云南省乙型脑炎病毒宿主和媒介研究

于 1 978年至 1 997年 ,从云南猪血液和乳猪脑组织中分离到乙型脑炎 (JE)病毒 5株 ,从蝙蝠脑组织中分得JE病毒1 0株 ,从鸟类脑组织中分得JE病毒 5株 ,从 1 5种蚊虫体内分离到JE病毒 6 3株 ,从 2种蠓类中分得JE病毒 2株。分析认为 ,猪是JE病毒的主要扩散宿主 ,蝙蝠和鸟类在该病毒保存和传播中起重要作用 ;三带喙库蚊是该病毒的主要传播媒介 ,伪杂鳞库蚊、霜背库蚊、蚊腿库蚊、白蚊伊蚊和刺扰伊蚊为重要媒介 ,蠓类亦可传播该病毒。

乙型脑炎狗肾细胞活疫苗的人体接种观察

乙型脑炎狗肾细胞14－2PDK-CD株活疫苗于甘肃省武威市（非流行区）45人．接种观察表明，反应轻微，且抗体应答良好．疫苗接种后仅有4．65％的儿童出现低热反应（37．1～37.3℃），48～72小时后消失．儿童接种1针（0．5ml）后其抗体效价≥1∶5者占92．9％、≥1∶10者占42．9％；次年加免1针后，血清中和抗体效价百分之百上升至≥1∶10，GMT为29．3±1．44。成人接种1针（1．0ml），其抗体效价即上升至≥1∶10．与同时进行的乙型脑炎地鼠肾细胞14－2HK株活疫苗比较，其结果均无明显差异，表明两株活疫苗的免疫原性相似。

流行性乙型脑炎(乙脑)活疫苗和灭活疫苗对不同乙脑毒株的免疫性

本文比较了流行性乙型脑炎(以下简称乙脑)病毒SA14-14-2株活疫苗和P3株灭活疫苗对14株乙脑病毒在小鼠体内的免疫保护作用,结果表明,14-2株活疫苗对14株病毒均有较强的保护力,最小保护剂量在4～0.3×10^(-5)ml之间;而灭活疫苗的免疫力明显低于活疫苗,最小保护剂量在10～0.3×10^(-3)ml之间,且灭活疫苗对不同毒株的保护范围不如活疫苗广,活疫苗免疫血清的被动保护作用亦明显优于灭活疫苗。

冻干乙脑减毒活疫苗保护剂的筛选

目的 筛选冻干乙脑活疫苗的保护剂。方法 通过优化组合筛选出A、C、D、E、F 5种保护剂配方 ,其中A为现行生产配方作为对照与其他配方进行比较。结果 使用A保护剂的疫苗在 37℃放置 7d和 2 1d ,病毒滴度分别下降 0 .98和 1.6 6LogPFU/ml;使用D、E保护剂的疫苗热稳定性最好 ,在 37℃放置 7d滴度分别下降 0 .19和 0 .0 7LogPFU/ml,2 1d分别下降 0 .42和 0 .39logPFU/ml。结论 D。

乙型脑炎减毒活疫苗(SA_(14)-14-2)在豚鼠体内保护作用的免疫机制的研究

本实验将乙脑减毒活疫苗ＳＡ_（１４）－１４－２株以不同疫苗病毒量（３．８７ＰＦＵ／ｍｌ和５．８７ＰＦＵ／ｍｌ）分别一次免疫豚鼠，观察其对强毒攻击后抑制毒血症和抗体形成的能力。结果显示疫苗（５．８７ＰＦＵ／ｍｌ）免疫组豚鼠攻击前虽然中和抗体阴性或很低，但经攻击感染后不同时间内均未出现病毒血症，对照组豚鼠则于第２，３，４天全部出现病毒血症。表明一次活疫苗免疫后能有效地抑制病毒血症的产生。免疫后３０天虽然免疫组的豚鼠中和抗体很低，但攻击感染后抗体迅速增长。第四天的抗体滴度为１：８～３２，第５天达１：１２８～２５６，第１４天抗体高达１：５１２～１０２４；而对照组抗体则上升很慢，第７天才出现低水平抗体（１：４）。血凝抑制抗体增长的动态与中和抗体近似。表明活疫苗免疫后虽然中和抗体水平不高，但一经感染可迅速产生高滴度抗体达到保护作用。

大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗

本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Ｖｅｒｏ细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除ＤＮＡ处理后，用不连续蔗糖梯度（３６％和６０％）。３２６００ｇ，速率区带离心４ｈ。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出６倍以上，补体结合抗原比中国参考疫苗高４～８倍。总蛋白含量低于３０μｇ／ｍＬ，牛血清含量降至０．５μｇ／ｍＬ以下，细胞残余ＤＮＡ低于１００ｐｇ／０．５ｍＬ。用此法连续制备三批纯化疫苗，其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Ｖｅｒｏ细胞疫苗也具有一定的参考意义。

