抗体偶联药物维迪西妥单抗对HER-2不同表达水平胃癌细胞抑制效应的体外研究

目的 评估抗体偶联药物维迪西妥单抗(RC48)对不同HER-2蛋白表达水平胃癌细胞的体外抑制效应。方法 使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting技术结合细胞免疫荧光共聚焦显微镜,检测胃癌细胞系(NCI-N87、MKN45、MKN7、HGC27、MGC803)HER-2表达情况及细胞定位。随后对上述不同HER-2表达程度的细胞系分别经不同浓度RC48处理,CCK-8技术检测杀伤效应并计算半数抑制浓度(IC50),采用qRT-PCR和Western blotting技术检测胃癌细胞经RC48处理后,不同胃癌细胞株的HER-2 mRNA及蛋白质表达情况。结果 所检测的胃癌细胞系中,NCI-N87细胞的HER-2表达量最高,其余细胞系均呈HER-2低表达,荧光共聚焦显示HER-2蛋白主要为细胞膜定位。RC48在体外可明显抑制HER-2强阳性胃癌细胞(NCI-N87)增殖,48 h及72 h的IC50分别为0.32μg/ml及2.359e-010μg/ml,该效应呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性;而在HER-2低表达胃癌细胞(MKN45、MKN7、HGC27、MGC803)中,RC48同样显示了一定的体外抑制肿瘤细胞增殖的效应,48 h的IC50分别为331.90、24.20、35.32及9.449μg/ml。不论基线时的HER-2蛋白表达高低,经RC48处理后胃癌细胞的HER-2蛋白表达量均呈明显下降。结论 RC48对体外培养的HER-2不同表达胃癌细胞均显示了抑制增殖的效应,呈时间依赖性和剂量依赖性。RC48作用后可抑制胃癌细胞表面的HER-2蛋白表达,且该效应并不完全依赖于胃癌细胞基线HER-2蛋白表达量的高低。

整合铁死亡和免疫相关基因建立胃癌预后风险评估模型

目的 探讨铁死亡相关基因(FRGs)和免疫相关基因(IRGs)在胃癌中的预后价值并构建预后风险模型预测患者总生存期(OS)。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)和基因表达综合(GEO)数据库中下载胃癌转录组数据和临床数据,从FerrDb和Immport数据库中提取FRGs和IRGs。将TCGA表达谱基因与FRGs和IRGs取交集获得胃癌FRGs和IRGs,使用差异分析和预后相关性分析进行筛选并通过Venn图取交集获得具有预后价值的差异FRGs和IRGs,使用LASSO-Cox回归进一步筛选构建铁死亡相关基因风险评分(FRG risk-score)和免疫相关基因风险评分(IRG risk-score)模型,运用Kaplan-Meier生存分析、受试者工作特征曲线(ROC)、主成分分析(PCA)和t-分布领域嵌入算法(t-SNE)、单变量与多变量Cox回归分析评估FRG risk-score和IRG risk-score模型,并构建结合临床病理学特征和FRG risk-score、IRG risk-score的列线图和校准曲线。同时,GSE84437数据集用于验证模型。运用CIBERSORT算法估算TCGA队列所有样本中22种浸润免疫细胞的丰度并使用TIMER数据库分析FRGs和IRGs与免疫细胞浸润之间的相关性。采用TCIA和TIDE网站分析不同风险组间免疫药物敏感性与免疫逃逸评分的差异。结果 通过筛选共得到8个重叠候选FRGs和4个重叠候选IRGs。LASSO-Cox回归结果显示,5个FRGs(ZFP36、NOX4、SLC1A5、MYB、DUSP1)和4个IRGs(CGB5、GHR、GLP2R、NPR1)纳入预后模型。Kaplan-Meier生存分析、ROC曲线下面积(AUC)、PCA和t-SNE分析均验证了模型具有良好的预测能力。结合临床病理学特征和FRG risk-score、IRG risk-score的列线图及其校准曲线表明该模型对胃癌患者的1年和3年生存率具有较好的预测能力。免疫细胞浸润与模型基因相关性分析结果显示,FRGs和IRGs与免疫细胞浸润水平间存在显著相关性(P<0.05)。免疫药物治疗分析表明,FRGs预后特征低风险组患者对CTLA4阻滞剂具有更好的免疫治疗反应。免疫逃逸结果显示,FRGs和IRGs预后模型高风险组患者的TIDE评分较高。结论 整合FRGs和IRGs的预后模型更好地预测了胃癌患者的预后,可作为早期检测的生物标志物和抗肿瘤免疫治疗靶点,具有临床治疗指导意义。