应用基因芯片研究环孢素对大鼠肝脏基因表达的影响

目的研究环孢素对大鼠肝脏基因表达谱的影响。方法大鼠予以环孢素灌胃1次,摘取肝脏提取总RNA。用Cy3和Cy5 两种荧光物质分别标记阴性对照组和环孢素组肝组织cDNA,制备成探针与表达谱芯片进行杂交,获得的荧光信号图象用计算机扫描后进行数据分析,计算每点的Cy5和Cy3信号强度比值。结果在被检测的4096个基因中,环孢素组差异表达基因50个,占芯片基因总数 1．22％,其中表达上调的基因17个,表达下调的基因33个。结论环孢素的免疫抑制、抗肿瘤作用以及与其他药物的相互作用可能与一系列代谢相关基因的表达变化有关。

抑癌基因WWOX与相关基因p73、Bax在结直肠癌中的表达及意义

目的探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因(WW domain containing oxidoreductase,WWOX)的表达与结直肠癌生物学行为及p73、Bax表达的相关性。方法应用免疫组化Envision二步法检测58例结直肠癌中WWOX、p73及Bax的表达,并以20例结直肠黏膜炎症为对照。结果①WWOX、Bax在结直肠癌组织中的阳性率分别为25.86%、58.62%,显著低于结直肠黏膜炎症的65%、85%(P<0.01,P<0.05);二者在结直肠癌中的表达与患者的预后相关(P<0.01,P<0.05),且WWOX的表达在癌组织与浸润深度相关(P<0.05);②p73在癌组织中的阳性率显著高于炎症组(63.79%vs 30%,P<0.01),在结直肠癌中的表达与淋巴结转移及浸润深度有关(P<0.05);③WWOX与p73的表达无关(χ2=0.072,P>0.05),而与Bax的表达有关(χ2=6.561,P<0.05)。结论 WWOX、p73及Bax参与调控结直肠癌的发生、发展,且WWOX与Bax协同作用,在结直肠癌的预后中扮演了重要角色。

骨保护素和碱性成纤维生长因子pIRES载体的构建及初步鉴定

目的构建pIRES-opg-fgf2真核分泌表达穿梭载体,为进一步构建双表达重组腺病毒载体,并应用基因工程技术联合组织工程技术治疗牙周病的研究打下基础。方法将具有抑制破骨细胞功能的opg基因和促进细胞增殖分化和趋化粘附的作用的fgf2基因重组到pIRES载体中。结果编码opg基因片段和fgf2基因片段重组到pIRES载体,重组质粒经酶切、PCR鉴定,电泳显示均能得到与预期大小相符的片段。结论本研究成功构建了pIRES-opg-fgf2表达穿梭载体。

CRISPR基因编辑技术在肿瘤研究中的应用

自2013年研究人员第一次展示成簇的规律间隔的短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeat,CRISPR）基因编辑技术在真核细胞基因编辑方面的巨大潜力之后,近几年在生物研究的各领域产生了革命性影响。在肿瘤研究方面,从基础研究到临床研究,再到转化医学的应用,CRISPR基因编辑技术均显示出强大的生命力和广泛的应用前景。

C-erbB2、c-myc和CCND1 mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的应用

目的建立荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测C-erbB2、核内原癌基因(c-myc)和细胞周期蛋白D1(CC-ND1)mRNA水平,探讨其联合检测在乳腺癌诊断和治疗监测中的应用。方法建立FQ-PCR法,并以β2-微球蛋白为内对照测定15名健康女性体检者(正常对照组)、30例良性乳腺疾病患者(良性乳腺疾病组)和121例乳腺癌患者(乳腺癌组)外周血中C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平。结果 C-erbB2、c-myc和CCND1的mRNA水平在正常对照组和良性乳腺疾病组间差异无统计学意义(P>0.05),乳腺癌组均高于前两组(P<0.05),β2-微球蛋白三组间差异无统计学意义(P>0.05);三种mRNA联合检测的阳性率高于单个mRNA的检测。结论 FQ-PCR技术可快速定量检测C-erbB2、c-myc和CCND1的mR-NA,三者联合检测可有效提高对乳腺癌诊断的阳性率。

