4298例成年人肾小球疾病病理类型及流行病学特点

目的：了解我国成年人肾小球疾病病理类型及流行病学特点。方法：分析解放军肾脏病研究所１９８０～１９９６年间经肾活检确诊的肾小球疾病４２９８例。结果：原发性肾小球肾炎占７６８％，继发性肾小球肾炎２２８％，遗传性肾病０４％；原发性肾小球肾炎男∶女＝１８１∶１，继发性肾小球肾炎男∶女＝０４６∶１，两组间存在统计学差异（Ｐ＜００１）；原发性肾小球肾炎各型所占比例依次是：ＩｇＡ肾病（ＩｇＡＮ）３６９％、系膜增生性肾小球肾炎２９７％、膜性肾病８８％、ＩｇＭ肾病７６％、膜增生性肾小球肾炎５８％、局灶节段性肾小球硬化症５６％、毛细血管内增生性肾小球肾炎２５％、肾小球微小病变２３％和新月体性肾小球肾炎０８％，四种最常见的继发性肾小球肾炎所占比例依次是狼疮性肾炎（ＬＮ）６３７％、紫癜性肾炎１１３％、糖尿病肾病６７％和系统性血管炎肾损害５８％。原发性肾小球肾炎和继发性肾小球肾炎的高发年龄段均为２５～３４岁。结论：原发性肾小球肾炎是我国最常见的肾小球疾病，男性多发，ＩｇＡＮ是最常见的原发性肾小球肾炎；ＬＮ是最常见的继发性肾小球肾炎，女性占绝对优势；青壮年为原发性肾小球肾炎和继发性肾小球肾炎的高发?

凝血酶上调人肾小球系膜细胞PAI-1表达的细胞内信号转导研究

为探讨转录因子活化子蛋白１（ＡＰ－１）和相关的信号转导分子在凝血酶诱导人肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物１（ＰＡＩ－１）表达中的作用，采用纤维蛋白平板法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、凝胶电泳阻滞实验（ＥＭＳＡ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法，分别检测凝血酶刺激培养的人肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１蛋白质活性和ｍＲＮＡ表达情况，以及ＡＰ－１ＤＮＡ连接活性和ＡＰ－１组成蛋白质ｃ－Ｊｕｎ、ｃ－Ｆｏｓ量的变化。结果发现：①凝血酶呈浓度依赖性的方式促进肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１蛋白质活性和ｍＲＮＡ表达，其效应能被凝血酶的特异性拮抗剂水蛭素阻断；②凝血酶能明显促进转录因子ＡＰ－１的ＤＮＡ连接活性；③ｃｕｒｃｕｍｉｎ、ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ和ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ均能在不同程度上抑制ＡＰ－１的ＤＮＡ连接活性，并进而部分逆转凝血酶上调系膜细胞ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达的效应。研究表明，转录因子ＡＰ－１在凝血酶上调人肾小球系膜细胞ＰＡＩ－１表达的信号转导过程中起着重要的作用，蛋白激酶Ｃ和蛋白酪氨酸激酶可能是凝血酶介导系膜细胞ＡＰ－１活化及ＰＡＩ－１表达的上游信号。

稳定表达饰胶蛋白聚糖基因的大鼠肾小球系膜细胞株的建立

目的 研究将饰胶蛋白聚糖 (decorin ,DCN)基因转染大鼠肾小球系膜细胞的可行性。方法 RT PCR法扩增大鼠DCN基因 ,构建重组真核表达质粒 pcDNA3.1A DCN ,采用脂质体将其转入大鼠MsC ,经G418筛选阳性克隆 ,Westernblot及RT PCR法鉴定。结果 成功构建重组真核表达质粒 pcDNA3 .1A DCN ,转染MsC并筛选出 2个阳性克隆株。结论 构建载有DCN基因的MsC载体 。

粘附分子选择素在IgA肾病中变化的临床意义

目的：为探讨ＩｇＡ肾病患者血和肾组织中Ｐ选择素改变与疾病的关系。方法：采用酶联免疫吸附法、免疫组化及原位杂交技术检测了４５例ＩｇＡ肾病患者血浆和肾组织中Ｐ选择素含量及表达水平。结果：ＩｇＡ肾病患者血浆Ｐ选择素含量明显高于正常人，其中肾病综合征组和肾功能减退组含量又较肉眼血尿组、尿检异常组和肾炎综合征组显著增高。Ｐ选择素在患者肾组织中广泛表达，其中在Ⅳ级和Ⅴ级ＩｇＡ肾病肾小球中表达水平明显高于Ⅱ级和Ⅲ级，而它们在肾小管、肾间质中的表达水平又与肾小管间质病变程度密切相关。结论：Ｐ选择素可能参与了ＩｇＡ肾病的发病机制，其血和肾组织中水平可成为判断ＩｇＡ肾病严重程度及预后的指标。

