NF-κB抑制剂对烫伤脓毒症大鼠致炎/抗炎细胞因子表达的影响

目的 观察NF κB抑制剂对动物主要器官致炎 /抗炎细胞因子基因及蛋白表达的调节效应 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 34只动物随机分为正常对照组 (n=6 )、烫伤 (2 0 %TBSAⅢ度 )对照组 (n=6 )、烫伤后金葡菌感染组 (n=12 )和NF κB抑制剂二硫氨基甲酸酞吡咯烷 (PDTC)拮抗组 (n =10 ) ,检测动物肝、肾、肺组织中TNF α、IL 10基因及蛋白表达的改变。结果 烫伤脓毒症组 0 5～2h肝、肺、肾组织中TNF αmRNA表达迅速增强 ,同时各组织TNF α蛋白水平亦显著升高。PDTC早期干预对肺脏TNF αmRNA及蛋白水平影响不明显 ,但肝、肾组织其表达量在 2h均被显著抑制 (P <0 0 5或 0 0 1)。烫伤合并金葡菌感染后 2h大鼠肝、肺、肾组织IL 10mRNA与蛋白水平均显著升高 (P <0 0 5或 0 0 1) ,早期给予PDTC对肺、肾组织各时间点IL 10mRNA与蛋白表达均无明显影响 ,肝组织仅 2h呈现一定程度地下降。结论 NF κB抑制剂在有效拮抗G+ 菌脓毒症TNF α等致炎介质的同时 ,对机体并存的抗炎细胞因子反应机制具有保护作用。

NF-κB在烧伤脓毒症大鼠肝损伤中的作用

目的 研究NF κB在烧伤脓毒症大鼠急性肝损害中的作用。方法 采用 30 %Ⅲ度烫伤加内毒素攻击大鼠模型模拟临床烧伤脓毒症 ,6 3只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烧伤脓毒症组、烧伤脓毒症 +NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC)组、单纯PDTC处理组 ,采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)分析肝脏NF κB活性 ,免疫印迹 (Westernblotting)法检测肝脏IκB α表达 ,酶联免疫吸附试验检测肝脏TNF α含量的变化。结果 NF κB于伤后 1h明显活化并达到高峰 (P <0 0 5 ) ;IκB α表达先减少 (P <0 0 5 )后逐渐恢复 ;NF κB抑制剂PDTC可以降低NF κB的活性和减少TNF α的释放 ,同时明显降低血清ALT、AST含量。结论 抑制NF κB活性有助于减轻烧伤脓毒症时肝脏的急性损害。

脓毒症大鼠多器官白介素18表达及其与内毒素血症的关系

目的 观察盲肠结扎穿孔术 (CLP)所致脓毒症大鼠重要脏器白介素 18(IL 18)基因表达的变化规律 ,并初步探讨IL 18与内毒素血症的关系。方法 5 4只Wistar大鼠随机分为正常对照组 (n =6 )、CLP组 (n =36 )和重组杀菌 /通透性增加蛋白 (rBPI2 1)治疗组 (n =12 ) ,检测动物肝、肺、肾组织中IL 18mRNA表达水平、内毒素水平和器官功能指标的改变。结果 CLP大鼠肝、肺组织内毒素水平迅速升高 ,于 2h达峰值 (P <0 0 1) ,4 8～ 72h又再度回升 ;肾组织内毒素水平升高较晚 ,于 12h达峰值 (P <0 0 1)。rBPI2 1治疗后各组织内毒素水平均显著降低 (P <0 0 5或 0 0 1)。CLP术后各组织中IL 18mRNA表达显著升高 ,分别于 6～ 12h达峰值 (P <0 0 5 ) ,其后下降。rBPI2 1治疗可显著抑制CLP术后 12h大鼠肺、肾组织IL 18mRNA表达 (P <0 0 5 ) ,肝脏IL 18mRNA表达也降至正常范围。此外 ,与CLP组相比 ,rBPI2 1治疗动物血清谷丙转氨酶、肌酐水平和肺组织髓过氧化物酶活性均显著降低。结论 严重腹腔感染后大鼠体内IL 18mRNA表达明显上调 ,其改变与内毒素的刺激作用密切相关 ;IL 18作为一种重要的促炎细胞因子参与了脓毒症的发生、发展过程。