基因陷阱是小鼠基因功能研究的有力工具

人类基因组计划完成以后,小鼠的基因组计划也相继完成,但这仅仅是人类探索生命奥秘的重要一步,科学家将对基因组进行更加深入的研究,破译不同基因的功能,为人类战胜疾病、提高生命质量提供参考。大规模诱变、转基因动物、基因剔除是研究基因功能的重要技术,但是用这些技术逐一研究30000多个基因的功能是几乎不可能的任务。在研究30000多个基因生物学功能的任务中,科学家拥有了一个新工具,基因陷阱技术。这是一种导致小鼠体内大量基因发生突变,借此确定这些基因功能与表型关系的一种技术方法。

胃镜下瘤内注射重组人p53腺病毒治疗晚期食道癌的安全性及短期疗效观察

目的探讨重组人p53腺病毒(rAd-p53)瘤内注射治疗晚期食道癌的安全性及临床可行性。方法 2008年9月至2011年7月我院对11例晚期食道癌患者实施胃镜直视下瘤内注射rAd-p53,每周1次,每次1×1012VP,一个疗程为8周。结果治疗后2月,肿瘤缩小1例(9.09%),无变化8例(72.73%),增大2例(18.18%);除自限性发热外,无明显不良反应。结论胃镜下瘤内注射rAd-p53短期无明显毒副作用,能较好地抑制局部肿瘤的发展,尤其对失去手术机会,不能耐受放化疗的患者,是一种可行的方法。

靶向Notch1基因siRNA真核表达载体的构建与鉴定

目的:构建并鉴定靶向Notch1基因的siRNA真核表达载体。方法:根据Notch1基因cDNA序列,设计靶向目的基因的3个siRNA靶序列,将其插入U6启动子下游,克隆到真核表达载体pGsensil中,并进行酶切鉴定和DNA测序鉴定。采用脂质体介导法将构建好的3个siRNA表达载体分别转染T24人膀胱癌细胞中,荧光下观测转染效率。RT-PCR检测Notch1基因mRNA在转染前后的表达。结果:转染48h后3个siRNA表达载体均不同程度的抑制了Notch1 mRNA的表达。酶切鉴定及DNA测序结果显示插入片断正确。结论:成功构建的靶向Notch1的siRNA真核表达载体,具有抑制Notch1基因mRNA表达的功能,可能为膀胱癌基因治疗研究提供一个新的方向。

用射线照射的B7-1转基因细胞进行肿瘤疫苗的研究

目的探讨用放射的B7-1转基因细胞进行肿瘤疫苗疗法的效果。方法将重组人B7-1基因真核表达载体导入CAK-1肾细胞瘤细胞,利用转基因细胞治疗观察其抗肿瘤效果。结果转基因细胞的肿瘤原性较CAK-1/Wt、CAK-1/pCDNA3组明显降低(P<0.001)。同时免疫原性明显增强,以^(60)Co照射的CAK-1/B7-1细胞免疫后,小鼠体内诱发了抗CAK-1/Wt的系统性、保护性免疫。用^(60)Co灭活的转基因细胞作为瘤苗进行实验性治疗,能够延长小鼠的生存时间,减慢肿瘤的生长速度,CAK-1/B7-1的应用提高了肿瘤治疗效果(P<0.01)。结论放射的转基因细胞及其表达的B7细胞因子可以有效地激发机体的抗肿瘤免疫应答,B7-1表达肿瘤细胞应用可以成为一种很有前景的肿瘤疫苗。

pcDNA3.1-FKBP12.6基因表达载体的构建及扩增

目的构建并扩增pcDNA3.1-FKBP12.6基因表达载体。方法目的基因全基因合成,PCR加入酶切位点,连接入pGEM-Teasy载体,经酶切鉴定及测序后获得测序正确的目的基因。连接入真核表达载体pcDNA3.1(-),再经酶切鉴定及测序后进行pcDNA3.1-FKBP12.6的扩增。结果成功构建并扩增pcDNA3.1-FKBP12.6基因表达载体。结论pCDNA3.1-FK-BP12.6表达载体的构建,为深入研究FKBP12.6基因对心肌细胞结构和功能的影响奠定基础,进而为探索安全、高效的心肌功能异常的治疗提供新的途径。

