聚合人脐带血红蛋白增敏乳腺癌小鼠化学免疫疗法治疗效果的初步研究

目的探讨聚合人脐带血红蛋白氧载体(PolyCHb)增强小鼠4T1乳腺癌原位瘤化学免疫疗法敏感性的影响。方法构建4T1乳腺癌原位瘤模型,将15只小鼠随机均分为3组,空白组:无干预;对照组:多柔比星(DOX)+PD-1抑制剂(a-PD-1)治疗,腹腔注射DOX 5 mg·kg^(-1)、1次/周,腹腔注射PD-1抑制剂12.5 mg·kg^(-1)、1次/周;实验组:DOX+a-PD-1+PolyCHb治疗,DOX和a-PD-1用法同上,PolyCHb:尾静脉注射600 mg·kg^(-1)、3次/周;给药周期为4周。给药期间记录肿瘤体积3次/周,绘制各组肿瘤生长曲线并计算抑瘤率。29 d处死小鼠,剥瘤后称瘤重;免疫荧光法检测肿瘤组织中HIF-1α的含量;HE染色观察肿瘤组织病理变化;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况;免疫组化法检测肿瘤增殖指标Ki67表达情况。结果与空白组和对照组相比,实验组组肿瘤体积显著减小(P<0.05)、抑瘤率(%)显著提高(P<0.05);实验组肿瘤组织中HIF-1α含量降低(P<0.05);实验组肿瘤组织生长区减少,并伴坏死区增加;各组肿瘤组织细胞凋亡阳性率(%)分别为18.79±0.62、20.68±1.19、41.65±2.99(F=135.2,P<0.001);此外肿瘤增殖指标Ki67结果显示对照组与实验组比较有统计学差异(P<0.05)。结论PolyCHb可以增加乳腺原位瘤小鼠化学免疫疗法的敏感性,其作用机制可能与降低HIF-1α表达,促进细胞凋亡和坏死,抑制肿瘤细胞增殖有关。

胎盘间充质干细胞对胰腺创伤大鼠的保护作用

目的探讨胎盘间充质干细胞(P-MSCs)对胰腺创伤(PT)大鼠的保护作用。方法健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、胰腺创伤组(胰腺损伤区域及创伤周围局部注射1 ml PBS溶液)与P-MSCs组[胰腺损伤区域及创伤周围局部注射1 ml P-MSCs(1×106个/ml)],每组20只。采用400 kPa的致伤压强建立胰腺创伤大鼠模型。于术后1、3、5、7 d每组处死5只大鼠,收集血清及胰腺组织。HE染色观察胰腺组织病理学变化并进行病理损伤评分,ELISA法测定血清中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、转化生长因子-β1(TGF-β1)浓度,以及胰腺组织中髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL法观察胰腺组织细胞凋亡情况。结果与对照组比较,胰腺创伤组与P-MSCs组在胰腺创伤发生后腹腔积液量增加(P<0.05),胰腺/体重比、胰腺组织病理损伤总评分均升高(P<0.05),血清AMS、LPS、TNF-α、IL-6浓度及MPO活性早期升高,随时间延长呈下降趋势(P<0.05),而抗炎因子IL-10浓度及SOD活性随时间延长呈上升趋势(P<0.01),TGF-β1浓度早期下降,随时间延长呈上升趋势(P<0.01),凋亡指数(AI)明显升高(P<0.001)。与胰腺创伤组比较,P-MSCs组大鼠胰腺组织大体形态得以改善,腹腔积液量减少(P<0.001),胰腺/体重比、胰腺组织病理损伤总评分降低(P<0.05),血清AMS、LPS、IL-6、TNF-α浓度及MPO活性更快恢复至正常水平(P<0.05),而抗炎因子IL-10、TGF-β1浓度及SOD活性升高速度增加(P<0.05),AI升高(P<0.001)。结论P-MSCs可促进PT大鼠组织修复,减轻其局部及全身炎症,改善组织氧化应激反应,促进胰腺腺泡细胞凋亡,对PT大鼠具有保护作用。