纤维蛋白对肾小球内皮细胞表达胞间粘附分子-1的影响及其机制探讨

观察体外培养的肾小球内皮细胞（ＧＥＣ）表面原位形成纤维蛋白凝胶对ＧＥＣ表达胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的影响。结果：８５％～９３％在无血清ＲＰＭＩ１６４０培养液中培养的ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１阳性。纤维蛋白显著促进ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１（Ｐ＜０．０１），呈现明显的剂量、时间依赖关系。放线菌酮和放线菌素Ｄ均可阻断纤维蛋白诱导的ＩＣＡＭ－１表达增强，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交显示，纤维蛋白刺激ＧＥＣ４ｈ可诱导ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达增强。立止血催化形成的ｄｅｓ－ＡＡ－纤维蛋白与凝血酶催化形成的ｄｅｓ－ＡＡＢＢ－纤维蛋白对ＧＥＣ表达ＩＣＡＭ－１的影响差异无显著性意义，而且肝素对纤维蛋白介导的ＩＣＡＭ－１表达增强没有阻抑作用。说明纤维蛋白促进ＧＥＣ表达Ｉ－ＣＡＭ－１呈时间－剂量依赖性，并与基因的转录和翻译有关。

低密度脂蛋白对肾小球系膜细胞、TGF-β和FNmRNA表达的影响

目的 :观察低密度脂蛋白 (L DL )对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞 (Ms C)生长及转化生长因子β(TGF-β)和纤维连接蛋白 (FN)基因表达的影响。 方法 :体外培养的 Ms C培养液中加入 L DL 共同孵育 ,采用 3H- Td R渗入法检测 Ms C增殖情况 ;应用 Northern blot检测 TGF- β m RNA和 FN m RNA的表达 ;应用斑点杂交法检测抗 TGF- β抗体对 FN m RNA表达的影响。结果 :(1) L DL 刺激 Ms C在小剂量以剂量依赖 (5 0～ 15 0 μg/ ml)和时间依赖 (2 4～ 72 h)促进增殖 (P<0 .0 5 ) ,大剂量 (2 0 0μg/ ml)抑制增殖 (P<0 .0 5 )。 (2 ) Northern blot显示 L DL 刺激 Ms C增殖 ,其 TGF- β和 FN m RNA表达以剂量和时间依赖方式增强。 TGF-β m RNA表达较 FN m RNA提前 2 4h。 (3) Dot blot显示 ,加入抗 TGF-β抗体后 ,FN m RNA的表达较未加前明显减弱。 结论 :L DL不仅可刺激肾小球 Ms C的增殖 ,并且增加 TGF-β和 FN m RNA的表达。

凝血酶调控肾小球系膜细胞产生明胶酶A、B的分子机制研究

在体外培养条件下观察了凝血酶对人肾小球系膜细胞表达细胞外基质降解酶——明胶酶Ａ（ＭＭＰ－２）及明胶酶Ｂ（ＭＭＰ－９）的调节作用。发现在无血清ＲＰＭＩ１６４０培养１２ｈ后，酶谱法显示系膜细胞培养上清液中ＭＭＰ－２活性极低，未检测出明显的ＭＭＰ－９酶解活性，但加入凝血酶后，可剂量依赖性地上调其ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９活性；ＲＴ－ＰＣＲ结果表明，在无血清ＲＰＭＩ１６４０培养１２ｈ后，系膜细胞仅表达低水平ＭＭＰ－９ｍＲＮＡ，加入凝血酶后，ＭＭＰ－９ｍＲＮＡ转录水平随刺激浓度的增加而明显上调，但凝血酶对ＭＭＰ－２ｍＲＮＡ的转录过程无明显影响；凝血酶的上述作用可被其特异性阻断剂——水蛭素部分性地拮抗。说明凝血酶分别在基因转录和（或）蛋白质修饰水平调节人肾小球系膜细胞表达ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９，从而参与肾小球组织重构及炎症性损伤。

