槲皮素联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槲皮素单独及联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法选取对数生长期的卵巢癌SKOV-3细胞作为研究对象,实验分6组:阴性对照组(生理盐水),槲皮素低(25μmol/L)、中(50μmol/L)、高剂量组(100μmol/L),顺铂组(10μmol/L),联合组(槲皮素50μmol/L+顺铂10μmol/L)。采用MTT法检测不同浓度槲皮素单独及联合顺铂对SKOV-3细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测槲皮素作用于SKOV-3细胞Bcl-2及MtP53蛋白表达水平的变化。结果与阴性对照组相比,槲皮素可明显抑制SKOV-3细胞的增殖,并具有显著的时间和剂量依赖关系,槲皮素高剂量组在72 h的抑制率可达63.49%(P<0.05);流式细胞仪分析发现槲皮素可使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少(P<0.05),提示其将细胞周期阻滞于G1期;槲皮素还可明显诱导SKOV-3细胞凋亡,高剂量组的凋亡率可达29.51%;槲皮素作用后,Bcl-2及MtP53表达则明显降低(P<0.05)。结论槲皮素在体外可抑制SKOV-3细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,其机制可能与降低凋亡相关蛋白MtP53和Bcl-2的蛋白表达水平有关;槲皮素与顺铂联用有协同作用。

靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌CaSki细胞的抑制作用

以RNA干扰技术为手段,HPV编码的癌蛋白E6为靶标,探讨靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌细胞生物学行为的影响,并试图阐明该实验的临床意义.构建靶向HPV16-E6的siRNA表达载体,应用体外转染试剂转染HPV16-E6阳性的宫颈癌CaSki细胞.以RT-PCR检测CaSki细胞中E6蛋白的mRNA的表达,借助细胞色素c测定来分析细胞凋亡相关分子的表达和活性,从而研究靶向HPV16-E6的siRNA诱导细胞凋亡的分子机制.RT-PCR检测结果表明,将靶向HPV16-E6的siRNA的表达载体瞬时转染到HPV16-E6阳性的CaSki细胞后,其所含E6蛋白质和mRNA的表达下调;Western blotting检出抑凋亡蛋白Bcl-2的表达亦告下调;细胞色素c释放实验结果显示,HPV16-E6 siRNA能够诱导细胞色素c从线粒体释放到细胞浆中,从而诱导细胞凋亡.靶向HPV16-E6的siRNA能够有效抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡.靶向HPV16-E6的siRNA为研究重要致瘤蛋白HPV16-E的功能开辟了新途径,给HPV16-E6阳性肿瘤的靶向基因治疗提供新的实验依据,并探索了HPV感染及宫颈癌的新基因疗法.

Cyfra21-1在宫颈癌新辅助化疗疗效评价中的作用

目的探讨细胞角蛋白19片段抗原21-1(Cyfra21-1)检测在宫颈癌新辅助化疗疗效评价中的作用。方法应用电化学发光法检测53例健康人、60例CIN1-3级患者、56例宫颈癌患者血清Cyfra21-1和对需行新辅助化疗的44例宫颈癌患者化疗前后的血清Cyfra21-1进行比较。结果宫颈癌患者的血清Cyfra21-1与健康人、CIN1-3患者血清Cyfra21-1值的差异有统计学意义(P<0.05),但健康人与CIN1-3患者血清Cyfra21-1值的差异无统计学意义(P>0.05);化疗前后血清Cyfra21-1值有统计学意义(P<0.05);化疗后肿块缩小的程度与血清Cyfra21-1下降程度有统计学意义,血清Cyfra21-1下降50%,表明肿块缩小至少25%。结论血清Cyfra2-1的检测对评价宫颈癌患者新辅助化疗效果具有肯定的临床意义。

