伤寒耐药性的变迁(附51例临床分析)

我科自1979年1月～1988年12月,收治伤寒病人276例,其中51例伤寒杆菌培养阳性,现报道分析如下。临床资料 276例伤寒病人中培养标本181份,64例次伤寒杆菌培养阳性。其阳性率。血48.2％(54/112),骨髓62.5％(5/8),粪便7.5％(4/49),胆汁100.0％(1/1),尿0％(0/7)。 51例病人中,男32例,女19例。年龄4个月～64岁,平均23.8±12.0岁。入院时病日4～50日,平均18.7±10.8日。

伤寒的免疫学试验与肥达反应的评价

伤寒传统的实验室诊断方法依靠细菌培养和肥达反应。细菌培养不仅阳性率低,时间又长,肥达反应要在发病1～2周后才出现阳性,阳性率只有80%左右。为了寻求对伤寒敏感、特异的早期诊断方法,近年来国内外进行了广泛的研究,相继建立了对流免疫电泳,血凝、SPA 协同凝集、胶乳凝集,

单克隆抗体鉴定鼠伤寒沙门氏菌的实验研究

本文应用沙门氏菌单克隆抗体建立了ELISA检测鼠伤寒沙门氏菌(STM)的方法,并与协同凝集方法对临床分离的162株STM进行对比鉴定研究,结果表明ELISA其方法灵敏高度,可检出5×10~2菌/ml,特异性强,且结果准确客观,对鼠伤寒沙门氏菌0-4抗原的检出率为100％,抗原H-i的检出率为96.3％,同时结果表明所用沙门氏菌McAb特异性和敏感性都达到了目前所用的沙门氏菌诊断因子血清的标准,具有推广应用的前景。

重组（人）白细胞介素2对伤寒Vi荚膜多糖菌苗的免疫佐剂效应的实验研究

采用改良溶血空斑试验和间接血球凝集试验研究了重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ－２）对伤寒Ｖｉ荚膜多糖菌苗（简称Ｖｉ菌苗）免疫小鼠的特异性抗Ｖｉ菌苗抗体应答的影响及其与免疫保护作用的关系。结果表明：ｒｈＩＬ－２能增强Ｖｉ菌苗免疫小鼠的特异性抗体应答，具有明显的佐剂效应；且特异性抗体的水平与用伤寒菌株（Ｔｙ２５００９８）攻击的小鼠的免疫保护力呈正相关关系。提示ｒｈＩＬ－２可用做Ｖｉ菌苗的免疫佐剂以提高接种人群抗伤寒感染的免疫保护力。

鼠伤寒沙门氏菌porin蛋白免疫原性的研究

用从鼠伤寒沙门氏菌（STM）中提取的微孔蛋白porin免疫BALB／c小鼠，不仅能产生高效价的抗体，还能出现典型的迟发型变态反应（DTH）和白细胞介素－2（IL－2）。以500LD50鼠伤寒沙门氏菌攻击，其保护率为70％，提示STM－porin具有较强的免疫原性。

鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白(porin)的提纯及鉴定

采用超声破碎、TritonX－100溶解、Sephacryl超细S－300和SephadexG－150凝胶过滤提纯了鼠伤寒杆菌的外膜蛋白porin。经检测其中LPS的含量约为0．06％。经SDS—PAGE图谱分析，porin在36KDa位置处显示一条蛋白带；用免疫印迹将OMPs兔抗血清与porin结合，仅在36KDa位置显示一明显的印迹带。

被动血凝试验测定伤寒Vi抗体

作者从拘橼酸杆菌中提取纯化获得其Ｖｉ多糖抗原，该抗原具有伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原的免疫学特性，而不含伤寒沙门氏菌０，Ｈ抗原，用其致敏新鲜羊血球作被动血凝试验，特异性敏感性均很好。所需Ｖｉ抗原致敏浓度极低，仅为０．０５ｕｇ／ｍｌ。使用新鲜羊血球凝模式较好，便于观察结果，采用被动血凝试验检测１０６名健康中学生肌肉注射３０ｕｇ伤寒Ｖｉ多糖菌苗前后Ｖｉ抗体的变化情况，发现免疫后血清抗体的四倍增长率达８９％，表明伤寒Ｖｉ多糖苗具有良好的免疫原性。

