VEGF和CD47双修饰外泌体靶向递送治疗沙漠干热环境热射病急性肾损伤的作用及机制研究

目的设计一种基于外泌体高效递送的方式,将VEGF和CD47双修饰的外泌体递送到热射病引起的肾损伤,减轻并修复肾损伤。方法构建靶向肾损伤的融合表达VEGF和CD47的质粒,转染至大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)后分离提取外泌体。通过透射电子显微镜及纳米颗粒跟踪分析、蛋白质印迹法等方法对外泌体进行鉴定。经大鼠尾静脉分别注射200μg DiD标记的未修饰外泌体、VEGF修饰的外泌体和VEGF-CD47双修饰的外泌体,采用小动物活体成像仪检测并分析外泌体对肾脏的靶向作用。60只SD大鼠随机分6组每组10只,sham组为空白对照组(A组,n=10),其余各组均复制热射病肾损伤模型。模型复制成功后12、24、36 h,B组给予相同剂量生理盐水;C组给予质粒空载体(Empty plasmids,Ep)组、D组给予Exos组、E组给予Exos^(VEGF)组、F组给予Exos^(VEGF-CD47)组。于3次给药治疗后第72小时取肾脏组织和血:从组织水平观察肾组织病理变化并进行损伤评分;检测血清血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)评价治疗效果;WB和qRT-PCR分析炎症介质TNF-α、NF-κB的表达水平;检测增殖调控信号分子Ki67、FGF2、pAMPK、pERK和纤维化调控分子FGF23,综合分析对增殖和抑制纤维化的作用。结果成功获取了BMMSCs和Exos^(VEGF-CD47)并进行鉴定,急性肾损伤模型动物均复制成功。Exos^(VEGF-CD47)在活体肾组织中比ExosCtrl组和Exos^(VEGF)组的荧光强度高(P<0.05)。治疗后72小时Exos^(VEGF-CD47)组,肌酐、尿素氮下降(P<0.0001);Exos^(VEGF-CD47)组Tubular casts score评分显著低于AKI+Exos组、AKI+Exos^(VEGF)组(P<0.0001);促炎因子TNF-α、NF-κB蛋白水平明显下调(P<0.0001);而Ki67、FGF2显著上调(P<0.05),FGF23显著下调(P<0.0001)。结论VEGF和CD47可以高效靶向热射病急性肾损伤,有效减轻损伤并促进修复,其机制可能与外泌体传递抑制肾组织炎症反应、促进增殖和抑制纤维化有关。

圣草酚对DOCA/Salt高血压肾脏损害的保护作用

目的探讨圣草酚(eriodictyol,ERD)对高血压小鼠肾脏损害的保护作用及可能机制。方法将30只C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组6只。分别为对照组(Ctrl)、高血压模型组(DOCA/Salt)、圣草酚低剂量(DOCA/Salt+ERD-L)、高剂量(DOCA/Salt+ERD-H)及阳性药培哚普利组(DOCA/Salt+Perindopril)。通过DOCA/Salt诱导经典的高血压模型,ERD持续给药4周,检测血压、血清尿素氮、肌酐等指标;苏木精-伊红染色(HE)、Masson染色观察肾脏病理学变化;Western blot检测肾脏上皮间充质转化EMT标志蛋白α-SMA、Vimentin、E-cadherin和FN的表达;Real-Time PCR检测肾脏炎症因子Nlrp3、TNF-α、IL-1β、IL-18、MCP-1和NADPH氧化酶(NOXs)的表达。通过Western blot检测小鼠TGF-β1、磷酸化(p)-Smad2、TLR4、NF-κB p65蛋白的表达水平。结果ERD干预能延缓高血压的发生,改善肾脏组织病理损伤,减轻肾脏胶原沉积,降低肾脏炎症和氧化应激水平,改善EMT蛋白水平,明显降低TGF-β1、p-Smad2、TLR4、NF-κB p65蛋白表达。结论ERD对DOCA/Salt高血压肾脏损害有明显保护作用,其机制可能与调控TGF-β1/Smad2、TLR4/NF-κB p65等信号通路有关。