T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3在宫颈鳞癌中的表达及意义

目的：探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3（T cell immunoglobulin- and mucin-domain-containing molecule-3, Tim-3）在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法选取40例子宫颈鳞癌患者组织样本为研究对象，18例上皮瘤样病变患者组织样本为对照组。分别采用Western blot和RT-PCR检测Tim-3蛋白及mRNA表达。结果 Western blot和RT-PCR结果显示，子宫内膜癌组织Tim-3表达水平明显高于上皮瘤样病变组织（P＜0.05），且不同病理分级组织的Tim-3表达水平依次为高分化＞中分化＞低分化（P＜0.05）；不同临床分期组织的Tim-3表达水平依次为Ⅳ期＞Ⅲ期＞Ⅱ期＞Ⅰ期（P＜0.05）。结论 Tim-3表达与宫颈鳞癌病理分级和临床分期具有相关性，可作为宫颈鳞癌临床诊断及预后的可靠指标。

Embosphere微球治疗子宫肌瘤疗效分析

目的对30例症状性子宫肌瘤患者采用Embosphere微球行子宫动脉栓塞进行治疗,探讨Embosphere微球治疗子宫肌瘤的疗效。方法行双侧髂内动脉及子宫动脉造影,将导管超选至双侧子宫动脉,给予Embosphere微球进行栓塞,术后记录不良反应及并发症、血红蛋白变化情况。术后3个月、6个月、12个月分别行影像学检查,明确肌瘤大小的变化,综合判断疗效。结果 30例患者中24例出现不同程度栓塞后综合征;5例贫血患者术后月经量及月经周期恢复正常,血红蛋白恢复正常;8例表现为不同程度尿急、尿频、里急后重等压迫症状,患者于术后症状消失。11例患者术后1年肌瘤消失,肌瘤平均体积由8.4 cm缩小到2.1 cm,最大肌瘤由10.6 cm缩小到2.8 cm。结论 Embosphere微球治疗子宫肌瘤疗效肯定,可作为一种新型的栓塞剂应用于子宫肌瘤的治疗中。

辽宁地区12307例女性宫颈高危型人乳头瘤病毒感染筛查结果分析

目的分析辽宁地区12 307例女性宫颈高危型人乳头瘤病毒(HPV)的筛查结果,了解该地区不同年龄段女性高危型HPV的感染。方法对2013年1月-2013年10月在中国医科大学附属第一医院妇科门诊自愿行宫颈病变筛查的12 307例女性行HPV筛查,HPV测定采用AB I2Prism7000 PCR检测仪,由专业妇科医师采用专用HPV取样器按严格规范方法采集标本,并于1周内完成检测。对不同年龄段女性的HPV检出率及感染亚型进行统计学分析。结果 1辽宁地区女性HPV的感染高峰年龄为≤30岁;2辽宁地区女性高危型HPV感染常见亚型(感染率>1%)由高到低依次为16、52、58、53、33、18及31;3HPV18感染高发于≤30岁女性;4高危型HPV单一亚型感染率随年龄的增加呈下降趋势;多重混合高危亚型的HPV感染率在≥60岁的老年组有所升高。结论辽宁地区不同年龄段女性高危型HPV感染具有特征性分布规律,针对性的进行宫颈癌筛查十分必要。