严重腹腔感染大鼠JAK/STAT通路活化与多器官功能损害的关系

目的 观察Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )通路在腹腔感染所致脓毒症大鼠组织中的活化规律及其与多器官功能损害的关系。方法 采用盲肠结扎穿孔 (CLP)法制作大鼠脓毒症模型。大鼠随机分为正常对照组、CLP组、JAK 2抑制剂 (AG4 90 )组和STAT 3抑制剂 (雷帕霉素 ,RPM)组。留取肝、肺、肾、肠组织测定STAT1/ 3活性 ,同时测定血清AST、BUN含量及肺组织髓过氧化物酶 (MPO)和肠组织二胺氧化酶 (DAO)活性。结果 CLP后 2h肝、肺、肠组织中STAT1均迅速活化 ,6～ 2 4h达高峰 ,而肾组织STAT1活化相对迟缓。肝、肺组织中STAT3活性亦明显升高 ,但肾、肠组织中未检测到活化的STAT 3。AG4 90、RPM早期处理后 ,除肾组织外 ,其他组织STAT1活性均有不同程度下降 (P <0 0 5或 0 0 1) ,肝、肺组织STAT3活性也显著降低。同时 ,AG4 90、RPM处理组血清AST、BUN水平和肺组织MPO活性在 2 4～ 4 8h均有不同程度下降 (P <0 0 5或 0 0 1) ,但小肠DAO活性无明显改变。结论 STAT1、STAT3在脓毒症时高度活化 ,并参与了严重腹腔感染所致脓毒症的病理过程。抑制JAK/STAT通路活化有助于多器官功能损害的防治。

NF-κB抑制剂对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的 观察NF κB抑制剂———二硫氨基甲酸酞吡咯烷(PDTC)对内毒素休克大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响。方法 采用内毒素休克模型 ,4 7只大鼠随机分为正常对照组 (n=8)、内毒素休克组(n =2 4 )和PDTC拮抗组 (n=15 ) ,留取肝、肺、肾组织检测HMGB1mRNA表达及相应器官功能指标的变化。结果 内毒素攻击可导致动物肝、肺、肾组织HMGB1mRNA表达广泛上调 ,分别于 2～6h显著增高 (P <0 0 5 ) ,12h呈现进一步升高趋势。PDTC处理后 12h肝、肺、肾组织HMGB1mRNA表达均显著下调 ,其中肾组织于 2～ 12h趋于伤前范围 ;同时 ,血清ALT、AST、BUN、Cr水平于 6h明显降低 (P <0 0 5 ) ,肺组织髓过氧化物酶活性各时相点均显著低于内毒素休克组 (P <0 0 5 )。结论 NF κB抑制剂能显著抑制内毒素休克动物组织HMGB1mRNA的表达 ;NF κB信号转导通路参与了内毒素介导HMGB1基因表达的调控过程 ,并与脓毒症时的多器官功能损害密切相关。

