单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原的研究.Ⅰ.

将血吸虫肠相关阴极抗原的单克隆抗体3D8A联结过氧化物酶后用于直接法Dot-ELISA检测急性、慢性与晚期血吸虫病人血清中循环抗原,阳性率分别为90.6、83.2及30.7％。正常人血清及非寄生虫感染病人血清均未见阳性反应。EPG>100组血清阳性率及抗原水平高于EPG<100。慢性血吸虫病人经吡喹酮治疗后一年,粪检阴性者大部分血清抗原转为阴性;粪检阳性者血清检查仍为阳性。结果表明,肠相关阴极抗原单克隆抗体3D8A能用于Dot-ELISA检测各期病人血清中循环抗原,并能反映病人感染度与药物治疗效果。

日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制研究

目的：探讨日本血吸虫感染中循环抗原动态变化及其机制。方法：感染日本血吸虫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠淋巴结Ｂ细胞和小鼠骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０株）融合，制备抗血吸虫循环抗原不同表位的单克隆抗体组合后为探针，检测日本血吸虫病患者和正常人血清；晚期血吸虫病患者脾血和外周血；感染日本血吸虫兔和小鼠的门脉血和外周血。结果：获得９种抗日本血吸虫单克隆抗体，将其中抗不同抗原表位的单抗优化组合后使用，检测抗原的敏感性可提高４－８倍。用组合单抗建立的夹心ＥＬＩＳＡ和ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测慢性血吸虫病的敏感性分别为７４％和８４．２％，特异性分别为９６．１％和９５．７％。通过小鼠和家兔门脉血和外周血以及人的脾血和外周血循环抗原的比较研究表明，门脉血中的抗原水平明显高于外周血。结论：用组合单抗较用一种单抗提高检出率。ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测的不仅是循环抗原，同时还检测到免疫复合物，因此影响疗效考核。

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴和童虫免疫小鼠的抵抗力研究

本文报告用２５条、５０条、１５０条和３００条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴钻皮免疫或减毒童虫皮下注射免疫均能诱导小鼠产生有效的抗攻击感染抵抗力。以２５条免疫量为例，尾蚴钻皮及童虫皮下注射后的减成虫率分别为７２．１％和７０．４％，肝脏减卵率分别为６９．４％和５７．４％，小肠组织减卵率分别为７６．６％和８０．５％，免疫后的有效保护期为７．５个月。

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴免疫小鼠的细胞免疫应答和细胞因子的动态变化

目的 :检测细胞免疫在血吸虫疫苗保护性免疫中的作用。方法 :用紫外线减毒日本血吸虫尾蚴 30 0± 5条免疫小鼠及日本血吸虫尾蚴 2 5± 3条感染小鼠。于第 2 wk、4 wk、8wk和 12 wk分别用血吸虫成虫抗原 ( SWAP)、虫卵抗原 ( SEA )及丝裂原 ( Con A或 L PS)体外刺激脾细胞和腹腔巨噬细胞 ( M) ,观察脾淋巴细胞的增殖反应及 M产生 IL- 1和脾细胞产生 IL- 2的活性的动态变化。结果 :两组鼠的脾细胞于免疫或感染后 2 wk- 8wk经 SWAP或 SEA刺激 T淋巴细胞增殖反应显著增强 ,第 12 wk呈现明显抑制 ;免疫组的 M和脾细胞经 SWAP或 SEA刺激于接种后第 4wk IL- 1和 IL- 2活性均显著增高 ,感染组的 M和脾细胞经 SWAP刺激 IL- 1于第 8wk- 12 wk活性增高、IL- 2于第 12 wk活性增高。结论 :提示减毒尾蚴免疫接种能较早地激活 T细胞增殖和细胞因子产生 ,在血吸虫保护性免疫中起重要作用。

