鼻咽“癌前阶段”免疫状态的研究——血清EB病毒IgA/VCA抗体阳性的健康人免疫状态的研究

EB病毒系人类普遍感染的条件性致病性病毒,为什么当中有少数人(5％)可测到较高滴度IgA/VCA抗体,而大多数人则否?本文作者发现EB病毒IgA/VCA阳性健康人的细胞免疫功能有所降低和T细胞亚群比例失衡。作者认为某些正常人群已存在着细胞免疫和调节功能失常,机体免疫监视功能低下,对潜在的EB病毒失控,异致病毒复制活跃,EB病毒相关抗体滴度升高。因此,研究机体免疫状态对癌前阶段的确立及免疫与鼻咽癌发生发展的关系颇有意义。

鼻咽癌患者及其患病风险者若干免疫功能的观察

观察了ＮＰＣ患者和不同滴度ＩｇＡ／ＶＣＡ者的Ｔ淋巴细胞亚群、免疫球蛋白（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ）和补体Ｃ３的变化。结果提示，鼻咽癌患者的Ｔ细胞亚群失调，细胞免疫功能明显降低而体液免疫功能明显增高；ＮＰＣ患病风险者──高滴度ＩｇＡ／ＶＣＡ者的免疫功能发生了与ＮＰＣ患者相似的变化；低滴度ＩｇＡ／ＶＣＡ者的细胞免疫功能也开始趋向于抑制状态。研究结果为ＮＰＣ发病的免疫机制和防治提供了重要的实验依据。

鼻咽癌抗独特型抗体诱导的体液和细胞免疫应答

目的探讨抗独特型抗体(Ab2)2H4和5D3模拟抗原诱导免疫应答的能力。方法用Ab2免疫Balb/c小鼠获得抗血清 ,以ELISA检测其Ab3,WesternBlot分析其识别抗原的分子质量。用迟发型超敏反应(DTH)和淋巴细胞增殖试验 ,检测Ab2诱发细胞免疫反应的能力。结果2H4,5D3免疫同系动物产生的含有抗抗独特型抗体(Ab3)的抗血清 ,可特异性地与靶细胞结合。FC2(Ab1)和经2H4免疫的Ab3可识别相对分子质量(Mr)相同约68000的抗原 ,且不同于HNL5(Ab1)和5D3免疫的Ab3所识别的抗原(Mr80000)。在DTH试验中 ,所致小鼠足垫肿大的程度 ,2H4和5D3实验组均显著高于对照组。而在淋巴细胞增殖试验中 ,Ab2免疫鼠脾T细胞在体外对靶细胞或Ab2的再次刺激呈现明显的细胞增殖反应 ,而无关肿瘤细胞或抗体的刺激则不能引起细胞增殖。结论抗独特型抗体2H4和5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,能模拟不同分子质量的鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫应答。

鼻咽癌患者外周血Th1细胞的变化及其与病程的关系

利用细胞因子诱生及ＥＬＩＳＡ等技术，研究了３８例不同分期的鼻咽癌（ＮＰＣ）患者、２３例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）分泌的细胞因子模式，较系统地研究了ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞亚群Ｔｈ１和Ｔｈ２所分泌的代表性的细胞因子类型ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＩＬ－１０等的变化；同时检测了ＮＰＣ患者血清中ＩＬ－２和ＩＬ－４水平。发现ＮＰＣ患者ＰＢＭＣ体外分泌ＩＬ－２的水平下降，ＩＬ－４的水平增高；血清中ＩＬ－２水平降低，而ＩＬ－４的水平显著升高，并且随着病程有进行性发展的趋势。提示Ｔｈ１／Ｔｈ２细胞亚群在不同临床分期的ＮＰＣ患者呈现比例失调。

鼻咽癌患者的EB病毒IgM/VCA抗体反应的研究

本文应用免疫酶法检测了162例鼻咽癌、34例鼻咽癌粘膜病变、41例其他肿瘤和80例正常人(其中35例已知IgA/VCA抗体阳性)血清中IgM/VCA抗体,并与IgA/VCA和IgA/EA抗体进行比较。发现鼻咽癌患者血清中不仅含有高滴度的IgA/VCA抗体,而且含有高滴度的IgM/VCA抗体,阳性率(≥1:10)分别为97.53％和93.20％,GMT为157.60和95.75。两种抗体水平均明显高于其他对照组。有临床分期的62例鼻咽癌患者的IgM抗体水平,有随病程进展而略有升高的趋势。提示鼻咽癌患者体内的EB病毒慢性持续感染和活跃的复制。 鼻咽癌患者与IgA/VCA阳性的正常人血清中IgA/VCA和IgM/VCA抗体双阳性率分别为92.0％和31.43％;IgA/VCA和IgA/EA抗体双阳性率为48.76％和14.29％。鼻咽癌患者血清中,前者双阳性率高于后者双阳性率,且与正常相比有显著差异(P<0.01)。表明IgA/VCA和IgM/VCA抗体一起作为早期发现鼻咽癌的血清学指标,可能优于沿用的IgA/VCA和IgA/EA指标,操作和成本亦较方便和便宜。