拮抗高迁移率族蛋白B1对烫伤小鼠白细胞介素-35表达及T淋巴细胞免疫功能的影响

目的观察特异性拮抗高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对烫伤小鼠白细胞介素-35（IL-35）表达及T淋巴细胞免疫功能的影响。方法选择成年雄性BALB／e小鼠30只，按随机数字表法分为正常组、假伤组、烫伤组、Abox干预组，正常组6只，其余各组每组8只。将小鼠背部皮肤置于97℃恒温热水中6s造成约15％体表面积烫伤模型，Abox干预组小鼠烫伤后2h和12h腹腔注射HMGBl特异性拮抗剂Abo×300ug。烫伤后24h处死小鼠，取心、肝、脾、肺等组织，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组织中HMGBl和IL-35含量；用实时荧光定量反转录一聚合酶链反应（qRT-PCR）分析IL-35亚基p35和EB病毒诱导基因3（EBB）的mRNA表达水平；由脾脏提取单个核细胞检测HMGBl和IL-35分泌水平，分离脾脏淋巴细胞检测效应T细胞增殖活性及IL-2、γ-干扰素（IFN-γ）、IL-4分泌水平。结果与烫伤组比较，Abox干预后，各器官HMGBl含量和脾脏单个核细胞HMGB1分泌水平显著降低[心脏（mg／g）：65．78±4．42比110．49±11．19，肝脏（mgCg）：50．90±3．72比117．77±8．10，脾脏（mg／g）：83．34±3．90比149．84±11．93，肺脏（mg／g）：125．15±8．75比236．20±17．51，脾脏单个核细胞（ug／L）：34．57±0．69比73．66±19．03]；各器官组织p35和EBl3的mRNA表达[相对定量（RQ）值]及IL-35蛋白水平均有不同程度下降[p35mRNA（r{Q值）：心脏为0．91±0．62比19．74±18．05，肝脏为0．42±0．19比14．85±8．39，脾脏为1．99±1．12比21．94±6．90，肺脏为0．50±0．21比5．15±3．46；EB13mRNA（RQ值）心脏为0．63±0．61比74．25±15．19，肝脏为0．64±0．09比56．59±19．99，脾脏为1．24±0．48比32．72±3．34，肺脏为0．30±0．06比2．41±1．43；IL-35蛋白（ug，g：心脏为142．40±19．95比241．64±12．40，肝脏为272．68±14．90比409．76±21．60。脾脏为66．94±9．60比92．28±8．82，肺脏为235．88±15．65比193．50±27．06；均P〈0．05），脾脏T淋巴细胞增殖活性增强（A值：1．26±0．26比1．03±0．05）及IL-2分泌水平也显著升高（ng／L：153．48±26．64比101．77±34．55），IFN-γ／IL-4比值显著增加（7．44±1．70比0．33±0．07），差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论特异性拮抗HMGB1可显著下调烧伤小鼠重要组织IL-35表达水平，有效促进脾脏T细胞增殖及Th1功能极化，从而有助于改善严重烧伤后免疫抑制状态。

大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1诱生机制的初步探讨

目的 探讨腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱生的分子机制。方法 取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞置 2 4孔培养板中 (1× 10 6/孔 ) ,培养 3天后用内毒素 (LPS)刺激 ,观察LPS刺激与巨噬细胞HMGB1mRNA表达的时效关系及量效关系 ,同时观察氟达拉滨 (fludarabine,STAT1抑制剂 )及雷帕霉素 (rapamycin,STAT3抑制剂 )对HMGB1mRNA表达的影响。结果 LPS刺激可使大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA表达明显上调 ,于攻击后 2 4～36h达峰值 ,至 4 8h减弱。LPS的刺激剂量为 75～10 0ng/ml时 ,HMGB1基因表达明显增强。经氟达拉滨和雷帕霉素处理均可明显下调HMGB1基因表达。结论 LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1mRNA表达 ,其诱生机制与Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )途径密切相关。

高迁移率族蛋白B1对人原代支气管上皮细胞血管内皮生长因子表达和释放的影响

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人原代支气管上皮细胞(PBEC)血管内皮生长因子(VEGF)表达和释放的影响及可能调控机制。方法 (1)按浓度依赖性分组;给予HMGB1 0、100、500、2 000μg/L刺激细胞;(2)时间依赖性分组:设置空白对照,HMGB1 2 000μg/L刺激PBEC时间为6、12、24 h。四唑盐法检测上述方法干预PBEC后细胞活力;实时荧光定量PCR检测PBEC VEGF mRNA表达水平变化,双抗体夹心酶联免疫吸附实验法检测细胞培养上清液中VEGF的浓度。拮抗高级糖基化终产物受体(RAGE)观察其对HMGB1诱导表达和释放VEGF的影响。结果 HMGB1在不影响细胞活力的情况下,(1)HMGB1与PBEC VEGF的表达和分泌水平存在剂量-效应关系,HMGB1(500、2 000μg/L)浓度组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)随HMGB1 2 000μg/L刺激时间延长,VEGF的表达和分泌逐渐升高,呈时间依赖性,且12、24 h组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)HMGB1 2 000μg/L刺激PBEC 24 h显著增加VEGF表达和释放,拮抗RAGE后显著抑制了HMGB1诱导的VEGF表达和释放。结论 HMGB1通过受体RAGE途径的增加PBEC VEGF的表达和释放,从而参与慢性气道炎症的发生和发展,其相关分子机制仍需要进一步探讨。