日本血吸虫病患者血清对噬菌体随机7肽库的免疫筛选

目的从噬菌体随机多肽文库中 ,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子。方法采用慢性血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Ig)作为配基 ,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白III表达的随机7肽文库。按吸附 -洗脱 -扩增的淘筛过程 ,经3轮免疫淘筛后 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并用斑点ELISA分析其诊断血吸虫病的价值。结果经3轮免疫淘筛后 ,特异性结合的噬菌体富集增加近100倍。用ELISA检测第3轮筛选后随机挑取的30个噬菌体克隆 ,有26个克隆能与慢性血吸虫病患者的血清Ig产生特异性反应 ,其中A值最高的2个克隆具有诊断血吸虫病的潜在价值。结论噬菌体随机肽库技术 ,可应用于分析、鉴定血吸虫抗原表位 ,继而为获得亚单位表位水平的诊断试剂和抗血吸虫病的短肽疫苗提供依据。

血吸虫病抗体的快速测定

抗体检测是血吸虫病诊断、鉴别诊断、流行病学调查和疫情监测的重要手段。环卵沉淀试验、间接血凝试验、间接法酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）已被广泛应用。特别是酶联免疫试验由于其方法的敏感、特异已被国内外公认，但根据世界卫生组织热带病规划署推荐的方法，整个反...

日本血吸虫病流行区人群细胞因子水平的初步研究

为了分析和比较日本血吸虫病流行区人群细胞因子应答水平的差异，提供血吸虫病流行区人群细胞免疫应答特征的基线资料。以鄱阳湖中的南山岛上３个毗邻的自然村为研究现场，根据粪检结果对试区１４～４１岁人群按年龄组随机抽样，选取粪检结果阴性的６５人，粪检阳性的６４人为研究对象。采用全血培养法，以血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）及可溶性成虫粗抗原（ＳＷＡＰ）刺激研究对象的血细胞产生细胞因子，检测培养上清中细胞因子的水平。结果表明，存在对血吸虫抗原刺激不产生相应细胞因子的个体，从细胞因子水平的均值来看，总体上，对ＳＥＡ的细胞因子应答水平较对ＳＷＡＰ的水平为高，每克粪卵数（ＥＰＧ）为０组的细胞因子平均水平显著高于ＥＰＧ大于０组的水平。研究结果提示，存在流行区人群细胞免疫应答水平被下调的可能性，其特征和机制值得进一步研究。

日本血吸虫病流行区人群特异抗原诱导IFN-γ的应答特征

[目的 ]观察日本血吸虫病流行区人群血吸虫抗原 IFN- γ的应答特征。 [方法 ]选择江西省鄱阳湖中的南山岛上三个毗邻的自然村作为观察试区 ,根据粪检结果对 14～ 41岁人群按年龄组随机抽样 ,选取粪检结果阴性的 6 5人、粪检阳性的 6 4人为研究对象。采用全血培养法 ,检测培养上清中血吸虫抗原特异性的 IFN- γ水平 ,并检测血清中特异性抗体水平。 [结果 ]化疗后 ,人群 IFN-γ诱生水平较化疗前显著升高 ;未再感染组 SEA特异的 IFN-γ水平显著高于再感染组 ;SEA特异的 IFN -γ水平与抗 SEA的 Ig G4抗体水平之间呈显著负相关。 [结论 ]本研究结果提示

裸露DNA疫苗pCDSj32的构建、鉴定及在小鼠骨骼肌细胞的表达

应用基因工程技术，对本室已经克隆的日本血吸虫成虫３２ｋＤａ蛋白分子的ｃＤＮＡ片段进行ＰＣＲ扩增，扩增产物亚克隆入高效真核表达载体ｐＣＤ，构建成功裸露ＤＮＡ疫苗ｐＣＤＳｊ３２。ｐＣＤＳｊ３２在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌细胞得到表达。表达产物可被小鼠抗３２ｋＤａ蛋白分子单抗识别。免疫荧光定位显示，表达产物不但存在于细胞浆，而且可结合于胞膜并被分泌至胞外。