CNE-2Z膜电位的研究

目前,国内外对癌细胞膜进行了多方面大量的研究,但有关癌细胞膜电学特性的研究很少。国外曾有文献报道Ehrlich腹水瘤细胞膜电位,而鼻咽癌细胞膜电位目前尚未见报道。

EB病毒DNA在鼻咽病变中的表现

本文通过原位杂交技术检测鼻咽活检组织不同病理改变时EBV—DNA的表现,以探讨EB病毒在鼻咽癌发生过程中的可能作用。结果显示:(1)本实验所有鼻咽低分化癌癌组织均出现EBV—DNA片段,且绝大部分病例的阳性细胞数及细胞阳性强度均在中等以上;(2)无论是鼻咽癌或慢性鼻咽炎病例,所见到的中-重度异型改变上皮或淋巴组织,均有数量不等的细胞存在阳性强度不同的EBV-DNA片段,粘膜下小涎腺内亦常见到一定数量的EBV-DNA片段。结果提示:(1)EB病毒与鼻咽低分化癌关系密切。EBV作为致鼻咽癌病因多因素中的一员是有可能的;(2)患者血清中EB病毒相关抗体,尤其是IgA抗体阳性率和滴度的升高,可能与鼻咽局部EBV感染及/或EBV激活有关;(3)在异型改变上皮中有中等或以上阳性强度EBV-DNA片段的检出,将有可能作为推测鼻咽癌癌前病变的有效指标。

人鼻咽上皮细胞株HNE-1染色体高分辨显带的研究

作者首次采用高分辨染色体G显带技术,对本室建立的人鼻咽癌上皮细胞株“湖南一号”(HNE-1)进行了细胞遗传学研究。HNE-1细胞株在第15代时,染色体数目变异在68—78之间,众数为74。所检细胞均含有结构异常的染色体。出现频率比较高的标记染色体15条,其中某些标记染色体只有在高分辨染色体上才清楚地显示出结构重排。此外还发现少数细胞内存在双微体和核内复制。与其它鼻咽癌上皮细胞株比较,发现7号染色体部分缺失del(7)(q32)在CNE、HNE-1及鼻咽癌活检组织中同时存在,这一标记染色体可能与鼻咽癌的发生有重要联系。

鼻咽癌活检组织中HLA、EBNA及间质中T淋巴细胞亚群的分布

本实验对人类白细胞抗原（ＨＬＡ）、爱波斯坦－巴尔病毒核抗原（ＥＢＮＡ）、Ｔ细胞亚群的表达及分布进行综合分析，探讨其在癌变过程中的作用。用单克隆抗体Ｗ＿６／３２（抗ＨＬＡ－Ａ，Ｂ，Ｃ）、ＣＲ＿３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ，ＤＰ，ＤＱ）、和Ｔ＿４、Ｔ＿８、Ｔ＿（１１），以碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）和用鼻咽癌患者血清以抗补体Ｃ＿３免疫荧光法，检测鼻咽癌（２５例）及慢性鼻咽炎（１０例）活检组织中ＨＬＡ、Ｔ细胞亚群分型和ＥＢＮＡ的表达。结果显示，鼻咽癌癌细胞多有ＨＬＡ－Ⅰ和Ⅱ型抗原表达，而以ＨＬＡ－Ⅱ型抗原表达为明显；慢性鼻咽炎上皮细胞表达ＨＬＡ－Ⅰ和Ⅱ型抗原较弱，与癌细胞比较，差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。提示在癌变过程中，存在着ＨＬＡ表达的异常，体内ＥＢ病毒特异性Ｔ细胞可能不能识别带ＨＬＡ－Ⅱ型抗原的癌细胞，因而使其逃脱了机体的免疫监视。鼻咽癌组织中，癌细胞ＥＢＮＡ呈阳性和强阳性；癌间质中Ｔ细胞总数、Ｔ辅助、Ｔ杀伤细胞数量均减少，证明鼻咽癌局部细胞免疫功能降低。

