淋巴瘤免疫组织化学标志物的合理应用

对多数病理医生尤其是初学者而言,淋巴瘤病理诊断较为困难。主要有两方面原因:(1)淋巴瘤发病率低,在所有恶性肿瘤中排名第10位[1],世界范围内我国淋巴瘤发病率远低于美国和其他发达国家[2],因此在一般非肿瘤专科医院的病理医生的日常工作中并不常见。(2)与多数实体肿瘤单纯形态观察即可诊断不同,淋巴瘤诊断需结合形态与免疫表型且淋巴瘤分类复杂[3],初学者难于掌握。

CCNE1表达水平与卵巢癌术后抗血管生成治疗反应性及预后的关系

目的探讨细胞周期蛋白E1(CCNE1)表达水平与卵巢癌术后抗血管生成治疗反应性及预后的关系。方法选取2019年6月至2021年6月该院收治的卵巢癌患者206例为研究对象,采用免疫组织化学染色分析术后(抗血管生成治疗前)CCNE1表达水平,根据组织学评分分为CCNE1高表达组和CCNE1低表达组,观察两组术后抗血管生成治疗反应,治疗2个疗程后比较两组客观缓解率(ORR)。同时随访2年,观察卵巢癌患者预后情况(以出现死亡为预后不佳),采用多因素Logistic回归分析筛选影响卵巢癌患者术后抗血管生成治疗反应性的相关因素,采用Cox回归分析影响卵巢癌患者预后的相关因素。结果治疗2个疗程后,CCNE1高表达组的ORR为65.63%,明显高于CCNE1低表达组的49.30%(P<0.05)。治疗反应患者肿瘤最大径、CA125水平低于无反应患者(P<0.05),CCNE1高表达比例高于无反应患者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,CCNE1高表达是卵巢癌患者抗血管生成治疗无反应的保护因素(P<0.05),CA125水平升高、肿瘤最大径增大均是卵巢癌患者抗血管生成治疗无反应的危险因素(P<0.05)。随访2年,6例失访(CCNE1高表达组2例,CCNE1低表达组4例),最终纳入200例,其中92例预后良好,108例预后不佳。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,CCNE1高表达组的生存率低于CCNE1低表达组(Log-rankχ^(2)=7.554,P=0.006)。预后良好组肿瘤最大径、手术残余病灶最大径均小于预后不佳组(P<0.05),CCNE1高表达比例低于预后不佳组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,术后残余病灶最大径增大、CCNE1高表达、肿瘤最大径增大均是卵巢癌患者术后抗血管生成治疗预后不佳的独立危险因素(P<0.05)。结论术后CCNE1表达水平是卵巢癌患者术后抗血管生成治疗反应性的影响因素,同时也是卵巢癌患者预后的影响因素。

白细胞介素-6对胰腺癌小鼠癌组织的细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的 探讨白细胞介素-6(IL-6)在胰腺癌裸鼠模型癌组织增殖与上皮间质化中的作用,并分析其分子机制。方法 将18只成功构建胰腺癌细胞荷瘤的BALB/c裸鼠模型随机分为模型对照组、IL-6过表达组和免疫球蛋白G(IgG)抗体组,每组6只。模型对照组于肿瘤部位注射生理盐水进行干预,IL-6过表达组于肿瘤部位注射IL-6过表达质粒进行干预,IgG抗体组予肿瘤部位注射IgG抗体进行干预。3组均于末次给药24 h后处死小鼠,并收集胰腺肿瘤组织。对各组肿瘤组织进行离体称重并计算抑瘤率。通过苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺组织的病理学改变。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组裸鼠肿瘤组织中IL-6、p-STAT3、NF-κB p65和VEGF蛋白的表达水平。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组肿瘤组织中E-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组IL-6、p-STAT3、SOCS3基因的表达水平。结果 3组裸鼠胰腺肿瘤组织的平均瘤重及抑瘤率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,模型对照组肿瘤组织细胞体积增大,癌细胞排列呈巢状;IL-6过表达组可见肿瘤组织轻度纤维化,少量炎症浸润;IgG抗体组可见核分裂象,大量肿瘤细胞坏死,局灶组织纤维化。IL-6过表达组E-cadherin蛋白、SOCS3基因表达水平低于模型对照组和IgG抗体组,而Vimentin、MMP-9、IL-6、p-STAT3、NF-κB p65、VEGF蛋白的表达水平及IL-6、NF-κB p65基因的表达水平高于模型对照组和IgG抗体组,差异均有统计学意义(P<0.05);IgG抗体组Vimentin、MMP-9、IL-6、p-STAT3、NF-κB p65、VEGF蛋白的表达水平及IL-6、NF-κB p65基因的表达水平低于模型对照组,而E-cadherin和SOCS3基因水平高于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-6可以通过p-STAT3和(或)NF-κB p65信号通路调节胰腺癌裸鼠模型肿瘤组织中的相关细胞因子,影响肿瘤组织的增殖及上皮间质化。

