重症肌无力患者细胞免疫及免疫调节与临床疗效关系的分析

目的探讨周围血中ＮＫ细胞、Ｔ细胞亚群、细胞膜白细胞介素－２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）阳性细胞与重症肌无力（ＭＧ）发病及临床疗效的关系。方法用流式细胞仪计数３９例ＭＧ患者ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５和ＣＤ５６抗体阳性细胞的百分率，应用许氏临床评分法对病情的严重程度和转归进行评定。结果ＭＧ患者的ｍＩＬ－２Ｒ（ＣＤ２５）阳性细胞无明显改变。ＣＤ３阳性细胞在肾上腺皮素激素治疗前、后无明显改变。ＮＫ细胞（ＣＤ５６）和ＣＤ４阳性细胞在治疗前均明显高于正常（Ｐ＜００１），治疗２个月后均明显下降（Ｐ＜０．０１，０．０５）。ＣＤ８阳性细胞治疗前后明显降低和增高（Ｐ＜００５）。结论ｍＩＬ－２Ｒ阳性细胞百分率不能直接反映ＭＧ的免疫功能紊乱，并对ＮＫ细胞和Ｔ细胞亚群的变化无直接调节作用。ＮＫ细胞增高，可能为其功能下降的代偿性变化。ＣＤ４增高，ＣＤ８下降提示免疫功能紊乱，符合自身免疫性疾病的特点。

乙酰胆碱受体抗体与大鼠中枢神经元烟碱型乙酰胆碱受体之间免疫结合反应

本研究旨在探讨长期以来无定论的重症肌无力（MG）患者血和脑脊液（CSF）中的乙酰胆碱受体抗体（AChRab）能否与中枢神经元烟碱型乙酰胆碱受体（神经-nAChR）结合，并引起中枢神经系统（CNS）功能障碍。用免疫亲和层析法从AChRab阳性的全身型MG患者血中提取纯化AChRab，然后用免疫组化法探讨AChRab与大鼠中枢神经-nAChR之间的免疫结合反应。结果首次表明，AChRab与神经-nAChR之间的阳性免疫结合反应广泛分布于大鼠大脑皮层、脑干颅神经运动核团、脊髓前角运动神经元等部位，提示MG患者AChRab不仅可与神经肌接头（NMJ）处肌-nAChR结合引起肌无力等症状，还可与CNS神经-nAChR结合，并可能引起CNS功能障碍。

重症肌无力患者血清sIL－2R的检测

重症肌无力患者血清ｓＩＬ－２Ｒ的检测耿新杰（青岛医学院附院感染科，青岛２６６００３）王守亮（青岛医学院附院检验科，青岛２６６００３）王炳旭（青岛医学附院神经科，青岛２６６００３）白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）因其在白细胞介素－２（ＩＬ－２）介导的...

重症肌无力患者外周血单个核细胞白细胞介素6活性变化

探讨白细胞介素 6(IL -6)在重症肌无力 (MG)发病机理中的作用及其临床意义。 方法 采用3H -TdR掺入法检测 40例正常对照及 42例MG患者外周血单个核细胞IL -6分泌活性。 结果 MG患者组IL -6活性显著高于正常对照组 ,且IL -6活性变化与乙酰胆碱受体抗体产生以及与MG临床类型、病情、预后密切相关。 结论 IL -6在MG发病机理中起着重要作用 ,检测IL -6活性对区分MG临床类型、判断病情、推测预后、指导治疗有重要的参考价值。

HLA-Ⅲ类成份及其构成的补体型与重症肌无力相关性的研究

对42个无血缘关系的重症肌无力(MG)患者家庭及36个健康献血员家庭成员的EDTA血浆用琼脂糖高压电泳及免疫固定的方法对属于HLA-Ⅲ的Bf,C4A及C4B的遗传多态性及其构成的补体型进行了检测。通过家系分析及对比发现,MG的Bf基因频率与正常人无差异;C4A~*4的基因频率病人远大于正常人,而C4A~*2则较常人为小。在补体型方便,MG患者与正常人亦不相同:患者以S42的频率最高,常人则以S31最高。MG患者的S42、S31及S40之间存在着正向连锁不平衡,S32和S41之间存在着负向连锁不平衡。进一步分析显示,S42与MG密切相关,这主要是由于C4A~*4与MG强烈相关,而Bf~*S和C4A~*2又与C4A~*4连锁不平衡的结果。