肾小管上皮细胞损伤与成纤维细胞生长因子的关系

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在肾小管上皮细胞损伤和再生过程中的表达及其对肾小管上皮细胞的促增殖作用。方法：给大鼠腹腔注射庆大霉素４００ｍｇ（ｋｇ·ｄ），注射４天，造成肾小管损伤，分别于１、３、５、７、９、１２、１５天检查肌酐、尿素氮、乳酸脱氢酶及碱性磷酸酶含量，然后对肾损伤进行形态观察，用原位杂交和双重免疫组化染色观察ｂＦＧＦ表达与增殖的伴随情况，增殖细胞用增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）显示。体外培养的人肾小管上皮细胞加入不同浓度的ｂＦＧＦ，测定３ＨＴｄＲ掺入率，观察ｂＦＧＦ与肾小管上皮细胞增生的关系。结果：生化检测尿ＬＤＨ、ＡＬＰ及血Ｃｒ、ＢＵＮ比对照显著增高。原位杂交及双重免疫组化染色显示：正常情况下，ｂＦＧＦ只在单核细胞、肾间质纤维细胞表达。肾小管损伤再生过程中，肾近曲小管上皮细胞表达增加，再生肾小管上皮细胞成熟后，不再表达ｂＦＧＦ。体外给培养的人肾小管上皮细胞加入ｂＦＧＦ后，３ＨＴｄＲ掺入率较对照组明显增高。结论：正常肾小管上皮细胞无ｂＦＧＦ产生，损伤及再生的肾小管上皮细胞有ｂＦＧＦ的基因表达和蛋白合成。ｂＦＧＦ可促进肾小管上皮细胞增殖。

大鼠肾脏系膜细胞转染人TGF-β1基因可增强MMP-2表达

目的 研究转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）对培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）表达的影响。方法 采用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将人ＴＧＦβ１基因转染培养的大鼠ＭｓＣ，经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定其转染成功否；又分别应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．酶谱分析法检测阳性表达人ＴＧＦβ１的ＭｓＣＭＭＰ２ｍＲＮＡ、蛋白及酶活性变化。结果 成功获得稳定过表达人ＴＧＦβ１的大鼠ＭｓＣ克隆（ＭＴＧ１），该细胞克隆的ＭＭＰ２ｍＲＮＡ．蛋白表达及其酶活性均获增强。结论 ＴＧＦβ１可增强ＭｓＣＭＭＰ２ｍＲＮＡ、蛋白表达，并提高其酶活性，这为进一步阐明ＴＧＦβ１在肾小球硬化发生机制中的作用提供了重要的实验手段和依据。

肾小管间质纤维化中成纤维细胞的转化生长因子β1及其Ⅰ型受体蛋白及基因表达检测

目的 :研究腺嘌呤致大鼠肾小管间质纤维化模型的肾组织成纤维细胞中转化生长因子 β1(TGF β1)及其Ⅰ型受体的表达。方法 :腺嘌呤灌胃法建立大鼠肾小管间质纤维化模型 ,由模型肾组织培养肾间质成纤维细胞 ,应用免疫组化、逆转录PCR分别检测TGF β1及其Ⅰ型受体蛋白及mRNA的表达。结果 :成纤维细胞TGF β1、TGF β1I型受体免疫组化阳性 ;逆转录PCR可见 2 94bp的TGF β1及 34 5bp的TGF β1的Ⅰ型受体mRNA特异扩增带。结论 :在肾小管间质纤维化进程中 ,肾间质成纤维细胞是TGF β1的一个来源 ,而且也是其效应细胞 ,从而在TGF β1的作用下出现增生和合成细胞外基质的效应。

细胞间粘附分子-1在肾小球炎症过程中的作用及氯沙坦对其影响

目的：探讨细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在肾小球炎症过程中的作用及氯沙坦对其影响。方法：采用体外肾小球系膜细胞与巨噬细胞共同培养的方法，观察抗ＩＣＡＭ－１ ＭｃＡｂ 对巨噬细胞促进系膜细胞增殖的影响及氯沙坦对其保护作用。结果：抗ＩＣＡＭ－１ ＭｃＡｂ 对巨噬细胞促进系膜细胞的增殖具有抑制作用，呈现剂量依赖趋势；氯沙坦（０．１，１．０，１０．０ μｍ ｏｌ／Ｌ）可明显抑制经血管紧张素Ⅱ（Ａｎｇ Ⅱ）诱导后系膜细胞与巨噬细胞的粘附。结论： ＩＣＡＭ－１ 参与、影响肾小球炎症过程，氯沙坦在肾脏疾病的防治中可能有一定的意义。