火箭电泳法测定伤寒Vi多糖菌苗多糖含量

伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原系ａ─１，４─Ｎ─乙酰─半乳糖醛酸高度聚合体，其Ｃ２和Ｃ３位分别被Ｎ─乙酰基和０─乙酰基取代，它不能用分光光度法测定其含量，实验表明火箭电泳的火箭峰高与其样品中多糖含量的对数成直线相关关系，作者采用火箭电泳方法对全国六个生物制品研究所的１８批伤寒Ｖｉ多糖菌苗中Ｖｉ多糖含量进行了测定，结果表明多数制品符合规程要求，但部分制品多糖含量偏高，值得引起注意，各所三批制品差别不大，表明各所的生产工艺相对稳定，利用火箭电泳测定伤寒Ｖｉ多糖，操作简单，用时较短，所需样品极少，是目前较为合适的测定伤寒Ｖｉ多糖菌苗多糖含量的方法。

伤寒Vi多糖菌苗接种反应观察

本文报告了对我国首次研制成功的伤寒Ｖｉ多糖菌苗进行人体接种反应观察结果，接种对象为２０至５４岁无伤寒病史，近年无伤寒菌苗接种史的健康人，共６０名，以完全随机的方法分为两组，实验组注射３０μｇＶｉ多糖菌苗，对照组注射Ｖｉ多糖菌苗的稀释液。其结果３０名Ｖｉ多糖菌苗接种者注射后体温无中重反应发生，局部红肿仅有１例中反应。注射后对血压、心律没有影响。红细胞计数，白细胞计数均在正常范围，与接种前相比，无显著差异。标准差的波动幅度与对照接近。菌苗组注射前后白细胞分类中的中性粒细胞比例没有变化。结果证实Ｖｉ多糖菌苗的人体接种反应是轻微的，建议大面积推广应用。

国产与法国Merieux产伤寒Vi多糖菌苗人体接种反应及血清抗体应答比较

作者对国产伤寒Ｖｉ多糖菌苗和法国Ｍｅｒｉｅｕｘ产伤寒Ｖｉ多糖菌苗人体接种反应及血清抗体应答情况进行比较，接种后６～８小时法国菌苗的体温反应同国产菌苗相比有显著性差异（ｘ２＝５．３４７，０．２５＞Ｐ＞０．０１），２４小时后反应消失，免后一月国产菌苗和法国菌苗Ｖｉ抗体四倍增长率分别为９１．８０％和８９．６％（ｘ２＝０．１６４，Ｐ＞０．０５），ＧＭＴ分别为３６．９４和３５．４９（ｔ＝０．６５３，Ｐ＞０．０５），二者均无显著性差异。

一个新的不耐热的伤寒沙门氏菌特异性抗原(θ)的发现

我们在研究伤寒沙门氏菌保护性抗原期间,发现了一个新的不耐热的伤寒沙门氏菌特异性抗原,暂时命名为θ抗原。这个抗原存在于各种类型的伤寒沙门氏菌中,并能从Ty2菌苗株细胞提取。以不吸收的抗θ兔血清作试管凝集时,与O90l和H901菌株的凝集效价分别为1:640和1:320。但与Ty2或9,12,Vi:d:-菌株不发生凝集,这一现象以后证实是由于Vi抗原的存在。θ抗原形成凝集较幔(31℃18～24小时),其所形成的凝集块疏松,易摇散、呈半絮状。菌体经100℃30分钟加热后与θ血清不发生凝集。玻片凝集试验显示θ血清与W和V型伤寒沙门氏菌(后者须培养在含酚培养基上)在1分钟内产生明显凝集。而与大多数D群(包括D_1和D_2)沙门氏菌和其他沙门氏菌不凝集,并与下列肠杆菌科细菌亦不凝集,包括志贺氏菌属A、B、C、D群,大肠艾希氏菌O:1～25和致病性大肠艾希氏菌12个不同的血清型,3株变形杆菌以及含有α抗原的Wakefield茵。化学分析显示,粗制θ提取物含有核酸(491μg/ml)。蛋白质(39μg/ml)和KDO(23μg/ml),但不含有O-乙酰基,表明θ抗原不同于Vi抗原。作者建议以θ血清替代现用的O:9,Vi和d因子血清作为伤寒沙门氏菌的血清学诊断。并需继续查明θ抗原的化学本质。