上海市部分人群乙型脑炎抗体水平的调查

用超速离心纯化的乙型脑炎病毒抗原,建立了间接ELISA方法检测乙脑IgG抗体。该法敏感性优于常规的血凝抑制试验(HI)和间接免疫荧光法(IFA)方法,特异性为93.3％。用此法调查了上海市666份人群血清中的乙脑抗体。结果<10岁儿童阳性率为50％左右,市区和郊区接近:10～19岁市区和郊区阳性率分别为30.1％和77.8％;20～60岁者市区阳性率为65.9～89.7％,而郊区几乎全部阳性。对不同年龄,市区和郊区抗体水平差别的原因及其与接种乙脑疫苗和乙脑疫情的关系进行了讨论。

鼠源性单克隆抗体在乙脑患者体内动态的初步观察

１５名西安地区乙脑患者，平均年龄３岁．在患者志愿接受鼠源性ＭＣＡｂ治疗，以及ＭｃＡｂ制剂严格按照质控标准制备的前提下，静脉一次给予５ｍｇ鼠源性乙脑ＭｃＡｂ。于给药后当时、第３天、第７天、第１０天及第１４天分别来血，测其ＭＣＡｂ浓度和有无抗鼠ＩｇＧ抗体产生。结果显示给药后当时血中ＭｃＡｂ浓度为１μｇ／ｍｌ，血中浓度半衰期为４天；到第１０天体内ＭｃＡｂ为０．０１μｇ／ｍｌ。１５例患者中有２例在第７天产生抗抗体，１例在第１０天，１例在第１４天测到抗抗体．其余１１例在第１４天仍未测到抗抗体产生。

乙脑疫苗接种对乙脑发病趋势的影响

分析姜堰市1967—1998 年乙脑疫情资料, 对乙脑疫苗接种前后乙脑流行特征进行调查, 得出如下结论: 1.发病时间在7、8 月份, 人群发病年龄以0—5 岁儿童为主, 农村高于城镇; 2. 由于乙脑疫苗广泛使用, 乙脑发病率、死亡率持续下降, 在低水平状态下仍有小的流行趋势; 3.

流行性乙型脑炎患者血清抗体对乙脑病毒蛋白的反应性及其应用

目的：了解流行性乙型脑炎病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应答方面所起的作用，并在此基础上建立一种新的而且可供基层医疗卫生单位使用的乙脑快速诊断方法。方法：建立乙脑病毒免疫转印方法，应用免疫转印方法分析乙脑患者血清ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体对乙脑病毒蛋白的反应性，并比较免疫转印法与间接免疫荧光法检测乙脑ＩｇＭ抗体差异。结果：应用免疫转印方法检查８９例乙脑病人血清ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体对乙脑病毒蛋白的反应情况，发现绝大部分病人血清ＩｇＧ抗体可识别Ｅ蛋白，部分病人尚可识别ＮＳ５，ＮＳ３，ＮＳ１蛋白。说明Ｅ蛋白是乙脑病人血清识别的主要蛋白，在免疫保护方面起着主要作用。从正常人群中筛选出了４５例乙脑隐性感染者，分析隐性感染者血清ＩｇＧ抗体对乙脑病毒蛋白的反应性发现隐性感染者对ＮＳ５蛋白的反应机率明显低于显性感染者。而病人血清ＩｇＭ抗体主要识别Ｅ，ＮＳ５蛋白。免疫转印法检测乙脑ＩｇＭ抗体与间接免疫荧光法比较差异无显著性（χ２＝０５，Ｐ＞０．５），二者的阳性符合率为９５％，阴性符合率为７８．７８％，总符合率为９３．２５％。结论：乙脑病毒Ｅ蛋白是乙脑病人血清识别的主要蛋白，在免疫保护方面起着主要作用。运用免疫转印法检测乙脑ＩｇＭ抗体可早?

宾川县流行性乙型脑炎暴发流行的病原分离和鉴定

1991平7—10月宾川县乙脑暴发流行。全县共发生146例,死亡16例。9月6日我们到疫区现场调查,从15份急性期患者血液和1份急性期患者脑脊液中分离到8株病毒。经过滤过试验、血凝素测定、血凝抑制试验、补体结合试验、免疫荧光试验和中和试验等鉴定证实,8株分离的病毒均属于乙脑病毒,从而为本次乙脑流行提供病原学根据。另外,还将采集的患者血液进行IgM抗体测定。结果在分离到病毒的7例患者中,6例IgM抗体测定阳性,HI效价在1:80—1:1280之间,说明患者体内已产生抗体,但仍可分离到病毒。

乙型脑炎疫苗的不良反应

流行性乙型脑炎疫苗系由鼠脑培养的病毒灭活制成,接种后的不良反应由使用初期的 少量、轻微,逐渐趋向增多、严重。现就近年来报道的有关新的不良反应——变态反应、神经系统和 心血管反应予以归纳,并提出不良反应的预防措施。