介绍一种密闭冰冻组织块转移盒的设计与应用

冷冻切片为新鲜组织不经过任何固定脱水等处理,直接在低温恒冷切片机冷冻后进行切片。手术中活体组织是通过生物安全运输箱方式送检,但经过取材后的组织块仅用镊子、手拿、托盘等直接转移至冷冻切片机内。这种开放式的转移方式会造成组织块中病原体以直接或间接暴露传播,增加了职业接触风险,危害了医务人员的健康。识别到以上风险后,2022年国家知识产权局公布了一项专利[1],一种密闭冰冻组织块转移盒(以下简称转移盒)来转移组织块,严防污染医务人员和周围环境。转移盒适用于医院病理科等需要进行冷冻切片的环境,尤其是处理潜在感染性或感染性标本,现介绍如下。

不同标记液在细针穿刺组织病理制片中的应用研究

细针穿刺技术已广泛应用于体表肿物,肝、肺、淋巴结、胰腺、甲状腺、乳腺以及前列腺等疾病的诊断,并结合液基细胞学技术的发展,为不同系统的疾病早期诊断提供了可靠的保证。细针穿刺样本较细小,在组织处理过程中容易出现丢失,且与石蜡分辨度低,对后续的包埋切片染色容易造成困难。已有研究表明,在微小组织取材时进行预染,可很大程度上提高组织的辨识度,尤其在包埋以及切片时。文献中常用的活检小标本预染方法很多,大致可分为两类。一是采用的预染标记液不同,包括苏木素染液、水溶性伊红染液及醇溶性伊红染液等。由于伊红是酸性染料,组织成分的等电点3.3~5.2,着色后的组织经10%中性缓冲甲醛液固定,pH>5.0伊红的结合能力下降,染液结合牢度减弱,在乙醇脱水过程中易快速褪色[1]。二是采用的预染方式不同,主要分为滴染与浸染两种方式。苏木素染液应用在95%乙醇浸染法中,整个脱水盒都能明显看到黑紫色沉渣,这些容易造成后续小组织包埋视野不清,增加了包埋难度,而且苏木素残渣可能发生脱水机管道堵塞[2]。

快速探针与传统探针在乳腺癌HER-2检测中的对比分析

乳腺癌一直是威胁女性健康的首要恶性肿瘤,其发病率也在逐年上升。临床研究表明,曲妥珠单抗是一种靶向HER-2的人源化单克隆抗体,对于HER-2阳性的浸润性乳腺癌患者具有显著的抗肿瘤作用[1]。《中国乳腺癌新辅助治疗专家共识(2022年版)》指出,对于伴有高危因素HER-2阳性的乳腺癌患者可以优先选择新辅助治疗[2]。因此,对浸润性乳腺癌患者进行准确快速的HER-2检测已成为重要的治疗手段。本文采用快速探针和传统探针分别进行杂交2 h、16 h的FISH检测,比较两种探针的染色效果与计数结果,摸索出更准确快捷的检测方法,现介绍如下。

利用TSA/Opal技术实现肾活检石蜡切片多重免疫荧光染色

肾活检病理是肾小球疾病诊断的金标准[1],诊断的手段包括光镜、免疫荧光和电镜。三种观察方法对组织处理的要求不同,因此穿刺的肾活检标本需要人为地进行分割。这一操作容易造成某一观察项目没有肾小球的情况,此外也无法在同一肾小球中同时进行光镜、免疫荧光及电镜观察。尽管在体视镜或普通光学显微镜下分割肾组织可以尽量避免没有肾小球的情况,但操作非常依赖穿刺医师的水平,且对于出现硬化或缺血肾小球的组织,即使在显微镜下辨别穿刺组织中的肾小球亦非常困难。更重要的是,对于仅表现为局灶性病变的疾病,人为分割很可能导致在一个检查项目中观察到病变,在另外的检查项目中观察不到。此外,三种观察手段的观察重点不同,免疫荧光主要观察是否存在免疫复合物及补体的沉积,光镜主要观察整体的形态学改变,电镜则主要观察超微结构异常。尽管三种观察方法是分开的,但我们需要整合三种观察内容对疾病进行整体分析,因此假如在同一肾小球中能同时获得免疫、形态学和超微结构的信息更有利于我们做出准确的诊断和开展发病机制的研究。