蜂蛰伤致急性肾损伤患者高迁移率族蛋白B1的水平及意义

目的通过检测蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的水平,探讨其与蜂蛰伤致急性肾损伤的发生和发展的关系。方法收集30例蜂蛰伤致急性肾损伤患者和28例健康对照者的血清标本。应用抗体夹心ELISA方法检测血清HMGB1的水平;应用全自动生化分析仪、全自动血液分析仪检测生化指标,并分析HMGB1水平与各生化指标的相关性。结果蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清中HMGB1水平为(6.49±3.73 ng/m L),明显高于健康对照者的(1.01±0.67)ng/m L(P<0.01)。血清HMGB1水平明显与血清肌酐、肌酸激酶、肌红蛋白、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、尿α1微球蛋白呈正相关(P<0.01),而与血总胆红素及血红蛋白无明显相关(P>0.05)。结论蜂蛰伤致急性肾损伤患者血清HMGB1水平明显增高,且与疾病的发生发展密切相关,其可能通过影响肾小管功能参与蜂蛰伤致急性肾损伤的发生发展。

Janus激酶/信号转导子和转录激活因子通路与创伤脓毒症的关系

Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )通路因其简单的构成模式和独特的激活方式而备受关注 ,它参与了多种早期细胞因子的信号转导及调控过程 ,其中尤以IFN γ、IL 1、IL 6、IL 10、IL 4与JAK/STAT活化关系密切。新近研究发现 ,JAK/STAT通路对脓毒症晚期介质———高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达亦具有明显的调节作用 ,抑制该信号转导途径可下调HMGB1的表达 ,有利于防止创伤脓毒症所致器官功能损伤的发生与发展。深入了解JAK/STAT转导机制对于进一步认识脓毒症时炎症及免疫反应失调具有重要意义 ,可望为脓毒症的防治开辟新的干预途径。

siRNA抑制高迁移率族蛋白B1对机械牵张诱导肺泡巨噬细胞细胞因子表达谱改变的影响

目的 探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein,HMGB1）基因的表达对机械牵张诱导肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage,AM）细胞因子释放的影响.方法 将HMGB1 siRNA真核表达质粒（siHMGB1）在脂质体介导下转染AM,以转染siRNA-A质粒的细胞作为阴性对照.实验分为4组,siHMGB1未牵张组、siHMGB1牵张组、siRNA-A未牵张组和siRNA-A牵张组.将牵张组Bioflex弹性膜细胞培养板置于Flexercell 4000T应力加载系统中,给予细胞施加20%牵张应变,牵张频率为30次/min,牵拉/松弛比为1：1,牵张时间为24 h.采用RT-PCR和Western blot检测HMGB1 mRNA和蛋白表达,应用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测细胞培养上清中细胞因子浓度.结果 转染后与siRNA-A转染组比较,siHMGB1转染组细胞HMGB1 mRNA和蛋白表达均显著下降（P〈0.05）;siHMGB1转染细胞可显著抑制机械牵张诱导的IL-1 、IL-6、MIP-2、MCP-1、IFN-γ和IP-10释放（P〈0.05）.结论 应用RNA干扰（RNAi）技术可以有效抑制HMGB1 mRNA和蛋白的表达,进而抑制机械牵张诱导的细胞因子释放,为机械通气所致肺损伤（ventilator-induced lung injury,VILI）的基因治疗提供新思路.

高迁移率族蛋白B1与强直性脊柱炎的相关性

目的探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGBl)与强直性脊柱炎(ankylo-sing spondylitis,AS)活动期的相关性,为AS的治疗提供新的理论依据。方法应用酶联免疫吸附试验检测AS患者(病例组)和健康查体者(对照组)血清HMGB1的水平及常规方法检测病例组血清C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、血小板计数(Plt)的水平,分析HMGB1与CRP、ESR、Plt的相关性。结果血清HMGB1呈偏态分布,以M(P25,P75)表达,病例组水平为68.41(44.65,258.23)ng/mL,对照组水平为57.31(33.22,115.50)ng/mL,两组差异有统计学意义(P<0.05)。HMGB1与CRP(rs=0.658,P=0.000)、ESR(rs=0.402,P=0.012)、Plt(rs=0.286,P=0.028)之间均呈正相关。结论 HMGB1与AS活动期具有相关性,HMGB1可能为AS病情活动的评估提供新的血清学指标。