基于血清Klotho蛋白的慢性肾脏病患者全因死亡预测机器学习模型的构建与验证

目的构建并验证包含血清Klotho蛋白在内的机器学习(machine learning,ML)模型来预测慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者全因死亡的风险。方法研究采用回顾性队列研究设计方案。选取2012年2月7日至2019年10月18日我科收治的CKD1~5期非透析成年患者病例资料,按照7∶3分为训练集和内部验证集。将47项常规临床特征(包括血清Klotho蛋白)用于为模型提供变量信息,在训练集中利用单因素Cox回归筛选可能的风险因素、Lasso-Cox回归模型筛选风险因素、多因素Cox逐步回归构建列线图风险预测模型,内部验证评估模型性能。结果共400例病例资料纳入分析,训练集280例,验证集120例。训练集有52例死亡,228例存活;验证集有21例死亡,99例存活。全因死亡风险预测模型显示5年生存率受试者工作曲线下面积(area under the curve,AUC)在训练集和验证集分别为0.760(95%CI:0.676,0.844)和0.788(95%CI:0.679,0.897),模型总体C指数在训练集和验证集分别为0.755(95%CI:0.685,0.826)和0.720(95%CI:0.614,0.826)。单因素Cox回归分析结果显示,年龄、心血管疾病病史、胱抑素C、碱性磷酸酶、白蛋白、嗜酸性粒细胞、血红蛋白、补体C3、钙、C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及血清Klotho蛋白可能是全因死亡的预测因子(P<0.05)。多因素Cox逐步回归最终筛选出年龄、白蛋白、补体C3及血清Klotho蛋白共4个独立预测因子(P<0.05),模型最终纳入了年龄、白蛋白、补体C3、血清Klotho蛋白共4个指标。结论成功构建并验证了基于血清Klotho蛋白的慢性肾脏病全因死亡预测机器学习模型;年龄大是CKD患者全因死亡的危险因素,白蛋白、补体C3及血清Klotho蛋白高是CKD患者全因死亡的保护因素。

外周血嗜酸性粒细胞升高对评估糖尿病肾病预后的临床价值

目的 评价外周血嗜酸性粒细胞计数(peripheral eosinophil count, PEC)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)预后中的临床价值。方法 收集2021年3月至2023年3月在我院肾内科经肾活检确诊的220例DN患者的血常规、肾功能相关指标等临床资料进行回顾性队列研究。根据X-tile 3.6.1生物信息软件计算PEC的最佳截点值;采用Cox比例风险回归模型及Kaplan-Meier生存分析肾脏预后。结果 PEC水平与血肌酐(serum creatinine, Scr)(r=0.245)、血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)(r=0.237)和血尿酸(blood uric acid, UA)(r=0.252)水平呈正相关,与估算肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)(r=-0.236)呈负相关。根据PEC的最佳截点值(0.29×10^(9)/L)将DN患者分为高水平组(>0.29×10^(9)/L)(n=41)和低水平组(≤0.29×10^(9)/L)(n=179)。与低水平组比较,高水平PEC组患者的Scr(P<0.001)、BUN(P=0.001)和UA(P=0.005)水平明显高于低水平组患者,eGFR低于低水平组患者(P<0.001)。多因素Cox比例风险回归分析显示,高水平PEC与肾脏预后不良相关(HR=2.20,95%CI:1.05~4.60,P=0.036);Kaplan-Meier生存分析提示,高水平PEC组患者终末期肾病(end-stage renal disease, ESRD)发生率明显高于低水平组患者(P=0.024)。结论 PEC水平与DN的进展及预后密切相关,是预测DN预后的潜在生物标志物。

DcR2与急性肾损伤患者临床及病理特征的相关性分析

目的拟探讨诱骗受体2(decoy receptor 2,DcR2)与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)患者临床指标与病理损伤的相关性。方法纳入陆军特色医学中心肾内科2018年1月至2021年11月51例经肾活检诊断AKI患者及对照患者20例。ELISA检测患者尿DcR2/Cr水平;相关性分析尿DcR2/Cr水平与肾小管DcR2表达量、肾功指标之间的相关性;利用免疫组化检测DcR2表达与定位,免疫荧光共染分析DcR2与肾小管间质纤维化标志物α-SMA、FSP1之间的共定位关系。结果AKI组尿DcR2/Cr显著高于对照组(P<0.05);DcR2特异性高表达于AKI患者肾小管上皮细胞,DcR2表达阳性率高于对照组(P<0.01);尿DcR2/Cr与尿素氮、肌酐呈正相关(r=0.426,P<0.05;r=0.462,P<0.05),与eGFR呈负相关(r=0.536,P<0.01);AKI组患者肾组织DcR2表达量与尿DcR2/Cr、肾小管萎缩及间质纤维化程度呈正相关(r=0.808、0.457,P<0.01);DcR2阳性的肾小管细胞周围高表达纤维化标志物α-SMA与FSP-1。结论AKI患者尿DcR2/Cr及肾组织DcR2表达变化与肾功能指标及肾组织慢性损伤密切相关,提示DcR2或可作为评估AKI损伤及预后的潜在生物标志物。