circFOXM1作为新型胃癌标志物调控胃癌发生、发展的机制研究

目的分析新型胃癌标志物环状叉头框蛋白M1(circFOXM1)在胃癌发生、发展机制中的调控作用。方法选取2022年1月至2023年4月该院肿瘤科收治的60例胃癌患者作为研究对象,检测其胃癌组织及癌旁组织中circFOXM1的表达水平。根据circFOXM1的表达水平,将60例患者分为circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组。比较circFOXM1高表达组和circFOXM1低表达组的临床病理资料(淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫印迹法检测GES-1、HGC-27、BGC-823、MKN-45、MKN-1细胞中circFOXM1信使RNA(mRNA)、微小RNA(miR)-182-5p mRNA与母亲信号蛋白同源物7(SMAD7)mRNA及SMAD7蛋白的表达水平。体外培养MKN-45细胞,将其随机分为对照组、circFOXM1敲低组[转染circFOXM1小干扰RNA(siRNA)质粒]、circFOXM1过表达组(转染circFOXM1过表达质粒)、共转染阴性对照组(转染空载质粒和miR-182-5p抑制剂阴性对照)、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组(转染circFOXM1 siRNA质粒和miR-182-5p抑制剂),分组转染后,采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测各组MKN-45细胞circFOXM1 mRNA、miR-182-5p mRNA与SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白的表达水平;采用Transwell侵袭及细胞划痕试验检测各组MKN-45细胞侵袭迁移情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组MKN-45细胞增殖情况。取50只裸鼠随机分为对照小鼠组、circFOXM1敲低小鼠组、circFOXM1过表达小鼠组、共转染阴性对照小鼠组、circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,每组10只。将各组MKN-45细胞接种在对应裸鼠右腋附近背部皮下构建胃癌移植瘤模型,饲养4周后检测各组移植瘤裸鼠MKN-45细胞增殖率、肿瘤体积及肿瘤质量。将MKN-45细胞随机分为野生miR-182-5p+空载组、野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组、突变miR-182-5p+空载组、突变miR-182-5p+circFOXM1过表达组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、野生SMAD7+miR-182-5p mimic组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组、突变SMAD7+miR-182-5p mimic组,再按照不同方式对各组MKN-45细胞进行转染。采用荧光素酶报告试验检测各组MKN-45细胞circFOXM1对miR-182-5p、SMAD7的靶向调控。结果circFOXM1低表达组有17例患者,circFOXM1高表达组有43例患者。circFOXM1低表达组和circFOXM1高表达组患者淋巴结转移、肿瘤侵袭深度和临床分期情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。MKN-45、HGC-27、BGC-823、MKN-1细胞中circFOXM1 mRNA、SMAD7 mRNA、SMAD7蛋白表达水平均高于GES-1细胞,miR-182-5p mRNA表达水平均低于GES-1细胞,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组circFOXM1 mRNA表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组和circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1过表达组,低于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05);对照组SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平低于circFOXM1过表达组,高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低组miR-182-5p mRNA表达水平高于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,SMAD7 mRNA及SMAD7蛋白表达水平均低于circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,均低于circFOXM1过表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂组MKN-45细胞侵袭数、迁移率均高于circFOXM1敲低组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1敲低小鼠组MKN-45细胞增殖率低于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,肿瘤体积及肿瘤质量均小于对照小鼠组及circFOXM1敲低+miR-182-5p抑制剂小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。circFOXM1过表达小鼠组MKN-45细胞增殖率高于对照小鼠组、肿瘤体积及肿瘤质量均大于对照小鼠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。野生miR-182-5p+circFOXM1过表达组相对荧光素酶活性低于野生miR-182-5p+空载组(P<0.05)。野生SMAD7+miR-182-5p mimic组相对荧光素酶活性低于野生SMAD7+miR-182-5p mimic阴性对照组(P<0.05)。结论敲低circFOXM1可经上调miR-182-5p而抑制表达SMAD7,从而抑制胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及其体内肿瘤生长,可作为胃癌的新型标志物。