鼻咽未分化癌与非何杰金淋巴瘤的显微图像分析

本文在HE染色及免疫组织化学反应的基础上将诊断鼻咽未分化癌者16例及淋巴瘤15例作显微图像分析,结果两组病例所测得的瘤细胞核面积,核周长,形状因子,核球径(sphere diameter)及核球容积(sphere volume)差异均高度显著,P<0.001,由此可见图像分析不失为病理诊断的一个有力辅助手段,值得进一步研究。

应用生物素标记探针进行细胞原位杂交检测人鼻咽癌细胞株中的EB病毒LMP基因

应用生物素标记探针进行细胞原位杂交检测人鼻咽癌细胞株中的ＥＢ病毒ＬＭＰ基因滕智平，曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所北京１０００５２）关键词原位杂交，ＥＢ病毒ＬＭＰ基因，鼻咽癌我们曾用ＰＣＲ和同位素标记探针的核酸杂交技术，检测人鼻咽癌体外培养细胞株...

鼻咽癌抗独特型单克隆抗体的主动免疫初探

用湖南鼻咽癌细胞株HNI2为免疫原,制备了数株抗鼻咽癌单抗(Abl).再用两株Abl(FC_2、HNI-5)为免疫原,制备了两株抗独特型单抗Ab2(2H4和5D3).体外和体内实验证实,2H4、5D3能替代鼻咽癌抗原,诱导体液和细胞免疫应答.因而认为它们可以作为新型抗鼻咽癌疫苗的候选物.选择19例晚期鼻咽癌病人用氢氧化铝凝胶沉淀的Ab2(Alum-2H4、Alum5D3),配合放疗进行主动免疫治疗;9例单纯接受放疗的晚期鼻咽癌病人作为对照组.经血清学检测发现,治疗组病人的抗抗独特型抗体(Ab3)、抗肿瘤抗体(Ab1’)水平均有不同程度增高,但也产生了人抗鼠抗体(HAMA).血清细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2水平在大多数治疗组病人中升高,而对照组Ab1 TNF-α、IFN-γIFM及IL-2血清水平均未升高.初步临床研究显示,鼠源性抗独特型单抗用于临床治疗是安全的,且Ab2能模拟肿瘤相关抗原,激发机体产生主动免疫应答.

鼻咽癌患者NK、mIL－2R、sIL－2R及TNF的初步观察

本文对３０例鼻咽癌患者的四项免疫学指标进行了检测，发现ｍＩＬ－２Ｒ表达减少，ｓＩＬ－２Ｒ和ＴＮＦ水平升高，ＮＫ活性与正常对照无显著差异，提示患者免疫功能抑制。上述指标与鼻咽癌病期的关系有待进一步研究。

鼻咽癌与非鼻咽癌高滴度VCA-IgA抗体阳性患者体液免疫与红细胞免疫变化比较

近年来应用免疫酶标法测定ＥＢ病毒ＶＣＡＩｇＡ抗体诊断鼻咽癌（Ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅｒｌｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＮＰＣ）已越来越被临床接受。因此法具有方法简便、重复性好的优点，尤其在某些患者病变早期，临床症状尚不明显时，高滴度（１∶４０以上）的ＶＣＡ?..

鼻咽癌患者血清中Epstein-Barr病毒早期抗原特异性抗体的IgA类抗独特型抗体的检测

用3.5％PEG(MW6000)预先处理被检血清以除掉免疫复合物及干扰抗原之后,用新建立的ELISA方法测定血清中Epstein-Barr病毒早期抗原特异性抗体的抗独特型(Anti-Id)抗体。67例鼻咽癌患者中,80％IgA类的Anti-Id抗体阳性(P/N值≥2.1),而56例正常人群除1例阳性外,其余均阴性。测定46例鼻咽癌患者血清EA/IgA滴度与Anti-Id的关系表明,Anti-Id抗体P/N值与IgA/EA滴度呈负相关(r=-0.6,P<0.001)。12例鼻咽癌病人血清中EA抗体的IgG类Anti-Id抗体则与正常人无显著差别。

识别人体上皮组织基膜的CAN181抗体及其在鼻咽癌组织中的定位

基膜(又称基底膜)属细胞外间质。基膜主要有两种,一种是分隔上皮与结缔组织的膜,称为上皮组织基膜;另一种分隔结缔组织与血管的膜,称为血管内皮基膜。抗IV型胶原和基膜粘连蛋白(lamimin)的多克隆抗体能识别这两种基膜。传统的PAS染色能显示这两种基膜。但也显示基膜外其他多糖类物质。作者在研制抗鼻咽癌单克隆抗体的同时获得一株杂交瘤细胞株,其分泌的抗体(命名为CAN181)