脑出血患者血浆高迁移率族蛋白B1浓度的检测及临床意义

目的:揭示脑出血患者血浆高迁移率族蛋白B1浓度的变化,探讨其对预后的预测价值。方法:收集高血压性基底节区出血患者作为脑出血组,共98例。收集同期健康体检人群作为对照组,共40例。脑出血组静脉血在入院时获得。对照组静脉血体检时获得。ELISA检测血浆高迁移率族蛋白B1浓度。统计分析其与患者预后的相关性。结果:脑出血后1个月内死亡29例(29.6%)。t检验显示,脑出血组血浆高迁移率族蛋白B1浓度(7.6±2.7)ng/ml显著高于对照组(1.3±0.4)ng/ml(P<0.001)。多因素分析显示,血浆高迁移率族蛋白B1浓度与脑出血患者入院时GCS评分呈显著负相关(P<0.001),是脑出血1个月内死亡的独立危险因素(OR=1.384,95%CI=1.114～1.551,P<0.01)。ROC曲线分析显示,血浆高迁移率族蛋白B1浓度预测脑出血1个月内死亡有显著预测价值(曲线下面积=0.823,95%CI=0.759～0.892,P<0.001),且判定血浆高迁移率族蛋白B1浓度7.9ng/ml,对预测脑出血1个月内死亡有86.2%的灵敏度和79.7%的特异度。结论:脑出血后血浆高迁移率族蛋白B1浓度升高,临床检测这个指标有助于早期判断脑出血患者的预后。

脓毒症中骨骼肌有氧糖酵解增强与细胞Na^+、K^+、ATP酶活性改变间的关系

目的：观察和分析细胞膜有关的能量代谢状态改变对正常及脓毒症大鼠的不同类型骨骼肌乳酸产生量的影响。方法：借助大鼠脓毒症模型，建立伸趾长肌和比目鱼肌的充分供氧离体孵育系统，利用特异性Ｎａ＋、Ｋ＋、ＡＴＰ酶抑制剂——哇巴因，干预细胞膜钠钾泵的活性，采用ＮＡＤＨ荧光探针方法，检测骨骼肌组织细胞乳酸的产生量及其变化。结果：①应用哇巴因可显著降低正常及脓毒症大鼠肌肉组织的乳酸产生量；②哇巴因对伸趾长肌有氧糖酵解过程的抑制作用较比目鱼肌更为明显。结论：在正常和脓毒症情况下，肌肉组织细胞有关功能活动的增强而导致的Ｎａ＋、Ｋ＋、ＡＴＰ酶活性升高是其乳酸产生增加的重要原因。

肠道细菌移位与急性胰腺炎继发感染

急性胰腺炎发病后期胰腺和胰周的继发感染成为影响急性胰腺炎死亡率的首要因素,因此,急性胰腺炎继发感染的发病机理和防治手段成为近10年来研究的重点.肠道细菌移位造成胰腺感染,这一观点被大量实验结果所证实并逐渐达成共识.本文综合阐述急性胰腺炎中肠道屏障破坏的机制和机体免疫系统的状况对细菌移位的影响,并对细菌移位途径和预防胰腺继发感染的措施作一简要探讨.

高迁移率族蛋白B1在烧伤小鼠大脑中表达的研究

目的:检测烫伤小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在大脑中的表达。方法:应用BALB/c小鼠15%TBSAⅢ度烫伤(95℃热水浸烫8 s)和假伤(室温水,8 s)模型,并以正常小鼠作为对照(6只)。在4、8、24和48 h(每个时间点6只)处死动物。采用苏木精-伊红染色观察大脑形态学改变,免疫荧光方法检测caspase-3和HMGB1在大脑的表达,ELISA方法检测大脑组织HMGB1含量。结果:15%体表面积Ⅲ度烫伤8 h即导致大脑发生显著性病理改变,如炎性细胞浸润,烫伤24 h大脑终纹出现caspase-3阳性细胞,而在假伤组未见特异性染色。免疫荧光染色发现,HMGB1位于假伤组小鼠神经细胞的胞核;而在烫伤后4 h即释放至细胞浆。释放到脑组织中的细胞外HMGB1在烧伤后24和48 h,显著高于假伤组和对照组(P<0.01)。结论:烫伤导致小鼠大脑HMGB1的分布和含量发生改变,可能参与了烧伤后脑损伤的病理过程。

