中国北方人苯丙氨酸羟化酶基因外显子7内新突变的鉴定

应用ＰＣＲ－单链构象多态性分析及ＤＮＡ直接测序，对４５例中国北方苯丙酮尿症（ＰＫＵ）患者苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子７内突变进行了鉴定。共检出６种错义突变及一种静止突变：Ｒ２４３Ｑ．Ｒ４１Ｈ，Ｇ２４７Ｖ．Ｌ２４９Ｈ．Ｐ２５４Ｉ．Ｇ２５７Ｖ和Ｖ２４５Ｖ。经与国际ＰＡＨ基因突变数据库比较，确认Ｇ２５７Ｖ．Ｐ２５４Ｉ和Ｌ２４９Ｈ为国际上首次发现的突变。结果揭示，中国人与其他种族及中国北方与南方人群ＰＡＨ突变特点不同。明确了中国北方人群中ＰＡＨ基因外显子７基因突变分布，有助于提高ＰＫＵ的基因诊断率，对基因的起源。

中国北方人PAH基因外显子6,12的突变研究

目的：检测中国北方人中苯丙酮尿症（ＰＫＵ）患者苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子６，１２ 中的突变。方法：应用聚合酶链反应—变性梯度凝胶电泳（ｐｏｌｙｍ ｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ， ＰＣＲ－ＤＧＧＥ）及直接测序方法，检测突变。结果：中国北方人３４ 例ＰＫＵ 患者外周血ＤＮＡ 中鉴定ＰＡＨ 基因外显子６，１２ 中的３种突变：Ｙ２０４Ｃ，Ｑ２３２Ｑ 和Ｒ４１３Ｐ，其频率分别为５．９％ （４／６８），４．４％ （３／６８），５．９％ （４／６８）。结论：本实验提示Ｑ２３２Ｑ 可能为中国北方人中较常见的一种新突变，并可能为协助苯丙酮尿症的诊断提供方便手段。同时证实了ＤＧＧＥ法不仅是一种高效快速的突变检测技术，而且作为一种鉴定已知点突变及通过连锁分析进行产前诊断的简便策略。

苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复序列多态性应用分析

采用苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复序列扩增片段长度多态性连锁分析法,对22个苯丙酮尿症(PKU)家系进行了分析。结果显示:22个PKU患者的家庭均能获得多态信息,其中能获得100％多态信息的有9个家庭,占分析对象的40.9％。该方法快速简便,对未知基因突变的PKU家系的产前诊断提供了可能性,达到快速基因诊断的目的。

Guthrie法诊断苯丙酮尿症最适条件的研究 Ⅰ 检验用培养基的选择及拮抗剂浓度的确定

试验以枯草芽胞杆菌ＡＴＣＣ６６３３株为材料，研究可诊断苯丙酮尿症（ＰＫＵ）Ｇｕｔｈｒｉｅ检验用培养基的选择及拮抗剂（β－２－噻吩丙氮酸）的使用浓度及培养时间。试验结果表明，Ｄｅｍａｉｎ培养基在所试３种培养基中最适于Ｇｕｔｈｒｉｅ检验；拮抗剂在Ｇｕｔｈｒｉｅ检验中的最佳使用浓度为１．５０×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１与３．００×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１之间，并确定检验培养时间为１６ｈ。

家族性载脂蛋白B-100缺陷症的检测

目的：建立检测家族性载脂蛋白Ｂ－１００缺陷症（ＦＤＢ）的方法和研究ＦＤＢ与高脂血症和冠心病的关系。方法：用聚合酶链反应扩增载脂蛋白Ｂ－１００基因特定片段，以非放射性物质地高辛标记等位基因特异性寡核苷酸作为探针与扩增产物杂交，检测突变载脂蛋白Ｂ基因。结果：在１０３例高脂血症患者中发现１例突变，１００例冠心病患者中有２例突变，３４５例正常人中无突变者。结论：该基因与脂质代谢和冠心病有关；本试验方法简便、稳定。