初探扩散峰度成像多定量参数评估子宫内膜癌Ki-67表达的价值

目的:初探MR扩散峰度成像(DKI)多定量参数与子宫内膜癌(EC)增殖抗原Ki-67表达的相关性。方法:回顾性分析21例行1.5T MRI检查(含DKI序列),经手术病理(免疫组化分析指标含Ki-67)诊断为EC的影像资料,按照Ki-67表达指数(<50%为低表达,≥50%为高表达),分为Ki-67高表达组11例,Ki-67低表达组10例。由两位观察者分别测量两组病灶实质区DKI各参数值,包括平均弥散峰度值(MK)、平行弥散峰度值(Ka)、垂直弥散峰度值(Kr)、峰度各向异性分数(FAk)、平均弥散系数值(MD)、平行弥散系数值(Da)、垂直弥散系数值(Dr)及各向异性分数(FA)。采用组内相关系数(ICC)检验两位观察者各参数测量结果一致性;采用两独立样本t检验比较两组各参数值差异;采用ROC曲线评估有鉴别价值的参数对Ki-67高、低表达组鉴别诊断的效能;采用Pearson相关分析评价各参数值与Ki-67表达指数的相关性。结果:两位观察者测得两组病灶各参数值的一致性均良好(ICC>0.75)。Ki-67高表达组的MK、Ka、Kr、FAk、MD、Da、Dr、FA值分别为1.05±0.13、1.17±0.21、0.95±0.14、0.41±0.14、(0.93±0.18)μm^2/ms、(1.19±0.17)μm^2/ms、(0.80±0.21)μm^2/ms、0.27±0.11,Ki-67低表达组的各参数值分别为0.79±0.10、0.86±0.12、0.72±0.14、0.35±0.11、(1.33±0.28)μm^2/ms、(1.64±0.37)μm^2/ms、(1.17±0.25)μm^2/ms、0.23±0.08,Ki-67高表达组的MK、Ka、Kr值大于低表达组,MD、Da、Dr值小于低表达组(P均<0.05),两组间FAk、FA值差异无统计学意义(P>0.05)。MK、Ka、Kr、MD、Da、Dr值预估Ki-67高表达的曲线下面积(AUC)分别为0.982、0.900、0.900、0.900、0.973、0.882,截断值分别为0.92、1.09、0.85、1.08μm^2/ms、1.41μm^2/ms、0.96μm^2/ms,敏感度分别为90.9%、72.7%、81.8%、81.8%、100%、81.8%,特异度分别为100%、100%、90%、90%、90%、90%。MK、Ka、Kr与Ki-67表达指数正相关(P均<0.05),MD、Da、Dr与Ki-67表达指数负相关(P均<0.05),FAk、FA值与Ki-67表达指数无相关性(P>0.05)。结论:DKI序列的MK、Ka、Kr、MD、Da、Dr值与EC Ki-67表达具有相关性,有反映EC肿瘤细胞增殖程度的潜力,MK值为最佳参数。

艾迪注射液对SKOV_3人卵巢癌细胞作用的研究

目的探讨艾迪注射液对SKOV3人卵巢癌细胞的抗肿瘤作用。方法应用MTT法和RT-PCR法、ELISA方法分别检测艾迪注射液对SKOV3细胞增殖及SKOV3细胞中VEGF mRNA、VEGF蛋白含量的影响。结果艾迪组SKOV3人卵巢癌细胞增殖受到抑制,48h达高峰,抑制率59.51%;SKOV3细胞中VEGFmRNA含量艾迪组较对照组减少,差异有显著性(P<0.01)。结论艾迪能抑制SKOV3人卵巢癌细胞的增殖,在mRNA、蛋白水平抑制VEGF的表达,进而实现其抗肿瘤作用。

超声靶向微泡破裂法介导RNA干扰沉默survivin基因对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的:通过超声靶向微泡破裂(ultrasound targeted microbubble destruction,UTMD)法介导基因转染,观察RNA干扰对宫颈癌HeLa细胞survivin基因的沉默效应和诱导细胞凋亡的作用。方法:构建靶向survivin基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,将其和微泡共同处理后加入HeLa细胞并予以超声辐照,以空白细胞、单纯质粒、单纯超声辐照、质粒+超声辐照和质粒+Lipofectamine转染作为对照;采用荧光显微镜和FCM法评估基因转染效率,同时对超声辐照参数进行优化;应用FCM法和Hoechst染色及DNA ladder分析法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测survivin mRNA水平的变化。结果:经酶切鉴定及测序分析证实重组质粒构建成功。HeLa细胞采用UTMD处理后,基因转染率显著增加(P<0.01),并在超声强度为1.0W/cm2、辐照3min的条件下最为显著(P<0.01)。PT-PCR检测结果显示,质粒与微泡共同作用加超声辐照组的survivin mRNA抑制率为(83.33±2.73)%,均显著高于各对照组(P<0.01);FCM法检测结果显示,该组细胞的凋亡率同样显著高于各对照组(P<0.01);Hoechst染色及DNA ladder检测结果显示,只有经脂质体或UTMD转染处理后的细胞中可检测到明显的细胞凋亡形态及凋亡梯带,其余各组均未检测到明显凋亡。结论:UTMD可有效增强表达质粒的转染效率,是一种新的、有应用前景的非病毒基因转移体系。UTMD介导RNA干扰沉默survivin基因可诱导明显的细胞凋亡,为肿瘤基因治疗及研究提供了新的方法。