临床血液生化检验标本分析过程中影响检验结果准确性因素探讨

探讨影响临床血液生化检验结果准确性的相关因素。方法 采集血液标本815份,进行临床血液生化检验,结合检验结果,进行专业解读、综合分析,判断检验结果的准确性。结果 检验结果不准确的血液标本37份,其中11份与血液样本采集因素有关(血液标本采集不合格6份,血液量不足5份),11份与送检因素有关(送检时间长),9份与储存因素有关(储存条件不合理),6份与检验因素有关(标本处理不当3份,检验仪器操作不当1份,操作环境不符合无菌标准2份)。结论 在临床血液生化检验标本分析过程中,应该加强对血液样本采集、送检、储存、检验等环节的质量管理,减少影响检验结果准确性的风险因素。

口腔鳞状细胞癌组织中IDO1、KYNU表达情况与临床病理特征及预后的关系

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、犬尿氨酸酶(KYNU)表达情况与病理特征、预后的关系。方法将2018年1月至2020年6月该院收治的98例OSCC患者纳入研究。收集患者OSCC组织标本及对应的癌旁组织标本。采用免疫组化法检测组织中IDO1、KYNU的表达情况,分析IDO1、KYNU表达情况与OSCC患者临床病理特征的关系。采用多因素Cox回归分析OSCC患者预后的影响因素。结果OSCC组织IDO1、KYNU阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。OSCC分化程度低分化、浸润深度(DOI)>5 mm、淋巴结转移、临床分期Ⅲ~Ⅳ期的患者IDO1、KYNU阳性表达率分别高于OSCC分化程度中高分化、DOI≤5 mm、淋巴结无转移、临床分期Ⅰ~Ⅱ期的患者(P<0.05)。OSCC分化程度中高分化、DOI≤5 mm、淋巴结无转移、临床分期Ⅰ~Ⅱ期、IDO1阴性、KYNU阴性患者的3年总生存率分别高于OSCC分化程度低分化、DOI>5 mm、淋巴结转移、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、IDO1阳性、KYNU阳性患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,DOI>5 mm(HR=3.225,95%CI:1.496~6.954),IDO1阳性(HR=3.714,95%CI:1.941~7.105),KYNU阳性(HR=4.150,95%CI:1.887~9.124)是OSCC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论IDO1、KYNU在OSCC患者癌组织中呈高表达,与OSCC的DOI、临床分期、分化程度等特征密切相关,有望作为辅助评估患者预后的标志物。

双胎输血综合征胎盘组织氧化应激状态与胎盘灌注水平的相关性分析

目的探讨双胎输血综合征(TTTS)产妇胎盘组织中氧化应激指标水平与胎盘灌注水平的相关性。方法收集105例双羊膜囊单绒毛膜单卵双胎产妇为研究对象,依据妊娠期是否并发TTTS分为对照组90例和观察组15例。检测2组2条脐带附着点下方胎盘组织中氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)]水平,比较2组胎盘组织中动脉-动脉(AA)吻合最大径、静脉-静脉(VV)吻合最大径、动脉-静脉(AV)吻合最大径、两部分胎盘面积差值比(PTD),分析胎盘组织氧化应激指标水平与胎盘灌注水平的相关性。结果与对照组胎盘A和胎盘B比较,观察组供血端和受血端胎盘组织中MDA水平升高,SOD、GSH-PX水平下降,AA吻合最大径缩小,差异有统计学意义(P<0.05);观察组供血端胎盘组织中MDA水平高于受血端,SOD、GSH-PX水平低于受血端,AA吻合最大径小于受血端,差异有统计学意义(P<0.05);观察组的AV吻合最大径和PTD均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组胎盘中VV吻合最大径比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,对照组胎盘组织中MDA、SOD、GSH-PX水平与AA吻合最大径、PTD均无显著相关性(P>0.05);观察组供血端和受血端胎盘组织中,MDA水平均与AA吻合最大径存在强负相关性,与AV吻合最大径、PTD存在强正相关性(P<0.05),SOD、GSH-PX水平均与AA吻合最大径存在强正相关性,与AV吻合最大径、PTD存在强负相关性(P<0.05)。结论TTTS产妇胎盘组织中存在显著氧化应激失衡,胎盘组织抗氧化活性下降可能是胎盘灌注损伤发生的重要原因。