云南经典型苯丙酮尿症基因Exon-11突变的检测

为了探讨云南省经典型PKU基因突变特征,为基因诊断提供依据,应用PCR-ASO探针斑点杂交和PCR-SSCP分析技术,对14个PKU家系14名患儿的PAH基因Exon-11进行检测.结果:检出两种突变Y356X(TAC→TAA)和V399V(GAT→GTT),突变频率均为714%,前者略高于北方人群,后者低于北方人群.提示:云南PKU患者PAH基因Exon-11突变不同于北方人群。

PCR-SSCP-银染法在基因突变分析中的应用

探讨 Ｐ Ｃ Ｒ－ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ－ 银染法在基因突变检测中的应用． 应用 Ｐ Ｃ Ｒ－ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ－ 银染法分析了苯丙酮尿症患者的 Ｐ Ａ Ｈ 基因外显子４ ， ７ ， １０ ， １１ 和１２ ， 并对部分样品进行 Ｄ Ｎ Ａ 测序． 结果： 检出部分已知突变如 Ｒ２４３ Ｑ， Ｒ４１３ Ｐ 等， 并发现当 Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 带型不同于阳性、阴性对照时， 或是外显子其它突变， 或是内含子碱基变化引起， 也可见于碱基序列正常的样品中． 结论： Ｐ Ｃ Ｒ－ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ－ 银染法在有较好对照， 严格控制影响因素条件下， 简便、实用， 是多样品筛查、 Ｄ Ｎ Ａ 测序前筛查的较好方法．

用气相色谱-质谱仪检出丙酸血症

采用尿素酶法及气相色谱 -质谱仪检测临床疑有代谢性疾病患儿的尿液。结果检出 5例丙酸血症。表明本方法比传统方法能更准确、快速地对丙酸血症作出化学诊断及鉴别诊断。

云南经典PKU基因外显子4、10和12突变的检测

目的：探讨云南经典ＰＫＵ的基因突变特征。方法：应用ＰＣＲˉＳＣＰ和ＰＣＲ－循环测序技术对云南１３个ＰＫＵ家系１４名患儿的ＰＡＨ基因外显子４、１０和１２进行了检测。结果：Ｒ４１３Ｐ、Ｗ３２６Ｘ的突变频率分别是７１４％、３５７％；Ａ／Ｃ杂合频率是１０７１％，同时检测到外显子４的３种异常带型。结论：云南ＰＫＵ患者的基因突变不同于北方人群，Ｐ４１３Ｐ、Ａ／Ｃ杂合率约为北方人群突变的１／２；Ｗ３２６Ｘ则高于北方人群；外显子４的突变也可能高于北方人群。

应用ARMS法对一苯丙酮尿症家系PAH致病基因的检测

应用ＡＲＭＳ法对一个ＰＫＵ家系进行了致病基因的检测。在对等位特异性ＰＣＲ产物进行琼脂糖凝胶电泳、溴乙锭染色后证实：患儿为Ｉｎｔｒｏｎ４切拼受端与Ｒ４１３Ｐ点突变的复合杂合子，其父母分别为上述致病基因的携带者。结果表明：此体系可以作为产前诊断ＰＫＵ的手段之一。

高精氨酸血症的酶学诊断

本文介绍了红细胞精氨酸酶活性测定法。测定了10例正常人,1例高精氨酸血症及其家系的精氨酸酶活性。结果显示患者精氨酸酶活性缺乏,其父母及大姐为杂合子携带者,二姐与舅酶活性正常。

苯丙酮尿症及其影像学表现

苯丙酮尿症是较常见的一种氨基酸代谢异常病，主要表现为智能低下和癫痫发作，早期诊断和治疗是决定预后的关键。本文介绍该病的影像学表现，以更好评估脑部病变。

Guthrie法诊断苯内酮尿症最适条件的研究Ⅱ检验用培养基中琼脂含量及菌孢子浓度的确定

试验以枯草芽胞杆菌ＡＴＣＣ６６３３株等材料，研究了诊断苯丙酮尿症（Ｐｋｌ）Ｇｕｔｈｒｉｅ检验的有关条件。其结果为，以２．００×１０５／ｍＬ菌孢子浓度，０．５％琼脂含量并制成３ｍｍ厚的Ｄｅｍａｉｎ培养基，最适宜Ｇｕｔｈｒｉｅ检验。