活性维生素D_3对系膜细胞增殖的影响

目的探讨活性维生素D3[1,25(OH)2D3]干预对大鼠系膜细胞增殖及细胞周期的影响。方法体外培养大鼠系膜细胞,分别用不同浓度(0、10-10、10-8、10-6mol/L)1,25(OH)2D3进行干预,倒置显微镜下观察细胞形态及细胞划痕迁移,MTT法检测系膜细胞增殖,流式细胞仪检测系膜细胞周期,免疫荧光法及RT-PCR法检测细胞周期调控蛋白P21的表达水平。结果 1,25(OH)2D3干预均可抑制系膜细胞增殖,并随干预浓度增大,干预时间延长,抑制作用增强。48 h后流式细胞仪检测细胞周期证实,1,25(OH)2D3干预可令系膜细胞增殖阻滞于G0/G1期,可见亚G1峰,G0/G1期细胞比例明显增多(P<0.01)。免疫荧光染色法及RT-PCR法显示,在无1,25(OH)2D3干预下,系膜细胞中P21有少量表达,随着1,25(OH)2D3干预浓度越大,系膜细胞内P21的表达增多(P<0.01)。结论 1,25(OH)2D3使系膜细胞周期阻滞于G0/G1期,并上调细胞周期调控蛋白P21的表达,抑制系膜细胞增殖及迁移。

IL-1对肾小球系膜细胞增殖和周期素依赖激酶2表达的影响

目的 探讨白细胞介素 1(IL 1)对肾小球系膜细胞增殖及周期素依赖激酶 2 (CDK2 )表达的影响。方法 利用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞 ,分别采用噻唑蓝掺入法、流式细胞仪检测、免疫细胞化学等方法观察IL 1作用前后系膜细胞增殖情况以及CDK2 的表达变化。结果 IL 1可以明显促进系膜细胞增殖 ,同时伴有CDK2 的表达增高。结论 IL 1对系膜细胞有明显的促增殖作用 ,其机制可能与影响CDK2 的表达有关。

低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞产生炎性介质的影响

目的：探讨脂蛋白在肾小球损伤中的作用，观察人低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）产生活性氧（ＲＯＳ）、血小板活化因子（ＰＡＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的影响，并与经ＬＤＬ刺激后ＧＭＣ的增殖水平相比较。方法：将ＧＭＣ加或不加ＬＤＬ刺激，分别收集３０ｍｉｎ、１８ｈ或４８ｈ后的上清，测定其Ｈ２Ｏ２、Ｏ－２、ＴＮＦ、ＰＡＦ和ＬＤＨ的水平，以四唑蓝（ＭＴＴ）摄入试验，测定刺激４８ｈ后细胞于波长５７０ｎｍ的吸光度。结果：经ＬＤＬ刺激３０ｍｉｎ，细胞上清中Ｈ２Ｏ２和Ｏ－２的含量均高于对照，在浓度＜１００ｍｇ／Ｌ时，增高更为明显。刺激１８ｈ，上清中ＰＡＦ的水平亦有类似变化。刺激４８ｈ时，上清中ＬＤＨ的水平较１８ｈ时有所增加，且在ＬＤＬ１００ｍｇ／Ｌ时高达对照的３倍以上；细胞的吸光度亦增加，大于２００ｍｇ／Ｌ时则低于对照。ＬＤＬ刺激１８和４８ｈ的细胞上清对ＴＮＦ敏感株的杀伤率虽有增加，但均未达５０％。结论：ＬＤＬ可增加体外培养的人ＧＭＣ上清中活性氧、ＰＡＦ和ＬＤＨ，或ＴＮＦ等水平，因而可通过多种途径介导肾小球损伤，包括刺激ＧＭＣ产生或释放炎性介质和影响系膜细胞增殖。

肾康灵调控系膜细胞炎性反应因子的机制研究

目的:观察氧化低密度脂蛋白(Oxidized Low-Density Lipoprotein,ox-LDL)对系膜细胞(Mesangial Cells,MCs)分泌炎性反应递质功能的影响,并从细胞分子生物学水平阐明肾康灵的作用机制。方法:采用肾康灵干预增殖的系膜细胞,并利用分子生物学技术检测CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α含量或基因水平。结果:利用ox-LDL诱导大鼠系膜细胞增殖并加入CXCR6受体后,CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α的含量或基因水平显著升高,肾康灵呈浓度依赖性降低其表达水平。结论:ox-LDL诱导系膜细胞增殖时通过CXCR6介导,可促进CXCL16、CD36、IFN-γ、IL6、TNF-α等炎性反应递质的释放,中药肾康灵可通过抑制炎性反应递质的释放,保护系膜细胞的功能。