尿中细胞因子的测定在肾脏疾病诊治中的意义

细胞因子在肾脏疾病的发生、发展中起着重要的作用。尿中细胞因子的检测可能为肾脏疾病的诊断、预后及疗效观察提供了一非创伤性的指标。

肾脏疾病患者体液氨基酸模式

使用 DNS— cl( Dimethylamino-naphthylane-5-sulfony chloride)荧光试剂 ,标记氨基酸成 DNS— AAs( DNS_ Amino Acids) ,然后采用聚酰胺薄膜层析 ,制成具有 2 0余种 DNS— AAs的荧光薄膜层析图谱 ,选择其中所需要检测的氨基酸 ,分别经洗脱后在日本岛津 RF— 51 0荧光分光光度计上 ,进行定量检测 ,分析了 3 6例慢性肾炎患者 ,1 8例尿毒症患者血浆中 1 2种游离氨基酸和 3 5例慢性肾炎患者尿液中 1 3种游离氨基酸 ,分别与 2 9例正常人血浆和3 0例正常人尿液中游离氨基酸进行了比较 ,以此探讨肾脏疾病体液氨基酸模式的同时提供氨基酸治疗肾脏疾病的科学依据。

黄芪当归合剂对肾病综合征大鼠脂蛋白脂酶和卵磷脂胆固醇酰基转移酶的影响

目的：探讨黄芪当归合剂（合剂）调节脂代谢紊乱的可能机理。方法：在肾病综合征（ＮＳ）高脂血症及高胆固醇血症大鼠，观察合剂对血清白蛋白、血脂及脂质降解的两个关键酶脂蛋白脂酶（ＬＰＬ）和卵磷脂胆固醇酰基转移酶（ＬＣＡＴ）活性的影响。结果：ＮＳ大鼠出现明显低白蛋白、高脂血症，同时ＬＰＬ活性降低，ＬＣＡＴ活性相对不足；在ＮＳ大鼠应用合剂治疗后，不仅血清白蛋白明显升高、血脂明显下降，ＬＰＬ及ＬＣＡＴ活性亦明显增加；高胆固醇血症时ＬＰＬ及ＬＣＡＴ活性无明显改变，合剂对其活性亦无影响。结论：ＮＳ大鼠ＬＰＬ活性降低，ＬＣＡＴ活性相对不足是其高脂血症发生机理之一。合剂通过增加ＬＰＬ和ＬＣＡＴ活性，促进循环中含载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）。

仙灵脾减轻外源性糖皮质激素抑制神经内分泌免疫作用的临床与实验研究

目的：研究仙灵脾对外源性糖皮质激素抑制下丘脑－垂体－肾上腺－胸腺（ＨＰＡＴ）轴作用的保护效应。方法：临床选择需用强的松治疗的患者６５例，随机分为复方强的松组（强的松与仙灵脾合方）与强的松组，观察用药前后皮质醇和促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）及淋巴细胞增殖反应的变化；动物实验用皮质酮皮下注射造成大鼠 ＨＰＡＴ轴抑制模型，观察仙灵脾对 ＨＰＡＴ轴相关指标的影响。结果：血浆 ＡＣＴＨ、皮质醇和淋巴细胞增殖反应两组患者治疗前均无明显差异，治疗后强的松组明显下降，复方强的松组明显上升（ Ｐ＜ ０． ０５）。实验动物表现为下丘脑单胺类递质被激活；垂体、肾上腺、胸腺重量减轻；室旁核、正中隆起 ＣＲＨ神经细胞与神经纤维减少，肾上腺束状带与胸腺皮质萎缩；自然杀伤细胞细胞毒活性及淋巴细胞产生ＩＬ－２、γ－干扰素水平降低（Ｐ＜０．０５）；仙灵脾组上述各项指标较皮质酮组明显改善（Ｐ＜０．０５）。结论：仙灵脾具有减轻外源性糖皮质激素副作用的神经内分泌免疫学效应。

