体外热处理精子对精子关键基因表达的影响

目的体外热处理阻断精子垂直传播HIV方法研究初步探索,对热处理后精子关键基因表达的影响的研究。方法对精子进行受热处理,实验分为:⑴37℃30min(阴性对照);⑵42℃30min(一般细胞热处理);⑶56℃30min(病毒灭活条件);64℃30min(精子高温处理);然后以上4个大组又分为以下3个小组:受热后恢复0min、受热后恢复1h、受热后恢复4h。利用QRT-PCR和Western blot检测热应激蛋白质HSP70和HSP90,基因修复功能基因DDB1的表达。ROS(活性氧自由基)检测精子细胞受热后ROS产生和积累情况。结果热应激蛋白质HSP70和HSP90在64℃处理后再恢复4h表达最高,热应激蛋白质HSP70和HSP90随着受热的温度升高和恢复时间的延长而表达升高;并且与阴性对照组相比,64℃处理后再恢复4h组差异具有统计学意义(P<0.05)。基因修复功能基因DDB1在42℃受热后恢复4h表达最高,与阴性对照组相比,42℃在恢复1h和4h、56℃和64℃在4h的基因修复功能基因DDB1的表达明显升高,差异具有统计学意(P<0.05)。在64℃受热后恢复0h时,细胞受热后ROS产生和积累最高,并且随着时间的恢复ROS会下降。结论受热后精子热应激蛋白质会表达升高,而此时修复蛋白DDB1会对受热激的精子会产生修复作用,从而说明精子具有安全性。

高频彩超在阴囊疾病中的诊断价值

目的:探讨高频彩超在阴囊疾病中的诊断价值,以进一步为临床提供诊断信息。方法:应用高频彩超对我院51例阴囊病变患者的阴囊进行全方位探查,做出超声诊断或提示,与手术和临床进行对照。结果:51例阴囊病变中,睾丸肿瘤4例,其中最小的一例年龄5个月;睾丸炎症5例,其中继发于儿童病毒性腮腺炎1例;睾丸挫伤4例;睾丸囊肿2例;附睾炎症2例;精索静脉曲张8例;睾丸鞘膜积液16例;隐睾10例;与手术和临床对照,诊断阳性符合率为100%。结论:高频彩超对阴囊病变能进行全面的检查,做出明确的诊断。超声检查方法简便迅速、无痛苦、无创伤、无辐射、可重复性好,对病变的诊断和随访具有重要的临床应用价值。

双酚A干扰大鼠生精过程时TJ渗透性屏障的体外研究(英文)

目的:研究体外大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白(SCJP)在类雌激素-双酚A(BPA)干扰下的损伤机制。方法:对Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)离体原代培养4-5d,通过双室培养模型建立体外紧密连接(TJ)渗透性屏障,并测量其跨上皮电阻值(TER)反应紧密连接结构的形成及BPA对紧密连接的损害程度。设溶剂(DMSO)做阴性对照,以终浓度为25μM、100μM的BPA作用于支持细胞24h,MTT法测不同浓度BPA作用的Sertoli细胞增殖活性。Western bloting观察occludin、ZO-1、Cx43表达的变化。结果:成功分离并培养Wistar大鼠睾丸支持细胞,并建立良好的体外TJ屏障模型。双室培养支持细胞上皮TER值在培养的d4达到顶峰,然后在d4-9维持相对较稳定的状态,d4以200μM,100μM,25μM BPA染毒,分别于染毒后24,48,72,96和120h测TER:与DMSO溶剂对照组相比,200μM,100μM的BPA组TER值明显下降(P<0.05),而25μM的BPA组在染毒后TER值无明显变化(P>0.05)。MTT结果显示:经不同浓度BPA作用24h后,Sertoli细胞的吸光度(OD值)随着染毒剂量的增加而逐渐降低。102、103μM浓度组与溶剂对照组有显著性差异(P<0.05),而10-2、10-1、100、101μM组和溶剂对照组无显著性差异(P>0.05)。Western blot结果显示:occludin、ZO-1、Cx43在各剂量组均有表达,与溶剂对照组相比,occludin、ZO-1表达均分别随作用剂量的增加而降低:25μM组、100μM组与溶剂对照组相比,差异均存在显著性(P<0.05);100μM组与25μM组相比,差异亦存在显著性(P<0.05)。Cx43的表达却随染毒剂量的增加而增加,与溶剂对照组相比,25μM组表达无明显增加(P>0.05),而100μM组则明显增加(P<0.05);与25μM组相比,100μM组表达明显增加(P<0.05)。结论:双酚A可通过损伤支持细胞连接蛋白正常表达,破坏了TJ屏障渗透性,从而影响正常的精子形成过程。

高温对原代支持细胞增殖能力和occludin紧密连接蛋白的影响(英文)

目的:研究高温对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用和对紧密连接蛋白的损伤机制。方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),免疫组化FasL鉴定。实验分为对照组(36℃)和实验组(37℃、38℃、39℃)。在相应的温度下培养5d后,CCK-8法检测SC增殖作用,Western印迹法检测OCLN表达水平。结果:体外培养SC的纯度>90%,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在36℃时最强,37～39℃时逐渐降低;Western印迹显示,36℃时OCLN表达量最高;高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P<0.05)。结论:高温影响SC增殖活性,破坏了支持细胞紧密连接蛋白的正常表达和血睾屏障的完整性,从而影响正常精子的形成。