内脏利什曼病患者骨髓及血内病原体特异性kDNA片段PCR扩增用于诊断的研究

目的 :建立简易、准确的诊断内脏利什曼病和病原体鉴定技术。方法 :采用作者设计的杜氏利什曼原虫 ( L.d.)种特异引物 和 ,经 PCR扩增样品内病原体 k DNA2 97bp片段 ,检测 2 2例确诊内脏利什曼病 ( VL )患者骨髓、血、血清共 55份样品和 4例临床疑诊为黑热病患者的骨髓 (共 2 6例 ,59份样品 )。结果 :( 1) PCR法与骨髓涂片镜检符合率为 96.2 % ( 2 5/2 6) ;( 2 ) PCR法检测骨髓、血及血清的总阳性率为 95.4 % ( 2 1/2 2 ) ;( 3) PCR法检测 2 2例骨髓、 16例血样品及 17例血清样品 ,阳性率分别为 91% ( 2 0 /2 2 )、 68.8% ( 11/16)及 2 9.4 % ( 5/17)。 15例骨髓对照样品得自 9例白血病患者及 6例健康人。血及血清对照样品各得自 5例健康人。全部对照未见扩增产物 ,均为阴性。结论 :采用引物 和 进行 PCR扩增检测血内 k DNA特异片段诊断内脏利什曼病有较好前景。

rK39抗原应用于我国西北地区内脏利什曼病诊断的研究

目的：评价ｒＫ３９抗原诊断内脏利什曼病的价值。方法：利用利什曼原虫的类Ｋｉｎｅｓｉｎ基因中编码３９个氨基酸重组片段的表达产物ｒＫ３９为抗原，对我国甘肃、四川、新疆等部分地区的１０７名黑热病患者进行ＥＬＩＳＡ诊断。结果：血清１∶１００稀释，ｒＫ３９重组抗原的工作浓度为１∶３０００，检出的抗体阳性率为９６．２％（１０３／１０７），与原虫检出的符合率为１００％。在６５例５岁以下病人中，阳性检出率为９５．３％（６２／６５）。挑选３１名抗体阳性滴度较高者，使用ｒＫ３９的工作浓度仍为８０ｎｇ／孔，则阳性的最高滴度可达１０－３。除１例麻风病患者抗体ＯＤ＞０．４３外，２７例正常人、２０例疟疾病人、２０例血吸虫病病人及２７例结核病患者血清均无交叉反应出现。结论：用重组抗原ｒＫ３９作为黑热病诊断，在我国尚属首次，此法特异性及敏感性高，且有稳定的重复性。

湖北地区皮肤型黑热病首例报道

我国过去黑热病流行颇为严重,但皮肤型黑热病的发病率很低。在我国黑热病流行的16省(区、市)中,除青海、宁夏、四川、湖北、辽宁、内蒙、山西和北京,共发现106例。现将湖北首例报告如下。 一、病例介绍 患者,男性,59岁,湖北光化县人。自1959年始出现面部对称性红斑,无发热、疼痛,疑为“红斑性狼疮”。1980年,面部红斑上发生结节。

PCR扩增利什曼原虫kDNA动物实验研究对内脏利什曼病早期诊断的价值

本文报道了用ＰＣＲ扩增Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｌ种特异性ｋＤＮＡ片段来检测不同时间采集的感染金地鼠组织样品，结果表明在腹腔接种感染后第４天就可以从金地鼠外周血和脾组织内检测到病原体ｋＤＮＡ的存在，感染后第４８天，５只金地鼠的外周血和脾组织样品ＰＣＲ检测结果都为阳性，扩增产物经与地高辛标记的重组质粒ｐＬＫ２探针斑点杂交得到进一步证实。由此可见，用ＰＣＲ技术检测外周血或肝、脾组织进行内胜利什曼病的早期诊断是可行的。

