人RASSF1A基因的真核表达载体的构建及其表达

目的通过构建人RASSF1A基因的真核表达载体,为研究其在肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞、细胞增殖抑制等方面奠定基础。方法采用RT-PCR从人外周血的单个核细胞RNA中扩增出人RASSF1A基因的全长cDNA,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中获得重组质粒。利用脂质体将重组质粒转染入人鼻咽癌细胞株CNE-2中,采用RT-PCR,Western-blot检测RASSF1A的瞬时表达。结果酶切图谱分析及基因测序证明人RASSF1A基因已被完整、正确地插入到pcDNA3.1(+)质粒载体中,RT-PCR及Western-blot结果显示转染细胞的RASSF1A表达水平上调。结论成功构建了RASSF1A基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/RASSF1A。

人RASSF2基因的真核表达载体的构建及其表达

目的 构建人RASSF2基因的真核表达载体 ,为研究RASSF2在肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞等方面的作用奠定基础。方法 采用RT PCR自正常人外周血单个核细胞RNA中扩增出人RASSF2基因的全长cDNA ,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体 pcDNA3.1/HisC中获得重组质粒。用脂质体将重组质粒转染人胰腺癌细胞株PANC 1,RT PCR检测其表达。结果 酶切图谱分析及基因测序证明人RASSF2表达片段已被完整、正确的插入到 pcDNA3.1/HisC中 ,RT PCR结果显示转染细胞RASSF2表达水平上调。结论 成功构建了RASSF2基因的真核表达载体 pcDNA3.