m icroRNA-449b对高迁移率族蛋白B1介导树突状细胞功能的影响

目的:探讨mi R-449b在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)刺激树突状细胞(DC)中的变化及其对DC免疫功能的影响。方法:分别以10、100、1 000 ng/ml剂量的HMGB1刺激小鼠脾脏来源的CD11c+DC,于48后检测DC表面分子CD80、CD86、MHC-II及细胞内mi R-449b改变;流式细胞仪分析不同剂量HMGB1刺激对DC凋亡的影响。DC转染mi R-449b模拟物(mi R-449b)、抑制物(In-mi R-449b)及相应对照(mi R-NC、In-mi RNC)后,HMGB1(100 ng/ml)刺激48 h收取细胞,检测DC表面分子、凋亡改变以及与T细胞混合培养后T细胞增殖、分化功能的变化。结果:HMGB1刺激DC后,其表面分子随着剂量的增加表达上调,其中以100 ng/ml组上调最为明显,而大剂量(1 000 ng/ml)时表达有所下调;mi R-449b在48 h 100及1 000 ng/ml HMBG1组表达明显上调(P<0.05);随着HMGB1剂量的增加,DC在48 h凋亡逐渐增加(P<0.05)。转染mi R-449b可上调其在细胞内表达,而抑制物可抑制其表达;上调mi R-449b后HMGB1(100 ng/ml)刺激48 h DC表面分子CD86表达显著上调(P<0.05)、凋亡增加(P<0.01)、对T细胞的共刺激增殖效应减弱、混合性淋巴细胞反应中IL-4水平增多(P<0.01)、IFN-γ水平下降(P<0.05)。结论:mi R-449b可负性调控HMGB1介导DC免疫功能及促进其凋亡,进而在机体免疫反应障碍过程中发挥调控作用。

Toll样受体在高迁移率族蛋白B1诱导严重烧伤后枯否细胞分泌促炎性细胞因子中的作用

目的:探讨Toll样受体(TLRs)在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导严重烧伤后枯否细胞(KCs)产生促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β中的作用。方法:32只健康成年雄性SD大鼠随机分为两组。烫伤组大鼠采用背部置于98℃水中12 s的方法制成30%TBSAⅢ度烧伤模型并立即行液体复苏,假烫组以室温水替代98℃热水且不予液体复苏。伤后24 h,分离出肝脏KCs,分别以0、50、100、200 ng/ml HMGB1刺激48 h,ELISA法检测上清液中TNF-α和IL-1b含量。另将烫伤大鼠肝脏KCs随机分为对照组(正常培养48 h)、HMGB1组(100 ng/ml HMGB1刺激48 h)、HMGB1+TLR2/TLR4抗体组(以20μg/ml TLR2抗体或TLR4抗体培养2 h后加入100ng/ml HMGB1刺激48 h),ELISA法检测培养上清液中TNF-α和IL-1b含量,Northern blot法检测各组KCs中TNF-α和IL-1βm RNA的表达。结果:不同浓度HMGB1刺激严重烧伤及假烫大鼠KCs后,上清液中TNF-α和IL-1b含量呈剂量依赖性升高,且烧伤组水平明显高于假烫组(P<0.05或P<0.01);同时,KCs中TNF-α和IL-1b m RNA表达也显著升高。TLR2抗体和TLR4抗体均明显抑制HMGB1诱导的KCs产生TNF-α和IL-1b水平的升高,且TLR2抗体对HMGB1诱导的IL-1b升高的抑制作用强于TLR4抗体,而TLR4抗体对HMGB1诱导的TNF-α升高的抑制作用强于抗TLR2抗体。结论:TLR2和TLR4介导了HMGB1诱导严重烧伤大鼠KCs促炎性细胞因子TNF-α和IL-1b的表达。