重组杜氏利什曼原虫39kD抗原的诊断价值

为了给内脏利什曼病（ＶＬ）患者提供较为准确的实验诊断方法。我们将表达杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原的大肠杆菌制备物进行电泳并转移至硝酸纤维滤膜上，以１１例确诊ＶＬ病人的不同稀释度血清对其识别，当稀释度达１∶４００时，全部病人血清均能明显识别３９ｋＤ抗原带．而正常人血清和其他病人血清不识别３９ｋＤ抗原带，说明重组杜氏利什曼原虫３９ｋＤ抗原具有一定的诊断价值，用其检测病人血清中相应抗体可以诊断内脏利什曼病。

皮肤组织印迹杂交法诊断犬利什曼病研究初报

用利什曼病原虫KDNA印迹杂交法对采自甘肃省文县黑热病流行区的30只家犬耳缘皮肤组织印迹样品进行杂交试验。结果30份犬样品中有8份呈现阳性反应,阳性率为26.7％。同时进行骨髓涂片检查,有5只犬查见原虫,阳性率为16.7％。以上两种方法的符合率达76.7％(23/30)。印迹杂交法具有特异性高,取材方便,快速和结果易于观察等优点,在诊断犬利什曼病中有一定应用前途。

用MCAb-AST对山丘疫区黑热病漏诊的实验诊断研究

本文报道McAb-AST法对我国山丘疫区骨髓涂片检查漏诊的黑热病病例实验诊断价值。观察的81例中骨髓涂片法漏诊者有13例,经McAb-AST显阳性反应,而给予锑剂治疗,治后11例临床痊愈,用McAb-AST复查者也转为阴性反应(1例复发除外),从而表明骨髓涂片法漏诊率高达16.05％,而McAb—AST显假阴性反应者仅有1例(1.23％)。本文还对McAb-AST的实验条件进行了改进,并以实验结果论证了McAb-AST阳性反应系由于特异性McAb-与循环抗原的结合,而不是非特异性反应所致。

用McAb-AST对犬内脏利什曼病早期诊断的初步研究

本文报道实验感染杜氏利什曼原虫小犬10只,在感染前及咸感后5、12、20、40d,分别收集血清,用McAb-AST检测血清内循环抗原。试验结果可见小犬感染后5d即出现阳性反应,表明已可检测出其血清内循环抗原,并随着时间的加长,阳性反应程度有所增加。初步建立了犬利什曼病的一种新的早期诊断方法,简便易行,易于推广应用。

快速ELISA法诊断犬内脏利什曼病及应用价值的研究

本研究建立了一种用PVC薄膜作载体、将前鞭毛体可溶性抗原包被在PVC凹板上,采用HRP-SPA作第二抗体及无毒的TMB作底物的快速ELISA方法,该法简便、经济、实用。与经典ELISA平行对照检测24份骨髓穿刺证实的内脏利什曼病犬血清,结果:快速ELISA法阳性符合率为100％(24/24),而经典ELISA法为95.83％(23/24);对47份采自非流行区的正常犬血清,两法均仅有1例呈假阳性反应,占2.13％;用快速ELISA法检测实验感染了旋毛虫、肺吸虫、钩虫、弓形虫等犬血清共26份,均未见交叉反应。用该法又调查了四川汶川县黑热病重流行区的124份犬血清,同时进行骨髓涂片检查,结果快速ELISA查出阳性犬39只,占31.45％(39/124),骨髓涂片查见利什曼原虫者有24只,占19.35％(24/124),这24只犬血清对快速ELISA法均呈阳性反应。

黑热病快速ELISA诊断方法的研究

用RPMI 1640纯培养的前鞭毛体可溶性抗原预固相PVC载体,用抗人γ链McAb制备酶结合物、TMB底物系统,建立了快速诊断黑热病的ELISA方法。该法与常规ELISA平行检测37例骨髓穿刺证实的黑热病患者血清,阳性符合率均为100%。检测120例健康人血清,均未见假阳性反应;与血吸虫、间日疟、囊虫、旋毛虫、华枝睾吸虫等寄生虫病人血清均未见交叉反应,但与麻风病人血清有10%的交叉反应,结果表明,该法具有较高的敏感性和较好的特异性。可与经典ELISA相比,但本法的操作更简便和快速。

