杂交探针技术结合熔解曲线快速鉴别水痘-带状疱疹病毒野毒株/疫苗株

目的利用杂交探针结合熔解曲线分析技术，建立一种快速、可靠的适用于鉴别水痘一带状疱疹病毒（Varicella—zosterVirus，VZV）野毒株与疫苗株的方法。方法采集临床诊断为水痘患者的水疱液并进行病毒分离，抽提阳性分离物和部分阳性水疱液的基因组脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid，DNA）。以荧光素Cy5．5标记检测探针5端，相应的锚定探针在3端用FAM羧基荧光索标记，再从研究对象基因组DNA中用聚合酶链反应（PolymeraseChainReac—tion，PCR）特异引物扩增ORF62基因中301碱基对（basepair，bp）片段，将其与特异探针杂交后，引发荧光共振能量转移，通过罗氏LightCycler实时PCR仪描绘扩增的目标DNA片段的熔解曲线，根据熔解温度（MeltingTemperature，Tm）峰值对待测标本进行鉴别。最后，用限制性片段长度多态性（RestrictionFragmentLengthPolymorphism，RFLP）方法验证杂交探针结合熔解曲线鉴别野毒株／疫苗株的准确性。结果VZVOka疫苗株的扩增产物与检测探针的Tm为52．47℃，而水痘原始临床标本／临床分离株与检测探针的Tm在57．33℃～60．50℃。通过检测DNA扩增产物与VzVORF62探针Tm的差异可以明确鉴别VZV野毒株和疫苗株。利用杂交探针技术结合熔解曲线的方法对水痘原始临床标本及分离株进行野毒株／疫苗株的鉴别结果与传统的RFLP方法进行鉴别的结果完全一致。结论杂交探针技术结合熔解曲线操作简便省时，不易交叉污染；获得的病毒野毒株／疫苗株特征性强，适用于VZV野毒株／疫苗株在临床和流行病学调查中的快速鉴别诊断。

染色体异常对IVF-ET妊娠结局的影响

目的探讨体外受精助孕中染色体异常对妊娠结局的影响。方法2009年1月到2011年8月期间，对接受体外受精的1584对不孕不育夫妇进行外周血染色体检测，对其助孕过程进行回顾性分析。根据染色体检测结果，常规分为染色体异常组和染色体正常组，其中染色体异常包括染色体多态性改变和非多态性改变。探讨两组受精率、有效胚胎率、妊娠率、早期流产率等相关指标的关系。结果在1584对夫妇中，染色体异常病例106例，男方染色体异常62例，女方染色体异常38例，有3对夫妇双方染色体均异常。染色体异常组与染色体正常组相比，受精率、有效胚胎率、妊娠率等因素无差异，但是流产率在染色体异常组升高（P值分别为0．021〈0．05）。结论在体外受精中，染色体异常可能会增加流产的风险，在助孕前应该进行染色体核型检查，对染色体异常患者应该进行遗传咨询。