双胎妊娠与胎盘植入性疾病发生风险的关系分析

目的:探讨双胎妊娠与胎盘植入性疾病(PAS)发生风险的关系。方法:选取2020年5月—2021年9月郑州大学第二附属医院就诊的孕产妇数据信息,一年内总分娩例数6795例,选取其中信息较为完整的且18岁以上的6122例单胎孕产妇为对照组,593例双胎孕产妇为观察组,其中对照组发生PAS者80例,未发生PAS者6042例;观察组发生PAS者32例,未发生PAS者561例。调查并记录两组孕产妇的病历资料及相关信息,包括年龄、孕次、产次、剖宫产次数、受孕方式、有无流产史、孕期是否吸烟、是否前置胎盘,并诊断是否发生PAS,应用logistic回归分析和χ^(2)检验分析双胎妊娠与PAS发生风险的关系。结果:观察组在PAS、年龄、孕次、有流产史、剖宫产次数、前置胎盘、受孕方式上人数占比明显高于对照组,差异有统计学意义(χ^(2)=55.129、4.241、37.138、10.429、32.131、22.484、165.550,P<0.05);而两组孕产妇在产次、孕期吸烟间比较,差异无统计学意义(χ^(2)=0.769、1.083,P>0.05)。双胎妊娠孕妇发生组年龄≥35岁、有流产史、胎盘前置、剖宫产次数3次及以上、人工辅助生殖人数占比显著高于未发生组,差异有统计学意义(χ^(2)=9.211、15.042、47.545、101.664、13.191,P<0.05);而在孕次上比较,差异无统计学意义(χ^(2)=1.918、P>0.05)。对照组与观察组发生PAS的孕妇在年龄≥35岁、有流产史、胎盘前置、剖宫产次数3次及以上、人工辅助生殖上,发生组人数占比明显高于未发生组,差异有统计学意义(χ^(2)=10.064、4.930、13.310、8.409、10.592、9.211、9.027、47.545、86.761、13.191,P<0.05)。对照组及观察组孕妇年龄≥35岁、有流产史、胎盘前置、剖宫产次数3次及以上、人工辅助生殖是发生PAS的危险因素(OR=1.094、1.168、1.632、1.560、1.715、2.072、4.584、6.853、8.024、6.218,P<0.05)。结论:孕妇年龄≥35岁、有流产史、胎盘前置、剖宫产次数3次及以上、人工辅助生殖是发生PAS的危险因素,且双胎妊娠与PAS发生风险密切相关。

人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定

目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带(至少20 cm)冲净淤血,采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2%胶原酶Ⅱ,另一根用0.1%胶原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10 ng/mL的VEGF的培养基中培养,观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞,胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶,且比较理想的消化时间均为13 min,细胞接种后4～5 h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层,光镜下呈多角形,"铺路石"样排列,免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。

脐血有核细胞输注治疗慢性肝衰竭的初步临床观察

目的探讨人脐血有核细胞移植(HUCBNCT)治疗慢性重型肝炎肝衰竭的临床治疗效果,以及HUCBNCT对重型肝炎患者肝组织内胆管增生及肝卵圆细胞增生的影响。方法将90名慢性重型肝炎患者随机分为2组,分别予以同血型成人血浆(对照组)或HUCBNCT(治疗组)治疗,2组中分别有部分患者行肝穿刺病理检查及肝组织细胞角蛋白19(CK19)、CD34、白蛋白和甲胎蛋白(AFP)检测。结果HUCBNCT组患者肝细胞坏死较轻,肝组织CK19阳性率高于对照组;部分非典型胆管增生细胞同时表达CK19和白蛋白,在形态上和细胞表型上符合肝卵圆细胞特征。结论HUCBNCT对于慢性重型肝炎具有一定的疗效,在改善肝脏功能方面优于同血型成人血浆,其促进慢性重型肝炎患者肝组织内非典型胆管细胞增生及肝卵圆细胞增生可能是其作用机制之一。

