淫羊藿苷(ICA)对化疗后免疫抑制小鼠的免疫促进作用

目的:通过观察淫羊藿苷(ICA)对化疗药环磷酰胺(Cy)所致免疫抑制小鼠免疫功能的影响,探讨ICA促进免疫功能的作用及机理。方法:除正常组小鼠外,所有小鼠经腹腔注射Cy(300 mg/kg);第二天开始给予实验组小鼠灌胃不同剂量的ICA[150、804、0 mg/(kg.d)],阳性对照组小鼠尾静脉注射参芪扶正注射液(1 ml/d),模型组给予等量生理盐水,连续干预10天。所有小鼠均于末次给药12小时后处死,计算胸腺指数(TI)和脾指数(SI),光镜下计数外周血和脾淋巴细胞数量。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。ELISA法检测TNF-α的含量。乳酸脱氢酶实验(LDH)检测小鼠脾脏NK和CTL细胞的活性。流式细胞术(FACS)检测脾淋巴细胞中NKT和CD3+T细胞的比例。结果:模型组小鼠以上各项免疫指标均有所下降。ICA处理组小鼠脾脏指数和胸腺指数均升高(P<0.01),脾淋巴细胞数量显著增加(P<0.01),但未达到正常对照组水平;ICA明显提高小鼠脾淋巴细胞的增殖反应,促进了小鼠脾NK和CTL细胞对肿瘤细胞的杀伤活性(P<0.01),提高了小鼠脾细胞TNF-α的产生(P<0.01)。ICA处理组小鼠脾细胞中CD3+T、NKT细胞比例明显增加(P<0.01)。结论:ICA能促进小鼠免疫功能,具有逆转化疗后小鼠免疫抑制状态的作用。

北豆根提取物对小鼠和人淋巴细胞及巨噬细胞作用的体外实验研究

目的 :探讨中药北豆根提取物的免疫学调节作用及其作用机制 ;比较北豆根水提物、醇提物和多糖成分的生物学活性。方法 :采用水提取、醇提取及水回流等方法对北豆根进行成分分离。采用MTT法、中性红法检测了北豆根提取物对淋巴细胞增殖的作用以及对小鼠巨噬细胞代谢和吞噬功能的影响。结果 :北豆根多糖成分 (RMP)具有丝裂原样作用 ,可刺激小鼠脾细胞及人淋巴细胞增殖 ,对小鼠巨噬细胞的吞噬功能有一定的促进作用。而北豆根水提物 (RMW)和醇提物 (RME)对小鼠脾细胞、人淋巴细胞的增殖具有抑制作用 ,对小鼠巨噬细胞的代谢及吞噬功能也有抑制作用。结论 :不同的北豆根成分对免疫细胞有不同的作用 ,水提物和醇提物对免疫细胞的增殖、代谢和功能具有一定的抑制作用 ;北豆根多糖成分对淋巴细胞具有丝裂原样作用 ,能增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能 ,该活性可用于临床辅助治疗肿瘤。

小鼠Lewis肺癌细胞Foxp3的表达对T淋巴细胞增殖的影响及机制

目的:检测小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞中Foxp3基因的表达,研究小鼠LLC细胞中Foxp3过表达对T淋巴细胞的增殖和TGF-β1和IL-10表达的影响,探讨LLC细胞中Foxp3的表达在肿瘤免疫逃逸中的作用及可能机制。方法:分别采用RT-PCR和免疫组化染色法检测LLC细胞中Foxp3的mRNA和蛋白表达。构建pcDNA3.1-Foxp3重组质粒,采用FuGENEHD瞬时转染LLC细胞,实验分3组:LLC组,pcDNA3.1-LLC组及pcDNA3.1-Foxp3-LLC组。RT-PCR和免疫组化方法分别检测转染48小时后Foxp3基因的表达,通过淋巴细胞转化试验检测Foxp3过表达对T淋巴细胞增殖的影响,RT-PCR和ELISA方法分别检测Foxp3过表达对TGF-β1和IL-10的mRNA表达及蛋白分泌的影响。结果:在LLC细胞中检测到Foxp3mRNA及蛋白的表达;瞬时转染48小时后pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞中Foxp3表达增高,与LLC组和pcDNA3.1-LLC组相比差异显著(P<0.01);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组LLC细胞及培养上清对T淋巴细胞增殖的抑制率均明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P<0.05);pcDNA3.1-Foxp3-LLC组TGF-β1、IL-10mRNA和蛋白的表达水平明显高于LLC组和pcDNA3.1-LLC组(P<0.05)。结论:LLC细胞表达Foxp3,Foxp3可能通过上调TGF-β1和IL-10的表达来抑制T淋巴细胞的增殖,进而参与肿瘤的免疫逃逸。