卵巢上皮性肿瘤中缺氧诱导因子-1α的表达及意义

目的探讨卵巢上皮性肿瘤中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其与肿瘤微血管密度(MVD)的相互关系及临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测87例卵巢上皮性肿瘤组织中HIF-1α表达,CD34抗体标记新生血管内皮细胞,计数肿瘤组织中MVD。结果卵巢上皮性癌、交界性肿瘤组织中的HIF-1α表达和MVD值均明显高于良性肿瘤。卵巢上皮性癌组织中,HIF-1α的表达与临床分期呈正相关,与组织类型、病理分级、年龄无相关性;而MVD与临床分期、病理分级均相关,与组织类型、年龄无相关性。HIF-1α表达水平与MVD之间存在显著相关性。结论HIF-1α在卵巢癌的发生、发展过程中可能起着重要作用,与卵巢癌血管生成密切相关。

LncRNA KCNQ1OT1在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1(Lnc RNA KCNQ1OT1)在卵巢癌组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法实时荧光定量PCR法检测卵巢癌组织、癌旁组织及细胞中Lnc RNA KCNQ1OT1表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后的关系。通过转染si RNA下调Lnc RNA KCNQ1OT1的表达,检测细胞增殖和侵袭能力的变化。结果卵巢癌组织及细胞株中Lnc RNA KCNQ1OT1的表达水平显著高于正常卵巢上皮细胞及正常卵巢组织。高表达Lnc RNA KCNQ1OT1的患者的总生存期(P<0.001)和无进展生存时间(P<0.001)较低表达者缩短。Lnc RNA KCNQ1OT1的表达与FIGO分期、肿瘤分级和远处转移相关。下调Lnc RNA KCNQ1OT1的表达能够明显抑制细胞的增殖和侵袭。结论 Lnc RNA KCNQ1OT1参与了调节卵巢癌的发生、发展,可能作为卵巢癌患者预后的一个潜在生物标志物和治疗靶点。

宫颈鳞癌间质内CD34表达的临床意义

目的探讨宫颈鳞癌间质内CD34的表达及其临床意义。方法采用免疫组化S-P法,检测15例正常宫颈组织和50例宫颈鳞癌的间质内微血管计数情况,并分析其在不同的临床分期、不同病理分级的表达。结果在子宫颈鳞癌I级和II级癌组织中,CD34的表达主要分布在癌巢周围间质内,而癌巢内较少;在子宫颈鳞癌III级的癌组织,CD34的表达则呈弥漫分布。临床分期比较:I期与II期比较、I期与III期比较,差异显著(P<0.01);组织学比较:I级与II级比较、I级与III级比较,差异显著(P<0.01)。结论 CD34的表达在临床分期、组织学分级差异显著,反映了微血管增生在子宫颈癌发展过程中起重要作用,是一个有价值的标记物。