中西医结合治疗重症急性胰腺炎的疗效观察及护理

目的探讨大黄及前列地尔在治疗重症急性胰腺炎（SAP）中的效果。方法选择衡水市哈励逊国际和平医院消化内科2011年1月至2015年2月收治156例SAP患者，按随机数字表法分为常规治疗对照组、前列地尔组、中西医结合治疗组，每组52例。3组均给予西医常规治疗，前列地尔组在常规治疗基础上加前列地尔注射液10μg入壶，每日1次；中西医结合治疗组在前列地尔组基础上将大黄15g加沸水200mL浸泡10，15min，取浸出液冷却至37℃后灌肠。观察3组患者首次自主排便时间、腹痛缓解时间、住院时间的变化。结果前列地尔组、中西医结合治疗组治疗后首次自主排便时间、腹痛缓解时间、住院时间均较常规治疗对照组明显缩短，且以中西医结合治疗组的变化较前列地尔组更显著[首次自主排便时间（d）：2．3±0．7比3．6±0．9，腹痛缓解时间（d）：1．7±0．8比2．4±1．1，住院时间（d）：18．6±7．2比26．0±8．9，均P〈0．05]。结论大黄联合前列地尔治疗SAP，配合优质护理服务，可明显减轻患者腹痛、腹胀的症状，缩短住院时间，疗效肯定。此法操作简单，且大黄价廉易得，应用前景广阔。

黄芪对人肾间质成纤维细胞增殖和转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨黄芪对肾间质纤维化改善的作用机制。方法:体外培养人肾间质成纤维细胞(KFB),传至3代后分为3组:对照组(常规培养),血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)培养组(在培养液中分别加入10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L的AngⅡ),黄芪注射液干预组(分别于培养液中加入10-6mol/L的AngⅡ和10mg/L、20mg/L和40mg/L黄芪注射液)。作用48h后,各组用MTT比色法测定细胞增殖情况,用ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1的水平。结果:AngⅡ可促进KFB增殖,刺激TGF-β1的分泌,且呈剂量依赖性(r分别为0.612和0.723,P<0.05);黄芪注射液可抑制AngⅡ的上述作用,且呈剂量依赖性(r分别为-0.561和-0.689,P<0.05)。结论:黄芪可以通过抑制成纤维细胞增殖和TGF-β1的分泌,延缓肾间质纤维化进展。

中西医结合治疗胃肠疾病的思路方法

胃肠道疾病发生的根本机制是胃黏膜防护因子与攻击因子的失衡,若防护因子战胜攻击因子则不致发病,若攻击因子战胜防护因子则导致发病,胃内攻击和保护作用由多种因素介导,这些相关因素相互作用形成复杂的网络体系。现代医学的这种平衡失调的发病理论与中医学发病理论"正气存内,邪不可干","邪正相争,百病之由"的观点是相互吻合的,提示只有深入探讨中医药对胃肠保护因子和攻击因子的相关作用,才是提高临床疗效的关键。

川芎嗪治疗糖尿病肾病的近期疗效

川芎嗪(Ligustrazin,Lig)是中药川芎的有效成分,已广泛用于心、脑、肺、肾及血管疾病的治疗。但用于糖尿病肾病(diabetic nephopathy,DN)的治疗报道甚少。1993年至1997年6月我们应用Lig治疗DN 50例,发现其降低血脂、减少蛋白尿、改善血流变及肾功能疗效确切,报告如下。 1 资料与方法 1.1 临床资料 所有病例均符合1980年WHO糖尿病诊断标准,且除外其他肾病、心衰、糖尿病急性合并症、泌尿系感染者,除外糖尿病诊断之前即有高血压者。其中男27例,女23例,年龄24～70岁,平均52.6岁;病程4～13年,平均6.5年;