吉西他滨、氟尿嘧啶、亚叶酸钙联合治疗老年晚期食管癌临床疗效及其对血清胰岛素样生长因子-1和转化生长因子-β_1的影响

目的探讨由吉西他滨(GEM)、氟尿嘧啶(5-FU)、亚叶酸钙(LV)组成的GLF联合化疗方案治疗老年晚期食管癌的临床疗效及其对患者血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法选取老年食管癌患者68例为研究对象,行锁骨下静脉穿刺或经外周静脉穿刺中心静脉置管,予以GLF方案,检测患者血清IGF-1及TGF-β1水平,评价疗效,记录无进展生存期(PFS)与总生存期(OS)及治疗过程中的不良反应。结果患者治疗2～6个周期后,客观缓解率为54.41%,疾病控制率为76.47%,中位PFS为6.2个月,中位OS为10.5个月,不良反应发生率为14.71%。治疗后血清IGF-1及TGF-β1水平均明显降低,差异具有高度统计学意义(P<0.01)。结论 GLF联合化疗方案治疗老年晚期食管癌具有较好临床效果,抑制了血清IGF-1及TGF-β1的活性,在提高患者生存质量、延长生存期方面具有较好的作用,且具有较高的安全性,比较适合于老年晚期食管癌的临床治疗。

蛋白质组学及其在肝细胞肝癌中的研究进展

肝细胞肝癌是世界上病死率最高的恶性肿瘤之一。蛋白质组学是以生物体系整体蛋白质为研究对象,其研究以双向凝胶电泳和质谱技术为核心,旨在研究蛋白质表达谱和蛋白质与蛋白质之间相互作用的新领域,已被广泛应用于疾病的相关研究。随着后基因组时代的到来,运用蛋白质组学技术对肿瘤的研究已经成为人们关注的焦点。本文着重就蛋白质组学在肝细胞肝癌中研究进展予以综述。

+Gz暴露对飞行员肾功能尿液检测指标的影响

目的观察中等水平＋Gz暴露对飞行员尿微量白蛋白（microalbumin，MA）、尿α1微球蛋白（a1microglobulin，α1M）及尿常规十项检测指标的影响。方法33名歼击机飞行员接受离心机基础＋Gz耐力检查，最高加速度暴露水平为＋4．25G／10s，观察了10名飞行员＋Gz暴露后2h和23名飞行员＋Gz暴露后次日清晨上述尿液指标的变化情况。结果离心机检查前，

凝固酶阴性葡萄球菌qacA／B基因的检测分析

目的探讨凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）qacA／B耐消毒剂基因、耐药基因存在状况，为临床提供CNS对消毒剂的潜在耐药信息。方法收集临床标本中分离出的CNS，并根据其对头孢西丁的敏感性分为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）和甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌（MSCNS）两组，采用聚合酶链反应（PCR）检测qacA／B基因，并对组间检出率进行比较。结果38株CNS中qacA／B基因阳性13株（占34．2％），其中MRCNS35．7％，MSCNS30．0％。结论CNS的qacA／B基因携带率较高，且MRCNS菌株与MSCNS菌株组间携带率无统计学意义。MSCNS携带qacA／B基因为国内首次报道。