反义RNA对培养的肾小管上皮细胞骨调素表达的调节

目的 :探讨骨调素 (OPN)反义RNA对培养的肾小管上皮细胞骨调素表达的影响。方法 :脂质体介导将表达OPN反义RNA的逆转录病毒重组载体转染大鼠肾小管上皮细胞系NRK5 2E细胞 ,建立稳定表达OPN反义RNA的肾小管上皮细胞克隆 ,以转染了表达OPN顺义RNA和空白逆转录病毒载体的肾小管上皮细胞克隆为对照 ,以表皮生长因子 (EGF)为刺激剂 ,通过核酸酶保护分析 (RPA) ,WesternBlot,ELISA和OPN生物活性分析检测上述克隆细胞的OPN表达。结果 :OPN反义RNA仅被反义克隆细胞表达 ,反义克隆、顺义克隆和空白克隆细胞均有OPNmRNA的表达 ,EGF能增加它们OPNmRNA的表达水平 ,但不增加反义RNA或顺义RNA的表达水平 ;加或不加EGF的反义克隆细胞和不加EGF的空白克隆细胞无OPN蛋白的表达 ,加或不加EGF的顺义克隆细胞和加EGF的空白克隆细胞有OPN蛋白的表达。结论 :OPN反义RNA能抑制肾小管上皮细胞OPNmRNA的翻译而抑制OPN蛋白的表达 。

低密度脂蛋白对培养的人肾小球系膜细胞的增殖作用及冬虫夏草对其的影响

目的：探讨肾小球硬化的发病机理；并发现治疗肾小球硬化的治疗方法。方法：（１）通过测定［３Ｈ］胸腺嘧啶的掺入率，检测体外培养的人肾小球系膜细胞的增殖；（２）对人肾小球系膜细胞进行纯化和培养并对低密度、高密度脂蛋白进行［１２５Ｉ］标记。结果：（１）肾小球系膜细胞选择性结合和摄取［１２５Ｉ］ＬＤＬ，（２）ＬＤＬ刺激系膜细胞增殖且增殖作用具有双向性，（３）冬虫夏草对ＬＤＬ引起的细胞增殖具有抑制作用。结论：ＬＤＬ刺激系膜细胞增殖可能直接参与肾小球硬化的发病，高脂血症对肾脏的损害可能由肾小球系膜细胞介导；抑制系膜细胞增殖可能对肾小球硬化的防治具有一定的可行性。

大鼠肾小球系膜细胞产生的生长抑制性因子－转化生长因子β

本文观察了肾小球系膜细胞产生的自分泌生长抑制因子的情况。结果显示，肾系膜细胞培养上清中含有抑制自身生长的活性物质，后者有耐酸性；ＨＰＬＣ分析洗脱液中最主要的抑制性活性物质的分子量为１６～３０ｋｄ；抗－转化生长因子β（ＴＧＦβ）抗体能中和其大部分抑制活性；生物学方法检测表明上清中含有活性ＴＧＦβ；此外，培养液中加入抗ＴＧＦβ抗体能明显增强细胞的增殖。结果表明：大鼠肾系膜细胞能产生活性ＴＧＦβ，后者是一种自分泌的生长抑制性因子。

肝素和PDGF对人肾小球系膜细胞基质合成和分泌的影响

目的：探讨肝素和血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）胶原合成和分泌以及纤连蛋白（ＦＮ）、α１（ＩＶ）型胶原ｍＲＮＡ表达的影响。方法：应用３Ｈ－脯氨酸掺入、胶原酶消化法测定胶原含量；采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测ＦＮ、α１（ＩＶ）型胶原ｍＲＮＡ。结果：对照组、肝素组及ＰＤＧＦ组细胞内胶原含量分别为（１．２５０±０．５０１）％，（０．８０９±０．１６１）％和（２．６９０±０．５９７）％，而其培养液中的含量分别为（１．６０８±０．５１２）％，（０．１２２±０．０８９）％和（３．８７０±０．６４７）％。上述结果显示肝素对该细胞合成和分泌胶原有抑制作用（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），而ＰＤＧＦ则具有明显促进作用（Ｐ均＜０．０１）。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析结果显示肝素可抑制ＭｓＣＦＮ、α１（ＩＶ）型胶原ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ则可明显增强其表达。结论：肝素对人肾小球ＭｓＣ基质的合成和分泌有抑制作用，而ＰＤＧＦ则具有促进作用，其作用机制均发生在基因转录水平上。

原发性肾小球病中的高粘血症与高凝状态

本文通过血液流变学检测118例原发性肾小球疾病(PGD)的血粘度及有关指标,并同时对其中72例检测其高凝的实验指标,结果表明本病并存血液高粘与高凝状态,且互为影响。