北豆根抗肿瘤有效成分的分离、纯化和活性分析

背景与目的:提取、纯化和鉴定北豆根抗肿瘤有效成分,并对纯化的成分作进一步的活性研究。材料与方法:常规方法制备北豆根水提液(RMW)和醇提液(RME),对RME以3%HCl溶解、有机溶剂萃取和水相浓缩得到纯化提取物1、2、3(PE1、PE2、PE3)。用MTT法测定各提取物的抑瘤活性。根据抑瘤实验结果,通过凝胶和硅胶柱层析将PE2进一步分离得到两个单体化合物PF1和PF2。提取RME后的北豆根药渣用水回流提取,去除蛋白和鞣酸,再经乙醇沉淀和冷冻干燥得到多糖成分(RMP)。有效成分采用薄层层析和改良碘化铋钾显色对其进行鉴定分析。用电喷雾质谱ESI-MS检测单体化合物PF1和PF2的分子量。用紫外分光光度计检测RMP的纯度。结果:RMW和RME对K562、BGC823及TE13三种肿瘤细胞的增殖反应均有明显的抑制作用(P<0.01),并有良好的量效及时效关系,RMP无此作用。进一步将RME应用3步法纯化得到PE1、PE2、PE3。PE1和PE2对上述3种细胞的增殖反应均有明显的抑制作用(提高了近10倍)(P<0.01),PE3无此抑制作用。有效成分分析结果显示,PE2主要含一系列生物碱成分。对PE2进一步分离得到两个化合物PF1和PF2,分子量分别为624和610。PF1和PF2对K562、BGC823及TE13细胞均有显著抑制作用(P<0.01),PF2的抑制作用更强,PF2可导致上述细胞的形态学改变,表现为细胞体积变小,形态不规则等。PF2对肿瘤组织原代培养细胞增殖反应有较强抑制作用(P<0.01)。结论:北豆根水提物和醇提物在体外均有很强的抗肿瘤作用,醇提物的作用高于水提物。PE2是醇提物抗肿瘤的有效部位,其化学成分为生物碱;PF1和PF2均是醇提物抗肿瘤的有效成分,可能为蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱,PF2对肿瘤组织原代培养细胞也有较强的杀伤作用。北豆根多糖成分对K562等3种肿瘤细胞均无抑制作用。

北豆根提取物PE2成分的体内抗肿瘤作用及其免疫学调节机制研究

背景与目的探讨中药北豆根提取物的体内抗肿瘤作用和免疫学调节作用机制。材料与方法采用水提取、醇提取及水回流等方法对北豆根进行成分分离。采用四甲基偶氮唑蓝[3-(4,5-dimethy-2-thiazoly)-2,5-diphenyl-2-tetrazoliumbromide,MTT]显色法分析北豆根提取物对肿瘤细胞和淋巴细胞增殖反应的作用。采用中性红法检测了北豆根提取物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。采用皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型,采用北豆根提取物灌胃,观察北豆根提取物对小鼠的体内抗肿瘤作用和免疫调节作用。结果北豆根乙醇提取物(RME)比水提取物(RMW)具有更强的抑瘤活性,醇提取物中的PE2成分可能是北豆根的主要抗肿瘤活性部分。经北豆根提取物PE2灌胃后的荷瘤小鼠,与对照组荷瘤小鼠相比其胸腺指数、脾指数明显增加;腹腔巨噬细胞吞噬功能和细胞因子分泌功能增强;NK细胞活性增加;一般情况较对照组小鼠好;肿瘤生长缓慢而局限;生存期明显延长。结论PE2是北豆根抗肿瘤作用的主要有效部分,PE2体内也具有抗肿瘤作用,能通过增强荷瘤小鼠巨噬细胞的吞噬功能,增强NK细胞和小鼠脾细胞的活性,而发挥抗肿瘤作用。

