型,单多样性指数(0.999)和核苷酸的多样性指数(0.150)显示淮安市株具有较高的遗传多样性。结论淮安市MSM人群感染的HIV-1存在多样性,其中CRF55-01B为首次在淮安市MSM感染人群发现,CRF01-AE是淮安市MSM人群中感染的主要流行株。

冷冻对父源印记基因H19DNA甲基化影响的长时程效应研究

目的检测冷冻及冷冻时间长短对精子的父源印记基因H19印记控制区域（ICR）的DNA甲基化程度的影响.方法以15例健康男性精液为研究对象,将每份精液样品除留少许作为对照外,其余分为两部分（每部分又等分为若干份）,一部分连同精浆一起进行程序化冷冻,另一部分则去除精浆后冷冻,并分别于冷冻后1个月、3个月和6个月时,通过亚硫酸氢盐测序PCR的方法分析H19ICR的DNA甲基化状态.结果连同精浆一起冷冻的精子样品,冷冻1个月、3个月和6个月后,H19ICR的 DNA甲基化丢失率分别为（13.62±2.06）%、（14.88±1.96）%和（15.89±2.26）%,与对照相比（12.74±2.85）%差异无统计学意义（P〉0.05）;去除精浆后冷冻的精子样品,冷冻1个月、3个月后,H19ICR的 DNA甲基化丢失率分别为（15.24±1.91）%、（13.49±2.63）%,与对照相比差异无统计学意义（P〉0.05）,而冷冻6个月后,H19ICR的 DNA甲基化丢失率高达（30.92±3.08）%,差异极显著（P〈0.01）.结论程序化冷冻对精子H19DNA甲基化的影响具有长时程的累积效应,本研究为少精子症患者或者无精子症患者通过经附睾精子抽吸术（PESA）取精后的精子冷冻保存的安全期限提供了一定的参考依据.