子宫肌瘤剔除术3种术式疗效比较

目的通过对腹式、阴式及腹腔镜下途径子宫肌瘤剔除术的比较,探讨3种术式的优缺点及适应证。方法回顾性分析150例子宫肌瘤剔除术患者,其中阴式子宫肌瘤剔除术(阴式组)、腹腔镜下子宫肌瘤剔除术(腹腔镜组)、腹式子宫肌瘤剔除术(腹式组)各50例。比较3组手术时间、术中出血量、术后排气时间、术后住院时间和住院费用。结果各组手术均获成功,阴式组及腹式组手术时间较腹腔镜组明显缩短(<0.05);阴式组、腹式组、腹腔镜组术中出血量3组间比较差异有统计学意义(<0.05);术后排气时间阴式组及腹腔镜组较腹式组明显缩短(<0.05);术后住院时间以腹式组最长,与阴式组及腹腔镜组比较有统计学差异(<0.05);住院费用腹腔镜组明显高于阴式组及腹式组(<0.05)。结论 3种术式各有其特点,腹腔镜下子宫肌瘤剔除术与阴式子宫肌瘤剔除术都具有创伤小、恢复快等优点,而腹式子宫肌瘤剔除术手术适应证更为广泛,尚不能够完全被替代。

重组干扰素α-2b凝胶联合宫颈环形电切术治疗宫颈上皮内瘤变伴高危型人乳头瘤病毒感染的疗效

目的探究宫颈环形电切术(Leep)后应用重组干扰素α-2b凝胶治疗宫颈上皮内瘤变(CIN)伴高危型人乳头瘤病毒(hr-HPV)感染的疗效。方法将2014年6月至2016年6月96例CIN伴hr-HPV感染患者随机分成两组,观察组采用重组干扰素α-2b凝胶联合Leep术治疗,对照组采用单纯Leep术治疗,比较两组的CIN治愈率,1年后hr-HPV转阴率、CIN复发率等。结果观察组患者术后3、6个月的CIN治愈率明显高于对照组;术后1年观察组的病毒负载量明显少于对照组,HPV转阴率高于对照组,CIN复发率低于对照组;比较差异均具有显著性(P<0.05)。结论重组干扰素α-2b凝胶联合Leep术治疗CIN伴hr-HPV感染可改善CIN治愈率,提高hr-HPV的转阴率,降低CIN复发率。

Survivin和Cyclin E蛋白在宫颈癌中的表达及其意义

目的:研究生存素(Survivin)与细胞周期素E(Cyclin E)在宫颈癌组织中的表达及其表达的相关性。方法 :用免疫组织化学方法检测50例宫颈癌及20例正常宫颈组织中Survivin与Cyclin E的表达。结果:宫颈癌组织中Survivin和Cyclin E表达阳性率为分别为86.0%和76.0%,均明显高于正常对照组(P<0.01),Survivin阳性表达和Cyclin E阳性表达与肿瘤分期及组织学分级无关,而与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05)。宫颈癌组织中Survivin与Cyclin E的表达强度成正相关(P<0.05)。结论:Survivin与Cyclin E的表达与宫颈癌的发生发展有关,二者在宫颈癌组织中的表达密切相关。

上皮性卵巢癌组织中DJ-1和HSP27蛋白的表达及与肿瘤侵袭转移的相关性

收集我院卵巢上皮性肿瘤石蜡组织标本43例和正常卵巢组织标本28例,采用免疫组织化学染色法检测DJ-1和HSP27蛋白的表达情况。结果DJ-1、HSP27蛋白在卵巢癌组织中的表达率均明显高于正常卵巢组织(P<0.05);皮性卵巢癌组织中DJ-1和HSP27蛋白的表达与分化程度、淋巴结转移相关(P<0.05)。上皮性卵巢癌组织中DJ-1和HSP27蛋白表达上调,其高表达可能促进上皮性卵巢癌侵袭转移。