B7-1转基因细胞株的表达和检测

目的构建B7-1基因真核表达载体并导入CAK-1肾癌细胞表达,为进一步研究基因的功能做材料准备。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,以正常肝脏组织cDNA为模板,扩增B7-1基因全长读码框架,并构建到真核表达载体pCDNA3.1中,将其导入CAK-1肾细胞瘤细胞,对转染后的细胞进行RT-PCR和Western blot分析。结果克隆测序结果证实,B7-1读码框架被成功插入真核表达载体pCDNA3.1的相应位点,与pCDNA3空载体转染对照细胞相比,pCDNA3-B-7载体转染的CAK-1细胞中B-7基因mRNA水平和蛋白水平均有明显升高。结论 B7-1转基因细胞株的成功构建和检测,为深入研究B7-1蛋白的生物学功能奠定了材料基础。

蛋白质组学技术在肾脏病诊治领域相关研究进展

近年来,蛋白质组学技术发展迅速,本文较系统地综述了该技术在深入了解肾脏的生理功能、揭示肾脏病的发病机理及辅助肾脏疾病诊治等领域的相关研究进展,对进一步利用蛋白质组学技术研发有效的肾脏损伤标志物具有一定参考价值。

微生物全基因组测序在预防医学领域的应用

病原微生物引起传染病疫情时,预防医学工作者会面临以下几个重要问题:1病原从哪里来,可能的传播途径是什么;2病原有哪些生存能力、毒力和耐药特性;3病原所致疾病有着怎样的流行规律。高通量测序技术以及与之相伴的信息学分析技术的飞速发展,为上述问题提供了新的思路和解决方案。本文从流行病学调查溯源、病原体特性的快速判定、疾病流行规律分析以及疫苗变异监测和使用效果评价四个方面,总结归纳了新一代全基因组测序技术在预防医学领域中的应用实例,并对该研究方向存在的问题及未来发展进行了展望。

恩替卡韦治疗慢性HBV感染者KIR基因多态性与疗效的相关性研究

目的探讨慢性HBV感染者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulin-like receptor,KIR)基因多态性及其与应用恩替卡韦疗效差异相关性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,对60例应用恩替卡韦治疗的慢性HBV感染者(试验组)和60例健康对照者(对照组)的KIR基因进行基因分析,比较试验组和对照组的差异。60例患者中18例为治疗完全应答者(完全应答组),42例为非完全应答者(非完全应答组),比较2组之间差异。结果通过试验组和对照组的16种KIR基因分析,框架基因KIR2DL4、3DL2、3DL3和3DP1存在于所有个体中,其基因频率均为1.0。试验组KIR 2DS2和KIR2DS3基因型频率高于对照组(P值依次为0.038和0.035);完全应答组KIR2DS1、KIR3DS1和KIR2DL5基因型频率高于非完全应答组(P值依次为0.010、0.029和0.018)。结论 KIR2DS2、KIR2DS3可能是HBV的易感基因型,KIR2DS1、KIR3DS1、KIR2DL5可能与恩替卡韦抗HBV治疗有效应答有关。

HCV非结构蛋白5B复合酶切分型方法的建立及应用

目的建立灵敏有效的HCV6a型非结构蛋白(non-structural protein,NS)5B复合酶切分型方法,探讨NS5B区与5'-端非编码区(5'-noncoding region,5'-NCR)的分型是否一致。方法应用5'-NCR复合酶切分型方法对1093份HCVRNA阳性血清样本进行分型,并筛选基因6a型样本进行NS5B区的扩增,对第2轮PCR产物进行复合酶切分型和测序,并经NCBI Genoty ping证实基因分型。结果 5'-NCR分型法检出10份HCV6a型样品,序列分析显示均存在第145位CA碱基插入和第139位C碱基插入特征。用NS5B分型法检测此10例,均为6a型,序列分析证实存在EaeⅠ酶切位点。结论 NS5B区与5'-NCR区复合酶切分型方法对HCV6a分型具有良好的一致性,以EaeⅠ切点为主的NS5B区复合酶切分型方法可供临床应用。