64077例脐带血病原微生物检测结果分析

目的了解2012—2021年脐带血、母血病原微生物检测情况,为完善脐带血招募采集,确保脐带血造血干细胞安全提供依据。方法回顾性分析天津市脐带血造血干细胞库2012—2021年共分离64077例脐带血、母血病原微生物检测结果。结果2012—2021年64077例脐带血细菌培养检测结果,总阳性2072例(3.23%);其中需氧菌培养阳性184例(0.29%),厌氧菌培养阳性1504例(2.34%),需、厌氧均阳性384例(0.60%)。2012—2021年脐带血细菌阳性率呈下降趋势,每年阳性率有差异(P<0.05),厌氧菌阳性率高于需氧菌阳性率及需、厌氧双阳性率(P<0.05)。细菌阳性标本经革兰氏染色后,镜检检出率G-杆菌依次高于G+杆菌、G+球菌、G-球菌及其他。2012—2021年64077例脐带血和母血输血传染性病原体检测结果,脐带血检测结果有反应性169例(0.26%),母血检测结果有反应性1231例(1.92%)。脐带血及母血HIV-Ag/Ab检测,初筛有反应性标本经蛋白印迹方法确认后母血不确定1例,其余为阴性。脐带血抗-TP、抗-HCV有反应性率(0.12%、0.11%)高于HBsAg(0.03%)及CMV-IgM(1/64077);不同年份脐带血抗-TP检测有反应性率有差异(P<0.05),HBsAg、抗-HCV、CMV-IgM检测有反应性率无统计学意义(P>0.05)。母血HBsAg有反应性率(1.38%)依次高于CMV-IgM、抗-TP、抗-HCV(0.29%、0.13%、0.12%);不同年份母血HBsAg、抗-HCV、抗-TP检测有反应性率有差异(P<0.05),且母血HBsAg有反应性率呈现下降趋势,CMV-IgM检测有反应性率无统计学意义(P>0.05)。HBsAg、CMV-IgM项目母血有反应性率明显高于脐带血(P<0.05),母血抗-HCV、抗-TP有反应性率与脐带血基本一致(P>0.05)。结论本地区脐带血HIV-Ag/Ab、CMV-IgM及母血HIV-Ag/Ab项目检测有反应性率处于较低水平。脐带血有反应性率较高项目为抗-TP、抗-HCV。母血HBsAg有反应性率是比较高的项目,但呈下降趋势,脐带血HBsAg有反应性率呈低水平,相关母婴阻断措施起到一定作用。

人胎肝细胞肝内移植治疗肝硬化的临床观察

５０例肝硬化患者配对分成两组，对照组２５例仅给予利尿剂和血制品处理，治疗组２５例除上述治疗外，作肝内胎肝细胞移植（ＩＦＨＴ）。３个月后治疗组与对照组相比血清球蛋白水平非常显著降低（Ｐ＜０．０１），肝功能Ｃｈｉｌｄ分级级等显著提高（Ｐ＜０．０５）。随访１８个月治疗组较对照组血清白蛋白非常显著提高（Ｐ＜０．０１）而球蛋白明显降低（Ｐ＜０．０１），治疗组２２例生存者中有１８例病情稳定，而对照组１９例生存者中仅５例稳定，另１４例系活动性肝硬化。结果提示ＩＦＨＴ能促进肝硬化患者腹水消退，改善肝功能延长生存时间。

人脐血干细胞对裸小鼠移植的实验研究

目的 探讨脐血干细胞移植到小鼠体内的增殖、分化以及维持情况。方法 将人脐血单个核细胞注入经致死量照射后的免疫缺陷小鼠— BAL B/C nu+ 小鼠。观察小鼠的生存、造血重建和植入指标情况。结果 移植组小鼠生存、造血重建及植入指标表达明显优于对照组 (P<0 .0 5 ) ,人脐血中的 CD34+ 细胞可植入且定居于小鼠骨髓中 ,并可在其中增殖、分化。结论 人脐血干细胞移植入裸鼠显示脐血的造血干

凶险性中央性前置胎盘对母婴结局影响的回顾分析

目的回顾性分析凶险性中央性前置胎盘对母婴结局的影响。方法回顾性统计凶险性前置胎盘的类型,并对三种类型的凶险性前置胎盘的母婴结局情况进行分析。结果 45例凶险性前置胎盘中,中央性前置胎盘21例占46.67%,部分性前置胎盘11例占24.44%,边缘性前置胎盘13例占28.89%。中央性前置胎盘所占比例最高,与部分性及边缘性所占比例差异有统计学意义(P<0.05)。多组之间比较显示,不同类型前置胎盘间孕妇年龄、孕次、产次、流产次数和剖宫术次数比较差异有统计学意义(P均<0.05),中央性前置胎盘组均高于边缘性和部分性胎盘组。Logistic多因素回归分析显示,年龄、流产次数及剖宫产次数为中央性凶险性前置胎盘的高危因素(P<0.05)。中央性组患者妊娠不良情况及妊娠结局不良结局情况明显高于部分性组及边缘性组,表现为产前出血、抑制宫缩治疗、产后出血、胎盘植入率、子宫切除率高,出血量及输血量大,差异有统计学意义(P<0.05);3组间休克、DIC、胎盘粘连发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组间早产、新生儿窒息发生率及体重比较差异有统计学意义(P<0.05),中央性组早产、新生儿窒息发生率高于部分性组及边缘性组,新生儿体重轻。3组间低体重儿及新生儿死亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论凶险性前置胎盘患者以中央性前置胎盘发生率最高,且凶险性中央性前置胎盘不良母婴结局发生率高,其危险因素包括年龄、产次及剖宫产次数。