黑热病快速ELISA诊断方法的研究

用RPMI1640纯培养的前鞭毛体可溶性抗原预固相PVC载体，用抗入γ链McAb制备酶结合物，TMB底物系统，建立了快速诊断黑热病的ELISA方法，该法与常规ELISA平行检测107例骨髓穿刺证实的黑热病患者血清，阳性符合率均为100%，检测120例健康人血清，均未见假阳性反应，与血吸虫、间日疟、囊虫、旋毛虫、华枝睾吸虫等寄生虫病人血清均未见交叉反应，但与麻风病人血清有10%的交叉反应，结果表明，该法具有较高的敏感性和较好的特异性，可与经典ELISA相比，但本法的操作更简便和快速。

聚合酶链反应用于黑热病诊断的实验研究

用ＰＣＲ方法对２５名确诊的黑热病病人和６０例对照进行黑热病诊断的实验研究，结果显示：其灵敏度９６％（２４／２５）特异度１００％（６０／６０），假阳性率０％，假阴性率４％，符合率９９％，约登指数为０．９６，ＰＣＲ方法能在外周血清仅为１μｌ情况下测出其中原虫的ＤＮＡ。

黑热病10例误诊分析

黑热病是一种慢性传染病，自１９５８年后我国宣布基本消灭，故一些临床工作者放松了对本病的警惕性。为了提高对本病的认识，现将我们自１９８０年以来在骨髓中找到利杜体而确诊的１０例误诊病例报告如下。１临床资料１．１一般资料１０例主要来自甘肃省陇南地区，男６例...

LDT和IFAT在黑热病流行病学方面的研究进展

本文重点对LDT和IFAT两种方法在黑热病流行病学方面的使用、应用的研究进展进行综述。

克拉玛依地区90例皮肤利什曼病的临床分析

目的：研究克拉玛依地区皮肤利什曼病的临床类型及病理。方法：分析整理１９８８—１９９４年确诊的９０例皮肤利什曼病的临床及病理资料。结果：该病主要临床类型可分为丘疹、斑块、溃疡性结节和结节性痒疹型４种。丘疹及斑块型主要由利什曼原虫引起的巨噬细胞聚集和炎症反应；溃疡性结节型是皮肤组织坏死、液化及脱落，溃疡边缘的真皮层呈充血和水肿，并有中性粒细胞和淋巴细胞浸润，在浸润区内可查见原虫；结节性痒疹型主要是真皮层形成结核样结节，利什曼原虫很少。患者的血象正常，Ｂ超检查脾脏的大小与当地正常人无明显差异。结论：克拉玛依地区皮肤利什曼病有丘疹、斑块、溃疡性结节及结节性痒疹型４种临床类型，且各有病理特征。

快速ELISA法诊断犬内脏利什曼病及应用价值的研究

本研究建立一种用PVC薄膜作载体，将前鞭毛体可溶性抗原包被在PVC凹板上采用HRP-SPA作第二抗体及无每的TMB作底物的加速ELISA方法，该法简便、经济、实用。与经典ELISA平行对照检测24份骨髓穿刺证实的内脏利什曼病犬血清，结果：快速ELISA法阳性符合率为100%（24/24），而经典ELISA法为95.83%(23/24)；对47份采自非流行区的正常犬血清，两法均仅有1例呈假阳性反应，占左.13%；用快速ELISA法检测实验感染了旋毛虫、肺吸虫、钩虫、弓形虫等犬血清共26份，均未见交叉反应，用该法又调查了四川汶川县黑热病重流行区的124份犬血清，同时进行骨髓涂片检查，结果快速ELISA查出阳性犬39只，占31.45%(39/124)，骨髓涂片查见利什曼原虫者有24只，占19.35%(24/124)，这24只犬血清对快速ELISA法均呈阳性反应。