抗瘤增效方治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的观察抗瘤增效方对晚期非小细胞肺癌患者的临床疗效。方法61例确诊为Ⅲa、Ⅲb、Ⅳ期非小细胞肺癌患者随机分为治疗组(化疗加中药)32例,对照组(单纯化疗组)29例,均采用NP方案化疗2个疗程,治疗组在化疗同时口服中药抗瘤增效方。结果抗瘤增效方配合化疗可改善大部分临床症状,提高中位生存期及生活质量,增加体重,减轻血液和消化系统不良反应,提高机体免疫功能,降低肿瘤标志物CEA、VEGF、CYFRA21-1的水平,但在减小和稳定病灶方面与对照组比较,差异无统计学意义。结论抗瘤增效方与化疗合用具有减毒增效作用,是治疗晚期非小细胞肺癌的有效方法之一。

双倍剂量雷公藤多甙治疗原发性肾病综合征的近期疗效

目的：首次应用双倍剂量雷公藤多甙（ＴⅡ）治疗原发性肾病综合征，前瞻性观察其疗效。方法：１８例单纯肾病综合征患者（８例ＩｇＡＮ，４例ＩｇＭＮ，６例ＭｓＰＧＮ）均服用ＴⅡ２ｍｇ／（ｋｇ．ｄ）４周，观察蛋白尿变化及副反应。结果：１５例肾病综合征获得完全缓解，总缓解率达８３３％，其中ＩｇＡＮ（７例），ＩｇＭＮ（３例），ＭｓＰＧＮ（５例）的缓解率分别为８７５％，８３３％，７５０％。１５例中１２例在服药２周内获得缓解，部分对皮质激素不敏感者双倍剂量ＴⅡ仍然有效，无效仅２例。尿蛋白平板电泳分析标明对ＴⅡ敏感者尿蛋白呈高度选择性，而对ＴⅡ不敏感者含有较多大分子及小分子量蛋白质。所有患者均能耐受双倍剂量ＴⅡ，消化道反应及对肝细胞的损伤作用轻微，无一例出现严重白细胞减少。分别有２例患者在ＴⅡ迅速减量及继发上呼吸道感染后肾病综合征复发，但重新采用大剂量ＴⅡ或延长治疗时间仍有效。结论：双倍剂量ＴⅡ对临床表现为单纯肾病综合征，组织学病变为系膜增生的多种肾小球疾病具有良好的疗效。

1秒钟快速经皮肾活检术(附1507例术后并发症分析)

本文就6年来应用1秒钟快速经皮肾活检术检查1507例次肾脏病人所发生的术后并发症及其影响因素进行分析。 材料和方法 一、临床资料 1983～1988年间,对住院的各类肾脏病1429例进行1507例次肾活检,男964例次,女543例次,平均年龄28.5岁(6～65岁)。肾活检术适应证分别为:尿检异常54.1％、肾病综合征22.8％、肉眼血尿11.2％。

尿微量蛋白测定对肾脏病的临床意义

国内外学者对尿中各种微量蛋白分子的化学研究,对于阐明尿蛋白形成的生理及病理机制具有重要意义。1989年12月起我科用特异性酶联免疫(ELISA)法检测尿微量蛋白(Alb、IgG、IgA、IgM)共2445例。

血管紧张素转换酶基因多态性与糖尿病和糖尿病肾病的关系

目的：研究血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因多态性与Ⅱ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）发病及其与微血管合并症之间的关系。方法：应用ＰＣＲ方法对１３１例ＮＩＤＤＭ患者ＡＣＥ基因多态性进行了观察，并结合患者眼底和肾脏病变进行了分析。结果：ＮＩＤＤＭ患者ＤＤ型的发生频率明显高于正常人（Ｐ＜０．０１），ＤＤ型与ＮＩＤＤＭ的发生明显相关（ＯＲ＝４．２６，９５％可信限为１．９４８～９．３１４），ＮＩＤＤＭ患者伴眼底病变者ＤＤ型的发生频率明显高于无眼底病变的患者（Ｐ＜０．０５）。ＤＤ型与ＮＩＤＤＭ患者眼底病变的发生明显相关（ＯＲ＝４．６６７，９５％可信限为１．４１４～１５．４０）。ＮＩＤＤＭ患者伴肾病者ＤＤ型的发生频率明显高于无肾病患者（Ｐ＜０．０５），ＤＤ型与糖尿病肾病的发生明显相关（ＯＲ＝３．６３６，９５％可信限为１．１６８～１１．３２３）。结论：ＡＣＥ基因ＤＤ型与ＮＩＤＤＭ易感性相关，ＮＩＤＤＭ患者携带ＤＤ型者易罹患糖尿病眼底病变和糖尿病肾病。