鼻咽癌患者及其患病风险者红细胞免疫功能研究

目的：探讨红细胞免疫在 Ｎ Ｐ Ｃ发病中的意义。方法：采用免疫粘附法检测了 Ｎ Ｐ Ｃ患者和不同滴度 Ｖ Ｃ Ａ－ Ｉｇ Ａ 者的红细胞免疫粘附功能、红细胞免疫调节因子活性。结果： Ｎ Ｐ Ｃ 患者的红细胞免疫粘附功能下降，红细胞免疫促进因子活性降低、抑制因子活性升高； Ｎ Ｐ Ｃ 患病风险者（ 高滴度 Ｖ Ｃ Ａ－ Ｉｇ Ａ 者） 的红细胞免疫粘附及其调节功能与 Ｎ Ｐ Ｃ患者的变化相似，只是程度不同；低滴度 Ｖ Ｃ Ａ－ Ｉｇ Ａ 者红细胞免疫粘附功能及促进因子活性未发生显著变化，但红细胞免疫抑制因子活性降低、红细胞免疫功能趋于抑制。结论：红细胞免疫功能的改变在 Ｎ Ｐ Ｃ发病机制中具有一定作用。

鼻咽癌血清中EB病毒核抗原-1和核抗原-2抗体的研究

用抗补体免疫荧光法检测鼻咽癌患者和对照人群中EB病毒核抗原-1(EBNA-1)和EB病毒核抗原-2(EBNA-2)抗体的水平。鼻咽癌组中两种抗体滴度都升高,以EBNA-1抗体上升明显;且EBNA-1抗体与总EBNA抗体水平的变化趋势相一致。鼻咽增生性病变组中EBNA-2抗体略占优势,该组中EBNA-2抗体水平升高可能与潜伏状态的EB病毒激活或再感染的早期阶段有关。

鼻咽癌患者T细胞、巨噬细胞及红细胞免疫功能研究

目的 探讨鼻咽癌患者体内多种免疫效应细胞功能的变化规律及其临床意义。方法 分别采用ＡＰＡＡＰ法、斑蝥皮泡法、免疫粘附法及酶免法检测了２９ 例鼻咽癌患者Ｔ细胞亚群、巨噬细胞吞噬率（ＰＲ）及吞噬指数（ＰＩ）、红细胞免疫粘附功能及血清ｓＩＬ２Ｒ水平，并分析其相互关系。结果 鼻咽癌组病人ＣＤ＋３ 细胞、ＣＤ＋４ 细胞、ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 比值降低、ＣＤ＋８ 细胞升高，与对照组比较有显著差异（Ｐ＜ ０．０１）；鼻咽癌患者ＰＲ与ＰＩ均显著低于对照组（Ｐ＜ ０．０１）；鼻咽癌组红细胞Ｃ３ｂ 受体花环率（Ｃ３ｂ ＲＲ）显著低于对照组（Ｐ＜ ０．０１），循环免疫复合物花环率（ＩＣＲ）则显著高于对照组（Ｐ＜ ０．０１）；鼻咽癌患者血清ｓＩＬ２Ｒ明显升高。Ⅲ期以上的鼻咽癌患者与Ⅱ期以下组比较上述免疫指标均有显著差异（Ｐ＜ ０．０１）。鼻咽癌组Ｃ３ｂ ＲＲ与ＰＲ及ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ ，ＰＲ与ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 正相关。ｓＩＬ２Ｒ与Ｃ３ｂＲＲ、ＰＲ及ＣＤ＋４ ／ＣＤ＋８ 均显著相关（Ｐ＜ ０．０５）。结论 鼻咽癌患者多种免疫效应细胞功能下降，并随病情进展，免疫功能进一步下降。

人低分化鼻咽癌细胞克隆亚系的分离及生长特性观察

应用有限稀释法，从人低分化鼻咽癌上皮细胞系（ＣＮＥ－２Ｚ）中分离出２５个克隆亚系。根据细胞电泳率，筛途出３个电泳率差异较大的克隆亚系（Ｈ５、Ｆ１和Ｆ７），并对其生长特性进行观察，发现细胞电泳率大的克隆亚系较电泳率小的克隆亚系生长能力强，而母系的细胞电泳率及细胞生长能力均居于中等。