LPS对培养大鼠肺微血管内皮细胞AQP-1表达的影响

目的 通过观察脂多糖 (LPS)刺激下对肺微血管内皮细胞水通道蛋白 1(AQP 1)表达的影响 ,为进一步研究急性肺损伤时肺水异常代谢的机制提供实验依据。方法 采用体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞 ,使用浓度为 10 0ng、1、10 μg ml的LPS与之孵育 2、4、6、8h ,应用免疫细胞化学方法以及RT PCR法检测AQP 1的表达。 结果 LPS刺激组AQP 1表达显著低于正常对照组 (P <0 0 1) ;AQP 1表达下降与LPS刺激浓度有关。结论 LPS刺激下AQP 1表达下降 ,提示AQP

pCEP4/hIL-17真核表达载体的构建及表达

目的构建pCEP4/hIL-17载体及在真核细胞中表达hIL-17/mFc融合蛋白;初步研究IL-17生物学特性。方法采用RT-PCR的方法克隆hIL-17CDS段基因序列;将测序正确的hIL-17序列插入pCEP4质粒构建pCEP4/IL-17真核表达载体,转染中华仓鼠卵巢(CHO)细胞后,筛选阳性表达细胞株;并用RT-PCR、ELISA和Western blot等法鉴定IL-17基因的mRNA和蛋白表达;流式细胞术分析纯化的蛋白对Raji细胞表达的hIL-17受体的结合能力;以体外实验验证其促炎症作用。结果成功构建了pCEP4/hIL-17重组载体,并在CHO细胞中稳定表达;所获得hIL-17重组蛋白能稳定结合Raji细胞上的IL-17受体;体外刺激HeLa细胞,能明显促进IL-6等炎症因子的分泌。结论稳定表达hIL-17重组蛋白的CHO细胞系的建立,为进一步研究hIL-17的生物学功能奠定了良好的基础。

miR-143通过抑制AF9调控SKM-1细胞增殖和凋亡

目的探讨miR-143在骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)中的表达情况及AF9对人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1增殖和凋亡的影响。方法利用实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测收集的33位MDS/AML患者以及11位健康人(健康对照)的骨髓标本中miR-143的表达;细胞实验分为过表达组(SKM-1细胞感染含LV-hsa-miR-143的慢病毒载体)、低表达组(SKM-1细胞感染含LV-hsa-miR-143-inhibitors的慢病毒载体)和阴性对照组(SKM-1细胞感染含空病毒LV-control的慢病毒载体),分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测各组SKM-1细胞增殖、周期和凋亡情况;双荧光素酶报告基因检测miR-143对下游靶基因AF9在转录水平的影响;Western blot测定miR-143对下游靶基因AF9蛋白表达水平的影响。结果与健康对照比较,MDS患者的miR-143相对表达水平明显降低(P <0. 05);过表达组的光密度值在第3天为(0. 562±0. 069),明显低于阴性对照组(P <0. 05);低表达组的光密度值在第3天为(1. 537±0. 094),明显高于阴性对照组(P <0. 05);过表达组G0/G1期细胞比例为(57. 92±3. 58)%,明显高于阴性对照组(P <0. 05);低表达组G0/G1期细胞比例为(29. 73±2. 44)%,明显低于阴性对照组(P <0. 05);过表达组细胞凋亡率为(29. 80±2. 53)%,明显高于阴性对照组(P <0. 05);而低表达组细胞凋亡率为(5. 17±1. 04)%,明显低于阴性对照组(P <0. 05);miR-143可以显著抑制AF9 3’-UTR野生型的报告基因活性;低表达组AF9蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P <0. 05)。结论 miR-143在MDS患者中的相对表达水平明显减低;过表达miR-143后骨髓增生异常综合征SKM-1细胞增殖活性降低、G0/G1期细胞阻滞增多、凋亡率增加;同时miR-143能够负性调节其靶基因AF9。