日本血吸虫感染的免疫抑制现象与T细胞凋亡的关系

目的 研究日本血吸虫慢性感染阶段宿主免疫抑制现象与 T细胞凋亡的关系。方法 分离感染后不同时间的小鼠脾脏 CD4+ 和 CD8+ T细胞 ,用流式细胞仪动态检测 CD4+ 和 CD8+ T细胞的比值。两种细胞体外经成虫抗原刺激后 ,用原位末端标记处理 ,用荧光显微镜或电子显微镜观察细胞凋亡的形态学特征 ,用流式细胞仪动态检测 CD4+ 和 CD8+ T细胞的凋亡率。结果 CD4+ / CD8+ T细胞的比值 ,从感染后第 10周起明显下降 ,第 2 0周呈现 CD4+ / CD8+ T细胞的比值倒置。形态学观察证实 ,小鼠脾脏 CD4+ 和 CD8+ T细胞于体外 ,经成虫抗原刺激后呈现细胞凋亡所特有的形态学改变 ;感染血吸虫小鼠 CD4+ T细胞的凋亡率随感染时间的延长而明显增加 ;CD8+ T细胞的凋亡率低下 ,且不随感染时间的延长而变化。结论 日本血吸虫感染慢性阶段宿主免疫功能减退、CD4+ /CD8+ T细胞的比值下降与 CD4+ T细胞的凋亡有关。

日本血吸虫感染小鼠组织内的抗原、抗体定位

应用间接荧光抗体试验(IFAT)检测小鼠感染血吸虫后肝、肠内抗原,结果感染后4wk未检出抗原,6wk抗原水平显著升高,10—12wk达到高峰、其几何均数倒数分别高达512和483。组织内虫卵肉芽肿的病变,亦最为显著,而肝内虫卵肉芽肿的直径显著大于肠内的。用直接荧光抗体试验(DFAT)及IFAT测定小鼠感染血吸虫后肝、肠组织内抗体,结果在感染6wk后,三种抗体(IgG、IgM和IgA)均达低水平,10—12wk均显著上升,而肝、肠组织内IgG抗体则非常显著地高于IgM和IgA的。提示血吸虫虫卵肉芽肿的免疫应答,主要是IgG抗体。

晚期血吸虫病患者肝脾内T细胞亚群的定位观察

采用免疫组织化学技术检测了22例晚期血吸虫病（下称晚血）患者肝内T细胞亚群，发现T细胞集中分布于虫卵肉芽肿外层，在非肉芽肿部位散在分布于虫卵附近，而广泛纤维化的区域内无T细胞浸润。肉芽辟和非内芽肿部位的T细胞均以CD8+细胞为主。19例患者脾脏内T细胞观察，发现脾脏动脉周围淋巴鞘和边缘区的CD4+细胞百分比和CD4+／CD8+比值显著降低，CD8+T细胞百分比明显提高，而且由于脾脏纤维化，导致红素区T细胞稀疏，动脉周围淋巴鞘T细胞外移，本文讨论了以上结果在晚血免疫调控中的作用。

非游离循环抗原组分对血吸虫感染宿主虫卵肉芽肿保护性免疫调节机制的研究

首次采用特殊方法从感染兔红细胞上分离、纯化两种血吸虫组分抗原SjR47和SjR12，实验结果证明，前者属卵源性抗原，后者为虫源性抗原．两次实验结果均表明，两种组分抗原能诱导出明显的抗病免疫力，实验1获得54．95％－72．36％的肝内减卵率，实验2获得52．57％－57.27％的肝内减卵率和50.73％－74．70％的成熟卵减少率，并均可使肝内肉芽肿病变明显减小，尤以SjR47效果显著．两种抗原诱导的抗肝内肉芽肿保护性免疫调节机制的研究结果表明，两者均能诱导小鼠产生高水平的IgG，测定IgG及其亚类动态显示，在感染后0－12wk时，免疫小鼠血清IgG和IgG_1水平均显著高于佐剂和感染对照组者（P＜0.01），特别是能反映保护性免疫力指标的IgG_1升高非常明显：SjR47免疫鼠的脾T淋巴细胞亚群表型动态研究显示，SjR47免疫鼠的CD4~＋和CD8~＋T细胞在感染4wk时均升高，随后下降．CD4~＋／CD8~＋比值也随时间延长而下降，呈现免疫下调，其变化趋势同肉芽肿病变减小相一致；SjR47免疫鼠的细胞因子水平动态观察结果表明，SjR47免疫鼠后可使TNF－α在小鼠体内的活性水平较平显著上升（成虫期前），减弱了TNF－α对虫卵肉芽肿形成的介导作用以及对雌虫排卵的促进作用，导致肝内肉芽肿病变减小和虫卵减少。本研究结果表明。