伤寒Vi多糖菌苗多糖含量及分子大小测定试验

伤寒Ｖｉ多糖菌苗是我国新近研制成功的一种多糖菌苗。为了严格控制该制品的质量，经反复试验，建立了多糖含量和分子大小的测定方法。本文报导了（１）用火箭电泳法测定伤寒Ｖｉ多糖菌苗多糖含量。经对不同实验条件进行比较，选择出较为理想的条件。用该法测定８批样品。结果均符合规程要求。对其中５批样品进行６次重复试验表明，该法的重复性好，操作简单，是测定多糖含量较为理想的方法。（２）用琼脂糖柱层析法对２８批伤寒Ｖｉ多糖菌苗的分子大小进行测定。对用该法所得柱层析收集液分别用Ｈｅｓｔｒｉｎ法和２０６ｎｍ扫描法测定其多糖回收率，对测定结果进行比较。结果表明，两种方法的测定结果无显著性差异（Ｐ＞０．０１），而且重复性均好。可根据实验室条件选择测定方法。

伤寒─鼠伤寒重组株Vi4072在小鼠中定居及血清学效果观察试验

以伤寒─鼠伤寒双价重组株Ｖｉ４０７２的３×１０８ＣＦＵ一次口服感染ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，４天后即可从小鼠的集合淋巴结、肝、脾中分离到该菌，４９天后该菌始被小鼠机体彻底清除。血清和小肠匀浆液中Ｖｉ抗体检测结果证明Ｖｉ４０７２菌株有刺激特异性免疫应答的功能。血清、小肠匀浆液中Ｖｉ抗体明显升高。

国产与法国Merieux产伤寒Vi多糖菌苗人体接种反应与血清学效果观察

为评价国产伤寒Ｖｉ 多糖菌苗的质量，作者对国产伤寒菌苗和法国菌苗进行了人体接种反应和血清学抗体的免疫持久性观察。结果表明接种伤寒Ｖｉ 多糖菌苗的全身反应和局部反应都很轻，是相当安全的；免后１ 个月、６ 个月和１２ 个月Ｖｉ抗体的阳转率和ＧＭＴ，国产菌苗与法国菌苗均没有显著性差异，表明国产伤寒Ｖｉ

伤寒─鼠伤寒重组株Vi4072的效力试验研究

伤寒─鼠伤寒重组株Ｖｉ４０７２所产生Ｖｉ抗原以伤寒Ｔｙ２株所产Ｖｉ抗原作对照，通过ＥＤ５０测定和小白鼠被动保护试验作了比较，结果表明Ｖｉ４０７２株Ｖｉ抗原的半数有效剂量为０．０１３６μｇ，Ｔｙ２株的半数有效剂量为０．０１８３μｇ，说明Ｖｉ４０７２─Ｖｉ对小白鼠的保护作用不低于Ｔｙ２─Ｖｉ。被动保护试验证明，在同等条件下，两种Ｖｉ抗原的免疫血清对小白鼠提供的保护作用相同。

载体—宿主平衡致死系统在减毒伤寒沙门氏活菌苗中的应用

伤寒沙门氏菌能通过粘附、侵袭、定居在肠道相关淋巴组织，并经肠系膜淋巴结到达肝脏、脾脏，进一步有效地刺激机体产生粘膜、细胞和体液免疫应答。近几年，常以减毒伤寒沙门氏菌为载体构建双价、多价活菌苗，成为新型菌苗研制的重要途径之一。为避免在基因工程活菌苗的研制中使用抗药基因作为选择压，将载体一宿主平衡致死系统应用于减毒伤塞沙门氏活菌疫苗中，使在没有抗菌素存在的情况下，外源保护性抗原能在减毒伤寒沙门氏菌中稳定表达。

贵阳、遵义两市鼠伤寒沙门氏菌质粒指纹图谱分析

对1987年贵阳、遵义两市流行的两起鼠伤寒沙门氏菌感染的病原进行了质粒指纹图谱分析。结果显示：两起流行菌株中，凡同起菌株的质粒图谱相同，不同起流行菌株的质粒图谱不同。酶切图谱表明，虽然两起流行株酶切片段有差异，但有相同大小的酶切片段。质粒指纹图谱分析说明1987年贵阳、遵义两市流行的两起鼠伤寒沙门氏菌感染，其病原菌有高度同源关系。

十六烷基三甲基溴化铵(Cetavlon)对伤寒Vi多糖菌苗生产中复合多糖收量的影响

用Ｃｅｔａｖｌｏｎ不同母液浓度、不同作用温度及作用时间等三方面对伤寒Ｖｉ多糖菌苗生产中复合多糖收量的影响进行了比较试验，结果证明，使用０．６％的浓度，１５～２０℃室温，作用１２小时以上可得到比较多的复合多糖收量。