SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响

目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞株,获得SHIP1稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting和q RT-PCR分别从蛋白水平和m RNA水平检测SHIP1的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1的PC-9细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1蛋白复合体各组分的表达。结果:SHIP1真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较,细胞中SHIP1在m RNA(P<0.01)及蛋白水平均明显升高。在PC-9细胞中,过表达SHIP1使细胞增殖、克隆形成能力降低(均P<0.01),p-c-Jun、Fos B等表达降低。结论:成功构建了稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞模型;过表达SHIP1可通过抑制AP-1家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。