日本血吸虫磷酸丙糖异构酶小鼠免疫试验

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫分离的天然磷酸丙糖异构酶抗原（ＳｊｃＴＰＩ）免疫小鼠后对尾蚴攻击感染的保护性作用。方法：采用丙酮沉淀法从日本血吸虫大陆株成虫中提取天然的ＴＰＩ抗原，并以所提纯的ＳｊｃＴＰＩ抗原加福氏佐剂经皮下和肌肉注射免疫ＮＩＨ小鼠，攻击感染后６ｗｋ收集小鼠血清并计数成虫负荷及肝、肠组织虫卵数。同时设有日本血吸虫成虫抗原（ＳＷＡＰ）免疫对照组和攻击感染对照组。结果：天然ＳｊｃＴＰＩ抗原免疫小鼠后减虫率为２１．４％－２５．０％，肝组织减卵率达５７．８％－６０．３％；ＥＬＩＳＡ法检测ＴＰＩ免疫小鼠血清抗ＴＰＩ抗体ＯＤ值明显高于对照组小鼠的ＯＤ值（Ｐ＜０．０５）。结论：天然的ＳｊｃＴＰＩ抗原具明显的免疫原性和抗原性，可以继续进行编码ＴＰＩ基因的克隆与表达。

日本血吸虫 26 kDa 谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗的研究及其保护性免疫效果观察

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫３次后，免疫鼠产生一定水平的抗血吸虫抗体。用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫小鼠，结果ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６免疫鼠减虫率分别为３７．１９％和４４．４４％，肝组织减卵率为７３．８０％和４７．２０％，每对成虫产卵减少５６．８８％和１５．６７％。实验结果表明，日本血吸虫Ｓｊ２６ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定水平的保护性免疫力，预防血吸虫尾蚴感染。

慢性血吸虫感染患者自发性抑制性T细胞功能和T细胞亚群的改变及其相互关系

检测了14例慢性血吸虫病(下称慢血)和25例晚期血吸虫病(下称晚血)患者外周血自发性抑制性T细胞(STs)功能,对所有慢血患者和15例晚血患者同时检测外周血T细胞亚群。结果慢血和晚血患者STs功能均显著增高,CD^+_3(全T细胞)百分比和CD^+_4(辅助性T细胞)/CD^+_8(抑制性/细胞毒T细胞)比值明显降低,CD^+_8细胞百分比升高,CD^+_8细胞百分比和CD^+_4/CD^+_8比值分别与STs功能呈正相关和负相关。对STs功能和T细胞亚群在慢性血吸虫感染免疫调控中的作用进行了讨论。

斑点-ELISA和独特型/抗独特型抑制试验检测日本血吸虫病患者循环表膜抗原

将血吸虫成虫表膜机原的单克隆抗体8SE4联接辣根过氧化物酶制成结合物,用于直接法斑点-ELISA检测循环抗原。结果48例血吸虫病患者的阳性率为81.3％(39例),24例正常人未出现假阳性反应。检测华支睾吸虫及并殖吸虫病患者各18例,均无交叉反应。本结果证实日本血吸虫病患者血清中有循环表膜抗原存在。直接法斑点-ELISA方法简便,具有较高的敏感性和特异性,可作为诊断日本血吸虫病的补充方法。本文还报告了独特型/抗独特型(8SE_4/抗8SE_4)抑制试验检测循环表膜抗原的初步结果。