脐带间充质干细胞治疗慢性扩张型心肌病合并心力衰竭疗效观察

目的评价脐带间充质干细胞(MSCs)治疗慢性扩张型心肌病合并收缩性心力衰竭患者的临床效果。方法选择2013年12月至2014年12月河南省人民医院收治的59例扩张型心肌病合并收缩性心力衰竭患者,将患者分为治疗组(30例)和对照组(29例)。治疗组患者在药物治疗基础上经冠状动脉注入脐带MSCs 20 m L;对照组患者在药物治疗基础上经冠状动脉注入等量生理盐水。治疗后1、6个月观察2组患者心功能变化、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、6 min步行距离、血清氨基末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)和再次住院率、病死率。结果 2组患者治疗后1、6个月纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级较治疗前均有所改善(P<0.05);治疗后1、6个月治疗组患者NYHA心功能分级均显著优于对照组(χ2=12.64、16.75,P<0.05)。治疗前2组患者LVEDD、LVEF、血清NT-pro BNP和6 min步行距离比较差异均无统计学意义(P>0.05);2组患者治疗后1、6个月LVEDD、LVEF、血清NT-pro BNP和6 min步行距离与治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后1个月治疗组患者LVEDD与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),LVEF、6 min步行距离较对照组显著增加,血清NT-pro BNP水平较对照组显著降低(P<0.05);治疗后6个月治疗组患者LVEDD、血清NT-pro BNP水平较对照组显著降低,LVEF、6 min步行距离较对照组显著增加(P<0.05)。6个月随访结果显示,对照组患者病死率为24.14%(7/29),治疗组患者病死率为6.67%(2/30),治疗组患者病死率显著低于对照组(χ2=4.99,P<0.05);对照组患者的再次住院率为31.03%(9/29),治疗组患者的再次住院率为16.67%(5/30),2组患者再次住院率比较差异无统计学意义(χ2=1.68,P>0.05)。结论脐带MSCs可改善慢性扩张型心肌病合并心力衰竭患者的心功能和心室重构,降低短期病死率。

影响脐血采集量的因素及对策

目的探讨提高脐血采集量的方法。方法对192份收集的脐血,从分娩的方式、胎儿体重、胎盘重量、胎盘娩出方式、孕周、穿刺次数与脐血量的关系等方面比较分析。结果分娩方式、胎儿体重、胎盘重量、胎盘娩出方式、孕周、穿刺次数都将影响脐血采集量。结论通过临床的选择和优化方法可有效的增加脐血采集量。

p65小干扰RNA对人脐静脉内皮细胞再灌注后趋化因子CXCL16表达的影响

目的探讨p65小干扰RNA(siRNA)对人脐静脉内皮细胞再灌注损伤后趋化因子CXCL16表达的调节机制。方法分4组对人脐静脉内皮细胞进行培养和处理,即对照组(正常培养基培养)、缺血再灌注组(以模拟缺血培养液培养30 min后换正常培养液再培养4 h)、p65 siRNA转染组(正常内皮细胞培养基培养+p65 siRNA转染)、缺血再灌注+p65 siRNA转染组(模拟缺血再灌注+p65 siRNA转染)。观察4组核因子κB p65、CXCL16 mRNA相对表达量及CXCL16表达水平以及细胞存活率。结果对照组、p65 siRNA转染组及缺血再灌注+p65 siRNA转染组核因子κB p65、CXCL16 mRNA相对表达量及CXCL16表达水平较缺血再灌注组均降低(P<0.05)。WST-1法测定,p65siRNA转染组及缺血再灌注+p65 siRNA转染组细胞存活率较缺血再灌注组均增高(P<0.05)。结论 p65 siRNA通过沉默p65,抑制模拟缺血再灌注诱导的CXCL16表达,有利于细胞生存。