北豆根提取成分PE2诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

背景与目的:探讨北豆根有效成分诱导肿瘤细胞凋亡的作用及其作用机制。材料与方法:北豆根干品醇提液,经三步法将醇提液纯化,得到三种纯化提取物(Purifiedextract,PE)PE1、2、3。应用流式细胞技术分析细胞周期DNA变化,并经荧光染色和荧光显微镜观察凋亡细胞形态学变化。并用电子显微镜观察了凋亡细胞的超微结构变化。用凝胶电泳实验检测了凋亡细胞DNA变化。结果:PE2可诱导BGC823细胞凋亡,呈明显的时效和量效关系;在低浓度PE2作用下,多数细胞被阻滞在G0/G1期,高浓度PE2作用后,多数细胞被阻滞在S期。肿瘤细胞经PE2作用后发生细胞凋亡的形态学变化:体积缩小,胞质浓缩,出现核固缩、核碎裂等;在电子显微镜下可见细胞胞体缩小,核染色质高度浓缩,边集于核膜,有的呈半月形,有的出现核碎裂,偶见凋亡小体。细胞DNA经凝胶电泳后,出现典型的梯状电泳模式。PE2处理的癌细胞,bcl-2基因表达降低,而bax基因表达升高。结论:PE2诱导肿瘤细胞凋亡,通过调节bcl-2及bax基因的表达发挥作用是PE2抗肿瘤作用的机制之一。该结果可促进北豆根的二次开发和临床应用。

双标记碱性洗脱法研究电离辐射引起的细胞DNA单链断裂与修复

本文应用双标记碱性洗脱法对X射线照射引起的正常人纤母细胞、毛细血管扩张性共济失调症(AT)纤母细胞、AT肿瘤突变细胞DNA单链断裂及重接修复进行了研究。结果提示10GyX射线照射对三种不同类型纤母细胞DNA的单链断裂与各自的不照射对照组比较有显著差别。而三种不同细胞株之间比较则无明显差别。细胞接受10GyX射线照射后在37℃孵箱中孵育15、30和60min可见三种细胞株DNA单链断裂都能立即进行重接修复,60min内大部分已重接,细胞在10Gy照射后加5×10^(-4)mol/L aphidicolin/皿抑制聚合酶α,经37℃孵育60min也有一定程度的修复。

甲基丙烯酸环氧丙酯对金仓鼠胚胎细胞的转化作用

应用金仓鼠胚胎（ＳＨＥ）细胞的转化试验的结果表明：当甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）浓度在０．９～１４．２ｍｇ／Ｌ时，可诱发细胞的形态学转化，转化率范围是（０．８４～２．１８）×１０－５，最高的转化率与阳性对照３－甲基胆蒽（ＭＣＡ）转化率相近并呈剂量－效应关系；转化细胞对刀豆素凝集反应的能力增强；有在软琼脂中形成集落的能力。形态学转化的细胞已获得恶性转化的特征。

mRNA差异展示技术在肿瘤研究中的应用和策略

真核细胞的整个生命过程及其代谢变化，究其本质都是基因表达变化所致。而这些基因的结构、功能及其筛选等的研究是生命科学的重要内容，为此发展起来许多与之相应的研究方法，而近年来ＲＮＡ指纹分析和差异展示技术的应用使基因的功能．新基因筛选和克隆转录等研究得到迅速的发展，并因此促进了肿瘤分子生物学研究的发展，已成为研究肿瘤发生、发展和转移的重要研究手段。

二甲基苯蒽诱发大鼠乳腺癌的组织形态学和微血管密度观察

目的:研究诱发性大鼠乳腺癌发生过程中组织形态学变化和肿瘤微血管密度(MVD)。方法:Wistar雌性大鼠85只,SD雌性大鼠22只,配制浓度为10 mg/ml的二甲基苯蒽(DMBA)麻油溶液灌胃大鼠。17只大鼠8周前死亡,剩余90只大鼠从第8周开始至24周,每2周取大鼠10只活杀,观察乳腺外形,取乳腺肿块HE染色和Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色。结果:存活8周以上的90只大鼠中,73只成功诱发乳腺肿瘤,其中乳腺良性增生11只,乳腺癌62只。乳腺癌62只大鼠中,浸润性导管癌35只,浸润性小叶癌15只,乳头状腺癌5只,其他类型肿瘤7只。乳腺癌分化程度分级为:高分化5只,中分化36只,低分化21只。乳腺癌MVD平均值为(6.53±2.71)个/高倍视野,乳腺良性增生MVD为(1.67±0.95)个/高倍视野,乳腺癌MVD显著高于乳腺增生性疾病(P<0.01)。低分化乳腺癌MVD显著高于中、高分化乳腺癌(P<0.001)。结论:DMBA灌胃Wistar雌性大鼠乳腺癌诱发成功率高,肿瘤分化程度与微血管密度密切相关。

