WIN55212-2通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路抑制糖酵解并减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究大麻素受体激动剂WIN55212-2(WIN)对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,并探讨其通过糖酵解发挥作用的可能机制。方法:采用腹腔注射脂多糖(LPS)创建小鼠脓毒症ALI模型。将雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照(control)组、LPS组(腹腔注射10 mg/kg LPS)、LPS+WIN组(注射LPS前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN)和LPS+WIN+MHY1485[哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)活化剂]组(LPS造模前1 d腹腔注射10 mg/kg MHY1485,并在造模前30 min腹腔注射1 mg/kg WIN和10 mg/kg MHY1485),每组6只。造模24 h后取材,计算肺指数;HE染色观察肺组织病理变化;ELISA检测肺组织炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-10表达水平,以及血清乳酸和乳酸脱氢酶A(LDHA)水平;Western blot检测mTOR/缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-双磷酸酶3(PFKFB3)信号通路相关蛋白水平。结果:相比于control组,LPS组小鼠肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织中IL-10水平降低(P<0.05),IL-1β水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),磷酸化mTOR(p-mTOR)、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。相较于LPS组,LPS+WIN组肺指数降低(P<0.05),HE染色显示肺组织受损减轻,肺组织IL-1β水平降低(P<0.05),IL-10水平升高(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平降低(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平降低(P<0.05)。相较于LPS+WIN组,LPS+WIN+MHY1485组肺指数增加,HE染色显示肺组织受损,肺组织IL-1β水平升高(P<0.05),IL-10水平降低(P<0.05),血清乳酸和LDHA水平升高(P<0.05),p-mTOR、HIF-1α和PFKFB3蛋白水平升高(P<0.05)。结论:WIN55212-2可以减轻脓毒症小鼠ALI,其机制可能是通过调控mTOR/HIF-1α/PFKFB3信号通路,抑制糖酵解,减轻炎症反应。

脓毒症中医证型分布、病原学特征及T淋巴细胞亚群与预后的相关性研究

【目的】探究脓毒症中医证型分布、病原学特征及T淋巴细胞亚群与预后的相关性。【方法】采用回顾性分析方式,选取2020年1月至2022年1月在广州中医药大学第一附属医院重症医学科住院治疗的脓毒症患者86例,总结中医证型分布规律及病原学特征,并根据疾病分期分为脓毒症组33例和脓毒症休克组53例,比较2组患者的T淋巴细胞亚群及相关辅助检查指标,分析2组间的指标差异及与预后的相关性。【结果】(1)86例脓毒症患者的中医证型分布按频次从高到低排序依次为阴竭阳脱证33例(38.4%)、热毒炽盛证25例(29.1%)、痰热壅肺证15例(17.4%)、肺脾气虚证13例(15.1%)。(2)86例脓毒症患者中,肺部感染占比最高,达到54.7%(47/86);其他依次为尿路感染[22.1%(19/86)]、腹腔感染[9.3%(8/86)]、血流感染[9.3%(8/86)]、胆道感染[4.6%(4/86)]。肺部感染患者以革兰阴性菌感染为主,肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌为前3种最常见的致病细菌。31.9%(15/47)的肺部感染患者合并真菌感染。(3)脓毒症组的CD4^(+)、CD8^(+)淋巴细胞水平高于脓毒症休克组(P<0.01),血乳酸(Lac)、D-二聚体、序贯器官衰竭评分(SOFA)低于脓毒症休克组(P<0.01)。(4)相关性分析结果显示:CD8^(+)淋巴细胞与脓毒症患者不良预后呈负相关(P<0.05);SOFA评分、血Lac与脓毒症患者不良预后呈正相关(P<0.01);CD4淋巴细胞、D-二聚体与脓毒症患者不良预后无明显相关关系(P>0.05)。【结论】脓毒症患者阴竭阳脱证占比最高,肺部是脓毒症患者最常见的感染部位,且容易合并真菌感染;CD8淋巴细胞与脓毒症患者不良预后存在负相关关系,可作为脓毒症患者预后的预测指标。

芍药苷通过JNK/NEK7/NLRP3通路缓解脓毒症相关急性肾损伤

目的:基于细胞焦亡和JNK/NEK7/NLRP3通路,研究芍药苷(PF)对小鼠脓毒症相关急性肾损伤(SA-AKI)的作用和机制。方法:腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠SA-AKI模型。雄性6~8周龄C57BL/6J小鼠24只,随机数字表法分为4组:对照(control,Con)组(在相同时间腹腔注射等量含DMSO的PBS);LPS组(腹腔注射LPS 15 mg/kg);LPS+PF组(造模前30 min腹腔注射PF 50 mg/kg),LPS+PF+anisomycin组(造模前30 min腹腔注射PF 50 mg/kg和JNK激动剂anisomycin 20 mg/kg)。造模后24 h取材,HE染色观察肾组织病理变化,进行肾损伤Paller评分;ELISA检测肾损伤标志物:血肌酐(Scr)、肾损伤分子1(KIM-1)和炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18水平;Western blot检测磷酸化JNK(p-JNK)、NIMA相关激酶7(NEK7)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、gasdermin D的N端片段(GSDMD-N)蛋白变化。结果:相较于Con组,LPS组HE染色显示肾组织发生充血水肿,肾小管扩张管腔内出现颗粒或细胞样管型,肾间质出现充血水肿,Paller评分升高,Scr、血清KIM-1水平升高(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平升高(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N表达上升(P<0.05)。相较于LPS组,LPS+PF组HE染色及肾损伤Paller评分显示肾组织病理损伤情况减轻,Scr、血清KIM-1水平降低(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平降低(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N蛋白表达下降(P<0.05)。相较于LPS+PF组,LPS+PF+anisomycin组HE染色及肾损伤Paller评分显示肾组织病理损伤加重,Scr、血清KIM-1水平升高(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平升高(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N表达上升(P<0.05)。结论:芍药苷可能通过抑制JNK/NEK7/NLRP3信号通路,减轻细胞焦亡和炎症反应,改善SA-AKI。