脐血中促红细胞生成素、促血小板生成素水平观察

目的 观察脐血中促红细胞生成素 (EPO)及促血小板生成素 (TPO)水平 ,并比较性别之间的差异。方法 用放射免疫法 (RIA法 )及酶标法 (EIA法 )分别测定脐血EPO、TPO水平 ,并与正常成人血清对照。结果EPO水平脐血[(25.22±17.42)mu/ml]高于对照[(7.68±3.89)mu/ml,P<0.01) ,脐血和对照男女性之间EPO水平均无差别 (均P>0.05)。TPO水平脐血[(208.60±114.99)pg/ml]与对照[(182.62±88.91)pg/ml]相近 (t=1.423,P>0.05) ,而对照女性高于男性 (t=4.896,P<0.001),脐血男女之间差别不明显 (t=0.605,P>0.05)。男性脐血与对照TPO水平有差别 (t=3.989,P<0.001) ,女性则无差别 (t=0.060,P>0.05)。结论 足月新生儿脐血中EPO水平高于成人外周血 ,而TPO水平与成人外周血相近。

造血干细胞采集、分离与冻存的研究

目的 :研究外周血造血干细胞的采集、分离、冻存及干细胞活性的检测。方法 :用封闭式动脉采血法采集 10例脐血 ,经Ficoll溶液分离获得干细胞 ,分成 3组 ,分别用 10 %二甲亚矾 (DMSO)、自配的 5 % DMSO+6 %羟乙基淀粉 (HES) +4 %人体白蛋白及 CP- 13种不同的冷冻保存液冻存于 196℃的液氮和 80℃的低温冰箱中 ,对冷冻后的样本进行单个核细胞 (MNC)计数。锥虫蓝拒染试验及流式细胞仪 CD+ 34 细胞计数。结果 :采集的血量平均数为 (72 .2± 17.3) ml,3种不同冷冻保存液对造血干细胞的保存效果在 1、3、6个月差异无显著性 (P>0 .0 5 )。随着冷冻时间的延长 ,特别是 6个月后 ,流式细胞仪对 CD+ 34 细胞检测的相对数逐渐增高。在 6个月内 ,80℃低温冰箱中的冻存与 196℃液氮内的冻存相比 ,对造血干细胞的影响差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :自配的冷冻保存液效果良好 ,短期造血干细胞的冻存可以在 80℃低温冰箱内进行 ,冷冻保存造血干细胞 1、3、6个月对细胞的活性影响不大。

脐血采集质量与胎盘剥离相关性分析

近年来随着人们经济水平增长及医学知识信息量的增加，脐血造血干细胞基础研究和临床应用的报道日益增多，行脐血采集的产妇的数量越来越多。而脐血源造血干细胞移植效果与采血中的造血干细胞数量有关。因此，如何提高采集脐血量，分离获得足够的造血干细胞是一个关键。在临床大量脐血采集的工作中，我们发现脐血采集的质与量与产妇的重量、胎盘的质量、胎盘娩出的时间、胎盘娩出的方式存在密切关系。

性激素六项的生物参考区间在呼和浩特地区的验证分析

在现代医学中,检验医学中的生物参考区间是分析检验信息的一个基本尺度和依据,血细胞分析的生物参考区间验证分析已经报道,而呼和浩特地区性激素六项的生物参考区间的验证未见报道,本文利用Roche E601电化学发光仪检测的性激素六项的生物参考区间在呼和浩特地区的验证情况,现报道如下。

脐血造血干细胞分离方法的实验研究

目的优化脐血造血干细胞/祖细胞的分离方法。方法脐血按体积比1∶5与含有树脂海绵筛(筛孔直径约12μm)的6%羟乙基淀粉混合,静置60min,提取界面有核细胞。倒置显微镜下计数有核细胞数,集落培养记数CFU-GM数,流式细胞仪检测CD34+细胞数,并与按照标准的羟乙基淀粉沉淀法和淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离的脐血相对照。结果采用本实验方法分离脐血获得的有核细胞数、CFU-GM数和CD34+细胞数分别为(96.82±25.78)×105/ml,(66.70±12.47)×105,(1.33±0.57)×105/ml,明显高于由羟乙基淀粉沉淀法(70.72±20.93)×105/ml,(28.79±10.25)×105,(1.01±0.36)×105/ml和淋巴细胞分离液密度梯度离心法(25.33±7.27)×105/ml,(20.13±7.55)×105,(0.34±0.01)×105/ml分离的脐血(P<0.05)。结论本实验方法可由脐血中分离出大量的造血干/祖细胞,是一种分离脐血造血干/祖细胞的理想方法。