Tim-4促进子宫颈癌细胞SiHa侵袭与迁移及其可能机制

目的:探讨Tim-4促进子宫颈癌细胞侵袭与迁移及其相关机制。方法:用实时荧光定量PCR法检测子宫颈癌细胞系Siha、Hela与子宫颈上皮永生化细胞系H8中Tim-4的表达水平。在较低表达Tim-4的Siha细胞系感染携Tim-4的慢病毒载体,荧光显微镜观测Siha细胞系转染Tim-4的表达水平。用Transwell及划痕实验检测Tim-4对子宫颈癌细胞系Siha的侵袭与迁转移能力的影响,用Western blotting检测Siha细胞转染Tim-4后MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin的变化。结果:子宫颈癌细胞系Siha、Hela与宫颈上皮永生化细胞系H8相比高表达Tim-4。成功构建携Tim-4慢病毒载体的Siha细胞系;Tim-4明显抑制子宫颈癌细胞系Siha的迁移与侵袭能力,且影响了MMP2、MMP9及N-cadherin、E-cadherin的表达水平。结论:过表达Tim-4可促进子宫颈癌细胞的侵袭与迁移能力,其机制可能与Tim-4促进Siha细胞EMT转化有关。

雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)与子宫内膜息肉形成的相关性研究

探讨雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)对子宫内膜息肉形成的影响作用,为今后病因学的探索提供理论依据。选取60例子宫内膜息肉患者作为观察组,60例正常子宫内膜患者作为对照组,检测比较两组患者腺上皮细胞、间质细胞的ER、PR含量。观察组子宫内膜息肉组织腺上皮细胞、间质细胞中的ER表达低于对照组正常增殖期子宫内膜,但差异均无统计学差异(P>0.05);观察组对象的腺上皮细胞、间质细胞中的PR表达均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ER和PR表达失衡与子宫内膜息肉的形成存在关联性,特别是低表达的PR可能参与了息肉发生发展的病理过程。

手算方式计算^(192)Ir应用于宫颈癌近距离治疗的放置时间

目的:研究近距离同时治疗子宫体及阴道壁以及用手算方式决定^(192)Ir放置时间。材料与方法:首先测量^(192)Ir在水中2.0 cm处的绝对剂量及一套^(192)Ir在子宫体及阴道壁施源器的实测剂量率数据,之后回归一个可描述此数据的方程式,根据^(192)Ir源和距给予剂量点的距离,综合利用此方程式逐一计算各点要满足所给予剂量时该停留的时间。结果:此手算的计算系统和现今使用的治疗计划系统所算出的时间比较误差在1.0%内,而且可以手算评估宫颈口的累计剂量,以避免过高剂量导致宫颈口糜烂。结论:在高度依赖计算机的时代,此方法提供近距离治疗的手算计算方式,在治疗计划系统出现故障或是系统太老旧无法符合临床所需时使用。此方法的实务操作更可提供给医师及医学物理师作为一个良好的训练教材。

miR-183及Akt1蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义

目的探讨miR-183及Akt1蛋白在子宫内膜癌(EC)组织中的表达,以及抑制或过表达miR-183对Ishikawa细胞内Akt1蛋白表达的影响。方法实时定量PCR方法检测子宫内膜癌组织miR-183及Akt1m RNA的表达水平,Western blot方法检测子宫内膜癌组织Akt1蛋白表达;将miR-183 inhibitors或miR-183 mimics应用阳离子脂质体Lipofectamine TM2000转染将转染至Ishikawa细胞,实时定量PCR方法及Western blot方法分别检测转染后Akt1 mRNA及蛋白的表达变化,MTT方法检测转染后细胞增殖能力的变化。结果 miR-183在子宫内膜癌组织中的表达量较癌旁组织明显降低,Akt1蛋白及mRNA在癌组织中较癌旁组织表达明显增高(P<0.01);与对照组相比,转染miR-183 mimics的Ishikawa细胞内Akt1蛋白与mRNA水平显著降低,细胞增殖能力显著下降(P<0.01);与对照组相比,转染miR-183 inhibitors的Ishikawa细胞内Akt1蛋白与mRNA水平显著升高,细胞增殖能力亦显著升高(P<0.01)。结论 miR-183在子宫内膜癌组织中低表达,并能够抑制Ishikawa细胞增殖,抑制Akt1的表达可能是其作用机制之一。