中药扶正为主在肿瘤治疗中的体会

针对肿瘤对生命体的耗竭 ,手术、放疗、化疗对肌体的损伤 ,以及中医临床中普遍存在侧重单位抗肿瘤中药表现的损伤正气 ,从临床经验总结出以扶正为主的治疗方法 ,偏重于补益脾、肾 ,使临床疗效显著提高 ,并以此揭示中医药治疗肿瘤的正确方法。

解偶联蛋白2和缺氧诱导因子1α在肺癌组织中的表达

目的检测临床肺癌组织中解偶联蛋白2的表达与分布,并分析其与缺氧诱导因子1α在肺癌发生的关系。方法通过荧光定量PCR方法检测肺癌和癌旁正常组织中解偶联蛋白2与缺氧诱导因子1α的表达,同时应用免疫组织化学、Western blot方法检测解偶联蛋白2在肺癌和癌旁正常组织中的表达。结果荧光定量PCR方法检测,肺癌组织中解偶联蛋白2与缺氧诱导因子1αmRNA的表达约是癌旁正常组织的3倍,Western blot方法检测,解偶联蛋白2在肺癌组织中的表达量约是癌旁正常组织的2倍;免疫组织化学方法检测,解偶联蛋白2主要在细胞质中表达,在肺癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,且癌细胞的恶化程度与解偶联蛋白2的含量呈正相关。结论解偶联蛋白2与缺氧诱导因子1α在人肺癌组织中均有高表达,但两者无明显相关性。

烹调油烟职业暴露人群外周血淋巴细胞姊妹染色单体交换频率分析

应用外周血淋巴细胞姊妹染色单体交换（ＳＣＥｓ）为标志物，对职业暴露烹调油烟的人群进行了生物学监测和分析。暴露组为４６名男性饭店厨师，对照组为２８名男性饭店管理人员。结果表明，暴露组的ＳＣＥｓ明显高于对照组，暴露组ＳＣＥｓ的平均值为７３７，对照组ＳＣＥｓ平均值为４１７，采用协方差分析方法，调整吸烟、饮酒等混杂因子后，两组ＳＣＥｓ仍然存在显著性差异（Ｐ＝００００１），多因素逐步回归分析表明，暴露组人群的ＳＣＥｓ水平随暴露年限的延长而升高。

一种用于癌基因表达研究的小鼠颅脑损伤模型

用标准牙科钻头,直接损伤小鼠顶叶皮层,造成局灶性脑损伤模型,用于C-fos癌基因表达研究。结果表明:此模型操作简单、迅速、规范、重复性好,是一种理想的用于研究脑损伤与基因表达关系问题的动物模型。

细胞凋亡与疾病

细胞凋亡与疾病湖南医科大学罗正曜细胞凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）又名细胞程序性死亡（ｐｒｏ－ｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｄｅａｔｈ），是一种主动的、由基因调控的、不同于坏死的细胞死亡形式。Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ一词来自希腊语，形容细胞死亡像秋天的枯叶从树上掉下。此...

差异展示PCR技术及其应用

差异展示ＰＣＲ（ＤＤ－ＲＣＲ）是一种简便而又快捷的筛选和克隆特异性表达基因的筛选方法，应用此方法已克隆到一些肿瘤和疾病相关基因．本文结合自己的工作对该技术的原理及应用作一综述。

89例良恶性肿瘤血清铁蛋白的测定及手术前后对比观察

１９９４年１月～１９９４年６月，从６２１名住院病人中用双盲法随机抽取２６例良性肿瘤和６３例恶性肿瘤，进行血清铁蛋白（ＳＦ）的测定，７３例健康献血员的ＳＦ作为对照组．结果显示，正常对照组、良性肿瘤、恶性肿瘤，ＳＦ均值分别为２９．５μｇ／Ｌ、１０３．２μｇ／Ｌ、１３５．５μｇ／Ｌ．良、恶性肿瘤相比较，Ｐ＞０．０５，两者与对照组相比较，Ｐ＜０．０１．进一步分析良、恶性肿瘤手术前后的ＳＦ，发现术后的ＳＦ值均高于术前．