国际标准化超细针穿刺甲状腺结节不同细胞学采集模式诊断率的比较

目的:评价甲状腺结节穿刺时不同留样顺序对细胞学诊断率的影响。方法:共入选591例甲状腺结节患者的613个甲状腺结节,所有甲状腺结节均行4针细针穿刺,分为两种模式进行。模式一:304个结节穿刺,前2针进行涂片细胞学检查,后2针再进行液基细胞学检查;模式二:309个结节穿刺,前2针进行液基细胞学检查,后2针再进行传统涂片细胞学制片。细胞病理医师采用盲法单独对每份样本进行读片。比较不同细胞学制片方法以及两种模式对细针穿刺诊断率的影响。结果:先液基后涂片的细胞学采集模式总体诊断率为82.2%,显著高于先涂片后液基的模式(74.7%)(P=0.023)。对于直径≥10 mm的结节来说,先液基后涂片的细胞学采集模式总体诊断率为83.2%,同样显著高于先涂片后液基模式的诊断率(75.4%)(P=0.048);同为前2针,单独液基方法诊断率为78.0%,显著高于单独涂片诊断率(63.8%)(P<0.001);对于直径≥10 mm的结节而言,单独液基诊断率为78.3%,亦显著高于单独涂片的诊断率(62.6%)(P<0.001)。结论:使用国际标准化超细针进行甲状腺细针穿刺,先液基再涂片的细胞学采集模式诊断率显著高于先涂片后液基的采集模式;如果仅以一种方式来收取细胞学标本,沉降式液基细胞采集制片的方法诊断率显著优于传统涂片制片方法。

快速超声组织处理技术在乳腺穿刺组织活检中的应用

目的探讨快速超声组织处理系统对乳腺穿刺组织制片及切片染色效果的影响。方法随机选取2023年中国医科大学附属盛京医院病理科的乳腺穿刺标本100例,采用快速超声组织处理技术进行脱水处理(快速组),并对其相应的乳腺切除手术标本做0.3 cm×0.3 cm×0.3 cm取材及常规病理组织处理(常规组),所有病例术前未经新辅助治疗。2组标本脱水完成后均行常规切片。比较2组标本的脱水时间、HE染色效果、荧光原位杂交(FISH)检测结果,采用配对计数资料的Kappa检验比较2组雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER2)免疫组织化学染色结果的一致性。结果快速组脱水时间[(46.70±1.42)min]明显短于常规组[(659.25±6.03)min],2组比较差异有统计学意义(t=987.44,P<0.001);快速组HE染色评分(10.13±1.12)与常规组染色评分(10.15±0.97)比较无统计学差异;免疫组织化学染色结果显示,2组ER表达一致率为92.5%(Kappa=0.794,P<0.05),PR表达一致率为76.25%(Kappa=0.639,P<0.05),HER2表达一致率为72.5%(Kappa=0.610,P<0.05);2组FISH检测结果一致。结论快速超声组织处理具有时间短、污染小、操作简单等优点,其组织切片效果与常规脱水比较无显著差异,值得在小的病理组织标本处理中推广应用。

多灶性/多中心性乳腺癌研究进展

影像学技术的进步使得越来越多的多灶性/多中心性乳腺癌(multifocal/multicentric breast cancer, MMBC)在早期被发现。传统观念认为,MMBC比单灶性乳腺癌(unifocal breast cancer, UBC)预后更差,应积极升级治疗手段。近年来,随着医疗水平的提升,MMBC患者的诊断、个体化治疗、接受保乳手术的安全性等焦点问题需重新被审视。本文将从MMBC流行病学特征、术前影像学评估、病理异质性与分子标志物、手术方式等多方面展开论述,以期加深临床认知。

大切片组织轮转式和平推式切片方法及应用体会

大切片组织(large-section tissue,LS)指使用大尺寸包埋盒(7.5 cm×5.0 cm×0.8 cm)将取材组织石蜡包埋后利用大尺寸切片机制成的组织切片。第一项基于LS的研究是在1906年由Cheatle^([1])发表的,他发现大多数患者在疾病晚期无法治愈时才被诊断出乳腺癌,而LS可以帮助发现微小病灶,利于早期诊断。

两种皮肤小神经纤维PGP9.5染色方法的比较

目前皮肤小神经纤维蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)染色主要为免疫组化中的超敏二步法和卵白素-生物素复合物(avidin biotin complex,ABC)法[1-2],超敏二步法灵敏度较高,而ABC法在神经组织染色方面也具优势,还未见对两种方法的比较研究。本实验室通过对两种PGP9.5免疫组化染色结果的统计学分析及光镜下观察,对比两种染色方法的优缺点。