日本脑炎病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,抗各种不同日本脑炎病毒(JEV)株的McAb不断产生,并已在JEV的研究中广泛应用,取得了前所末有的进展。在分子病毒学中,McAb为进一步弄清JEV的抗原位点,不同位点之间的关系,不同位点与不同生物学功能之间的关系,以及选择保护性位点,制备亚单位疫苗提供了有力的工具。在乙脑检验诊断中,McAb为检出JEV,阐明JEV不同毒林之间的关系提供了条件。在乙脑实验性治疗以及对临床患者探索性治疗中,McAb为乙脑的特异性防治提供了依据,是一种很有希望的制剂。

用硫酸鱼精蛋白去除Vero细胞乙型脑炎疫苗中残余DNA

通过试验研究建立一种去除Vero细胞乙脑疫苗中残余细胞DNA的方法，即疫苗经超滤浓缩后加入0.8～1.0mg／ml的硫酸色精蛋白，于4℃静置2h，8000r／min离心5min。DNA与鱼精蛋白共同沉于管底。用该法处理的疫苗不仅使残余DNA达到规程要求（＜100pg／剂量），而且抗原活性无明显丢失。

白纹伊蚊经实验感染后涎腺中基孔肯雅病毒和乙型脑炎病毒抗原检测

用基孔肯雅和乙型脑炎病毒经口感染白纹伊蚊，采用免疫荧光试验对雌蚊涎腺作病毒抗原检查，结果于感染后第８～１４天基孔肯雅的阳性为５０％～９１．６７％，乙型脑炎为７０％～８０％。试验认为，白纹伊蚊在感染后第６～８天即可传播基孔肯雅和乙型脑炎病毒。

蔗糖垫超速离心法提纯乙型脑炎疫苗

经Vero细胞培养的P3株乙脑灭活病毒，以超滤浓缩和硫酸色精蛋白处理后，40％蔗糖垫层在27500r／min离心6小时，收集沉淀制成提纯乙脑疫苗。其蛋白含量在0．012～0.035mg／ml，稀释8倍后其疫苗效价仍能超过日本提纯鼠脑乙脑疫苗参考标准和我国乙脑疫苗参考标准。Vero细胞残余DNA＜100pg／0．5ml，残余牛血清＜1μg／ml。

乙型脑炎灭活疫苗Vero细胞适应毒种的研究

将乙脑P3株鼠脑毒种在Vero细胞中适应性传代，当传至10代时，毒种的CPE和感染性虽无明显变化，但其免疫原性却明显减弱，因此，用在Vero细胞中传递1至2代的几株建立毒种库（P3V1和P3V2），其涵度分别为7．71和78210gpfu／ml。在毒种中加入以山梨醇为主要成分的稳定剂后，4～S℃保存30天，－30℃1年，－60℃2年，滴度降低约0．51ogpfu／ml，在生产中使用效果良好。

流行性乙型脑炎灭活疫苗三针基础免疫效果及反应研究

采用ＢＨＫ－２１细胞蚀斑减少中和试验，检测扬中县６～１８月龄婴儿乙型脑炎灭活疫苗中和抗体，追踪调查接种反应和第２年加免前后抗体变化，探讨３针基础免疫效果。结果表明：乙脑基础免疫中和抗体阳转率３针组达８２．２６％，２针组５２．９４％．Ｐ＜０．００５；抗体ＧＭＴ３针组１３．９０，２针组７．５７．Ｐ＜０．００５。第２年抗体维持水平，阳性率３针组７５．００％，２针组５１．５％．Ｐ＜０．００５；抗体ＧＭＴ３针组１１．８７，２针组５．８６，Ｐ＜０．０２。加免后阳性率，３针组达１００％，２针组９７．０６５，Ｐ＞０．５；抗体ＧＭＴ３针组１８８．０９，２针组为５６．１９．Ｐ＜０．００１。接种反应追踪调查未见严重反应，有关指标无组间和注射针次间差异（Ｐ＞０．５）。提示：采用３针进行乙脑疫苗基础免疫是安全的．可供选择的免疫策略。

流行性乙型脑炎特异性IgM、IgG诊断试剂盒的研制和应用

应用乙脑病毒感染BHK21细胞制备抗原，建立检测乙脑特异性IgM、IgG的诊断试剂盒，以ELISA捕捉法检测了107份临床疑似乙脑的患者血清，IgM阳性率为61．7％。该法比血抑法简便、敏感，不需要双份血清，可用于临床早期诊断。应用抗体夹心法检测了21份患者血清，IgG阳性率为61．9％，与ELISA捕捉法检测的符合率达100％。抗体夹心法与ELISA捕捉法可联合用于回顾性临床诊断和大规模流行病学调查。