微型双向薄层色谱分析诊断氨基酸代谢病(附24例检测报告)

本文采用微型双向薄层色谱(TLC)分析法,检查了遗传门诊中24名可疑有氨基酸代谢异常的初筛病儿,对其中18例做了血、尿TLC分析,11例诊断为异常,其中8例为苯丙酮尿症(PKU)。3例为同型胱氨酸尿症(HCU)。该检测方法简便、灵敏、快速、重复性好,是诊断氨基酸代谢病的一个良好方法。

细菌抑制法筛查12912例新生儿苯丙酮尿症结果分析

目的了解贵阳市新生儿苯丙酮尿症的发病率 ,探讨用细菌抑制法作新生儿苯丙酮尿症筛查在我市乃至我省推广应用的可能性及方法学等问题。方法用Guthrie细菌抑制法。结果筛查出一例苯丙酮尿症患儿。结论用Guthrie细菌抑制法作新生儿苯丙酮尿症筛查推广使用是可行的。

苯丙酮尿症(PKU)细菌抑制法测定影响因素的研究

目的 分析影响细菌抑制法检测苯丙酮尿症（ＰＫＵ）的因素。规范细菌抑制法ＰＫＵ诊断法。杜绝假阳性和假阴性。方法 固体培养，吸取枯草芽胞杆菌ＡＴＣＣ６６３３孢子。加入β－２噻吩丙氨酸，制成ＰＫＵ培养基，３７℃，培养１７小时，观察菌环生长直径。结果 血片温度为１２０℃、３分钟时间过长破坏样本中苯丙氨酸，如果不高压则有棕红色环形成。采血纸的质地和厚度影响菌环生长直径；

苯丙酮尿症(PKu)筛查技术的临床应用

苯丙酮尿症（ＰＫｕ）筛查技术的临床应用曹建平吴福生芦秀英安阳市妇幼保健院遗传研究室（４５５０００）苯丙酮尿症是第一个被发现可以早期诊断和治疗的先天性氨基酸代谢病。发病机理是由于患儿肝内缺乏苯丙氨酸羟化酶致使苯丙氨酸不能转化为酪氨酸，以致大量的苯丙氨酸...

Guthrie细菌抑制法检测苯丙酮尿症漏诊原因的研究

苯丙酮尿症患儿服用盐酸青霉素钾片前后分别采取指血滤纸上，在Ｇｕｔｈｒｉｅ培养基中加入一定浓度的青霉素酶，将血样在培养基中进行培养。结果证明，由于各种原因所引起的患儿体内血液含有一定浓度的抗菌素可抑制ＡＴＣＣ６６３３株枯草杆菌生长，引起苯内酮尿症漏诊，青霉素酶可消除上述影响。Ｇｕｔｈｒｉｅ细菌抑制法中ＡＴＣＣ６６３３株枯草杆菌芽孢萌发时利用苯丙氨酸的生化特性不稳定，在一定条件下可消失。

联合应用STR与A/C连锁分析进行PKU的产前基因诊断

目的：对经典ＰＫＵ快速、高效易推广的产前基因诊断方法进行探讨。方法：用ＳＴＲ－Ａｍｐ－ＦＬＰ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对云南１３个ＰＫＵ家系的ＰＡＨ基因内ＳＴＲ与Ａ／Ｃ位点进行连锁分析。结果：检出２２４２５２ｂｐ的ＳＴＲ８个等位片段，ＰＩＣ为０６９８、杂合率是５７６９％。用ＳＴＲ和ＳＴＲ加Ａ／Ｃ的１００％基因诊断率是４６１５％和６１５４％，且ＳＴＲ加Ａ／Ｃ对所有家系均能提供信息。完成１例风险胎儿的产前诊断和２例回顾性的基因诊断。结论：以ＳＴＲ－Ａｍｐ－ＦＬＰ为主要手段、辅以Ａ／Ｃ位点分析，是一简便、快速易于在基层医院推广的ＰＫＵ产前诊断方法。