实验性肝损伤大鼠肝脏HO-1的表达及CO水平变化

目的研究急性肝损伤时大鼠肝脏HO1的表达情况和CO水平,探讨HO1和内源性CO在大鼠急性肝损伤中的作用。方法制备急性四氯化碳肝损伤模型,采用RTPCR和免疫组化法测定不同时间点大鼠肝脏HO1mRNA和蛋白的表达情况;测定各时间点肝组织SOD、MDA含量变化,同时测定股静脉血中HbCO水平和ALT、AST肝功能指标。结果HO1mRNA在正常大鼠有弱表达,染毒3h后表达显著增强,于24h时间点表达最强,与对照组相比差异非常显著(P<0.01);免疫组化结果显示;HO1蛋白在正常大鼠表达较低或无,染毒3h后即有明显表达,16至48h的时间点内表达均显著增强,主要定位于肝实质细胞、库普细胞的胞浆内。对照组HbCO水平极低,给予四氯化碳3h后HbCO水平开始升高,此后各时间点均明显高于对照组,差异有显著性,这与HO1表达情况相一致。此外,染毒后大鼠血清ALT、AST和MDA明显升高,SOD活性则显著降低,和对照组相比差异均十分显著。结论大鼠急性肝损伤后出现HO1表达持续上调和血中CO水平迅速增高,提示HO/CO系统参与急性肝损伤的病理生理过程,其表达增加可能对机体有重要调节作用。

原代培养大鼠肝星状细胞、枯否氏细胞及肝素的干预作用

目的同步分离培养大鼠肝星状细胞及枯否细胞,应用肝素进行干预,观察肝素在体外对肝星状细胞及枯否细胞的影响。方法应用Nycodenz一步密度梯度离心法一步分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞及枯否细胞。分别将不同浓度的肝素加入肝星状细胞和枯否细胞培养板中,应用MTT比色法检测各组肝星状细胞和枯否细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、转化生长因子β1(TGFβ1)、层连蛋白(LN)的表达。结果加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的肝星状细胞0D值分别为0.0626±0.0137、0.0746±0.0131和0.1106±0.0198。加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的枯否氏细胞0D值分别为0.1340±0.0270、0.1540±0.270和0.2120±0.0444。二肝素组肝星状细胞、枯否氏细胞0D值均显著低于未加药组。高浓度肝素组肝星状细胞及枯否氏细胞OD值较低浓度肝素组为低,但无显著性差异。加入肝素的肝星状细胞αSMA、TGFβ1,LN的表达较未用药的肝星状细胞为弱。高浓度肝素组αSMA、TGFβ1LN的表达较低浓度肝素组弱。结论肝素可抑制肝星状细胞的增殖、活化及胶原的分泌,且对枯否氏细胞也具有抑制作用。