组织芯片制作仪在制作免疫组化外对照中的应用

目的 免疫组化染是病理诊断过程中重要的检测手段,设置阳性对照尤其重要。本文旨在探讨一种流程简单的使用组织芯片制作仪制作单组织阳性外对照的方法。方法 用组织芯片制作仪中直径2 mm规格的穿刺针在提前备好的空白蜡块上打孔。对照阳性切片的免疫组化染色结果,找出阳性染色部位对应的供体蜡块位置,用直径2 mm规格的穿刺针进行穿刺,并将穿刺出的组织芯注入受体蜡块孔洞中,组织芯片蜡块即制作完成。结果 同一张玻片上,单组织阳性对照呈直径2 mm的圆形,与待检组织界限清楚,阳性定位准确,从而确认了试剂的有效性及染色过程的准确性。结论 用组织芯片制作仪制作单组织阳性对照流程简单,效果良好,适合有条件的单位日常开展使用。

LncRNA CBR3-AS1调节miR-448/TFAM轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)CBR3-AS1对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 收集济南市第五人民医院2021年1月至2022年6月获取的40对CRC组织和邻近癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人CRC组织、癌旁组织和CRC细胞系、正常结直肠上皮细胞中LncRNA CBR3-AS1、微小RNA-448(miR-448)及线粒体转录因子A(TFAM)mRNA表达。根据不同CRC细胞系中LncRNA CBR3-AS1的表达水平筛选后续实验使用的细胞系。验证miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM的靶向关系。在目标细胞中转染靶向LncRNA CBR3-AS1的小干扰RNA(si-CBR3-AS1)、miR-448抑制物(miR-448 inhibitor),采用qRT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LncRNA CBR3-AS1、miR-448及TFAM mRNA和蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验和Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡率、迁移及侵袭能力。结果 CRC组织和细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA呈高表达,miR-448呈低表达,且HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1的表达最高,故选择HCT116细胞进行后续靶向验证和转染实验。经验证,HCT116细胞中miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM均存在靶向关系。转染si-CBR3-AS1可降低HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA和蛋白表达水平,同时降低细胞活力、划痕愈合率、迁移细胞数、侵袭细胞数,升高miR-448表达水平及凋亡率;转染si-CBR3-AS1基础上转染miR-448 inhibitor可减弱干扰LncRNA CBR3-AS1表达对HCT116细胞的影响。结论 干扰LncRNA CBR3-AS1可抑制CRC细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向miR-448/TFAM轴有关。

结直肠癌微卫星不稳定状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变和临床病理特征及预后的关系

目的 探讨结直肠癌(CRC)的微卫星不稳定(MSI)状态与KRAS、NRAS、BRAF基因突变、临床病理特征及预后的相关性。方法 选取2015年3月至2020年12月于汕头市中心医院和中山大学肿瘤防治中心收治的经病理确诊为CRC的861例患者作为研究对象,检测其4种错配修复(MMR)蛋白表达、MSI状态,KRAS、NRAS、NRAS基因突变情况。分析MMR蛋白表达、KRAS、NRAS和BRAF基因突变与CRC患者临床病理特征的相关性,MMR蛋白表达与KRAS、NRAS和BRAF基因突变的相关性,并采用COX回归模型探讨CRC患者2年内死亡的独立影响因素。结果 CRC中的MMR蛋白表达总缺失率为12.08%,KRAS基因突变率为42.28%,NRAS基因突变率为2.21%,BRAF基因突变率为6.50%。不同年龄、肿瘤部位、组织学类型、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CEA水平的患者MMR蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同性别、肿瘤部位、组织学类型、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态、CA199水平的患者KRAS基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同CEA水平的患者NRAS基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤部位、组织学类型、肿瘤最大径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移状态的患者BRAF基因突变比较,差异有统计学意义(P<0.05)。MMR蛋白表达与KRAS基因突变呈负相关(r=-0.137,P<0.001)。MMR蛋白表达与NRAS基因突变不相关(r=-0.007,P=0.834)。MMR蛋白表达与BRAF基因突变呈正相关(r=0.162,P<0.001)。淋巴结转移、KRAS突变、BRAF突变、MSI-H是CRC患者2年内死亡的独立影响因素。结论 MSI状态、KRAS、NRAS、BRAF基因突变与CRC的临床病理特征具有相关性,上述指标的检测有助于CRC的生物学行为分析及预后判断。

液体活检在肺癌早期诊断中的应用研究进展

液体活检是肺癌诊断的一种重要方法,较之传统组织活检,有安全无创、标本易获取、可动态监测等优势,在早期肺癌诊断中有确切价值。本文总结国内外液体活检诊断早期肺癌的研究进展,探讨其在早期肺癌诊断中的价值。