三种DNA抽提方法对新鲜血细胞及冻血细胞DNA抽提效能的比较

目的比较3种血细胞DNA提取方法(进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚抽提方法)对新鲜血细胞及冻血细胞DNA的提取效率及差异。方法收集20例胰腺癌患者5mL外周血标本,经低速离心获得血细胞沉淀后分装,根据保存方式分为新鲜血细胞和冻血细胞。新鲜血细胞不经冻存,在12h内迅速抽提DNA;冻血细胞在-40℃保存72h后,室温解冻后抽提DNA。抽提方法分别采用进口试剂盒(Qiagen公司)、国产试剂盒(天根生化科技有限公司)和改良苯酚方法。琼脂糖电泳检测DNA片段的完整性,核酸蛋白检测仪测定DNA纯度和浓度,计算不同抽提方法的DNA得率。结果在获得的DNA完整性方面,改良苯酚方法抽提的基因组DNA断裂和降解较少,而进口和国产试剂盒抽提的DNA均有一定程度的降解小片段。在获得DNA的纯度方面,部分冻存血细胞无论应用进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚方法,均表现出一定的污染杂峰。在DNA得率方面,无论新鲜血细胞和冻存血细胞,均是进口试剂盒得率最高,其次为国产试剂盒;冻血细胞的改良苯酚法DNA得率与国产试剂盒相当,新鲜血细胞的改良苯酚法DNA得率最低。在耗时和成本分析中,试剂盒较快但成本较高。结论改良苯酚抽提法可获得较进口和国产试剂盒片段更长、更完整的基因组DNA,虽然在得率和耗时方面稍逊色,但其成本较低,可推荐用于大规模、分批次、低成本冻存血细胞的基因组DNA抽提。

福建范德伍兹综合征1例家系IRF6基因突变的检测

目的检测福建省一范德伍兹综合征(VWS)家系IRF6基因的突变。方法在IRF6(interferonregulatoryfactor6)基因内设计引物,经分段聚合酶链反应(PCR)和DNA测序进行突变检测,运用PIX-ProteinIdentification软件对检测结果进行蛋白二级结构分析。结果在所有患者IRF6基因的第379密码子发现TGG>TGA(r.1400g→a)的碱基变化,该突变引入终止码,引起IRF6蛋白转录提前终止。结论范德伍兹综合征由IRF6基因突变引起,IRF6基因与唇腭、牙齿发育密切相关。

体外铁加载对血小板聚集的影响

缺血性心脑血管病为动脉粥样硬化血栓形成性多病因临床疾病,日渐成为现代工业化国家发病与死亡的首要原因,血液流变性障碍为其主要决定因素之一.铁作为体内一种主要的氧化剂,可通过诱导LDL氧化而与动脉粥样硬化形成与进展相关.为此我们对健康体检的中老年人血小板聚集功能受铁加载影响的结果作检测分析.

血液标本放置时间对电解质检测结果影响的分析

目的:分析血液标本放置时间对电解质检测结果的影响和预防体会。方法:将150例健康体检者的血液标本,用全自动生化分析仪分别在即时、1、2、3、4h进行检测,对其结果进行统计、分析和研究。结果:K+、Na+、Cl-、Ca2+在3h和4h的检测值明显升高,CO2CP在3h和4h后明显下降,P<0.05,差异显著。结论:血液标本采集后,放置时间越长,电解质实际检测值会发生显著变化,明显偏离实际正常值;为确保检测准确性,应尽量在标本采集2h内完成检测。

血清胆固醇和甘油三酯测定质控物和室内质控小结

利用各种控制物与病人标本同时操作,用统计学参数绘制质量控制图,观察控制物的分析误差,建立一个较精密和敏感的控制程序,可以及时发现因技术操作、试剂变化和仪器性能改变等引起的误差,

人外周血淋巴细胞染色体G带制备关键因素分析

人外周血淋巴细胞染色体G显带技术是目前开展细胞遗传学研究的基础。整个染色体制备过程繁琐,主要包括细胞接种、收获、制片、消化及显带等步骤,而各个实验室操作差异较大,目前无统一的标准,且上述任何步骤的改变均会影响染色体核型制备的最终效果。本文就染色体G显带技术的制备进行综述,以期为染色体G显带核型分析制备出形态完好,大小适中,分散均匀,轮廓清楚的中期染色体标本提供借鉴。