ABC－ELISA法检测重症肌无力患者三种自身抗体的研究

本文利用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测了９７例ＭＧ病人血清内三种抗体：ＡｃｈＲａｂ、Ｐｒ－Ｍａｂ、ＣＡＥａｂ。结果发现：（１）全身型ＡｃｈＲａｂ、ｐｒ－Ｍａｂ阳性率明显高于眼肌型（Ｐ＜０．０１）；ＡｃｈＲａｂ与Ｐｒ－ＭａｂＰ／Ｎ值呈线性正相关（ｒ＝０．７９７Ｐ＜０．０１）。（２）合并胸腺异常者ＣＡＥａｂ阳性率为８４．２％，明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）；此组病人ＡｃｈＲａｂ与ＣＡＥａｂＰ／Ｎ值呈显著正相关，Ｐｒ－Ｍａｂ与ＣＡＥａｂＰ／Ｎ值呈非常显著正相关。（ｒ＝０．５１２和ｒ＝０．５９８Ｐ＜０．０１）。（３）８例病人作了治疗前后抗体检测。激素治疗后或切除异常胸腺后，抗体滴度多数下降或有转阴趋势。

重症肌无力病人血清中IgM型乙酰胆碱受体、突触前膜抗体检测及临床意义

应用ＡＢＣ－ＥＬＩＳＡ法检测了９６例重症肌无力（ＭＧ）病人血清中ＩｇＭ－ＡｃｈＲ、Ｐｓｍａｂ。发现ＭＧ组中，有１８例（１８．７％）ＩｇＭ－ＡｃｈＲａｂ阳性；１０例（１０．４％）ＩｇＭ－Ｐｓｍａｂ阳性。ＩｇＭ－Ｐｓｍａｂ阳性频见于病程＜２年的ＭＧ病人；而与ＭＧ组病人的年龄和临床分型均无显著的相关性（Ｐ＞０．０５）。结果提示ＩｇＭ型抗体也与ＩｇＧ型抗体共同参与了ＭＧ的发病机制，且提示有神经肌肉接头突触前膜的体液免疫学异常。

重症肌无力患者IL-2生成及其调节因子的变化

本文探讨全身型MG患者淋巴细胞IL—2生成及其调节因子的变化,结果表明:(1)患者淋巴细胞生成IL—2的能力明显降低。(2)患者活化T淋巴细胞表达IL—2受体及对IL—2发生反应的能力无异常变化。(3)患者血清中未发现对正常人IL—2生成有抑制作用的物质。(4)患者血清IL—2抑制物活性低于正常。(5)轻—中度患者与重度患者的上述观察指标均无显著差异。本文结合作者前文的研究结果及文献,对上述发现的意义进行了讨论。

重症肌无力患者周围血中CD4^+T淋巴细胞亚群的研究

目的研究ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的功能亚群在重症肌无力（ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ，ＭＧ）发病中的作用。方法采用免荧光双标记技术和流式细胞仪对３９例ＭＧ患者和１８例健康对照者周围血中ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的两个亚群（ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－）的百分率进行测定。结果ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ＋亚群的百分率在ＭＧ组和ＡＣｈＲＡｂ阳性组明显低于对照组和ＡＣｈＲＡｂ阴性组；而ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＡ－细胞的百分率在ＭＧ组和ＡＣｈＲＡｂ阳性组显著高于对照组和ＡＣｈＲＡｂ阴性组。结论表明ＣＤ４＋Ｔ淋巴细胞的两个功能不同亚群在ＭＧ患者体内发生了异常改变，与ＡＣｈＲＡｂ的产生有关。

重症肌无力患者T细胞亚群的测定

作者采用改良的微量细胞毒试验,应用OKT单克隆抗体系统,对46例重症肌无力(MG)病人和36例健康人外周血中T细胞亚群进行了检测。结果表明,MG患者的OKT_3^+、OKT_4^+、OKT_3^+细胞百分率显著低于对照组,而OKT_4/OKT_3的比值显著高于对照组(P<0.05)。患者不同性别、年龄、病情及是否用激素治疗,其结果均无显著差异(P>0.05)。

重症肌无力胸腺指突状细胞的免疫形态学定量研究

对20例外科治疗的重症肌无力病人,用光镜,电镜,免疫组化及计算机图像分析系统,定量观察其胸腺指突状细胞的超微结构和分布特征,结合临床随访发现,患者胸腺内指突状细胞与对照组比较无形态特征区别,但对S-100免疫组化染色均呈阳性反应,其数量在重症肌无力组增多(P<0.05),胸腺瘤伴重症肌无力组增多更明显(P<0.01);患者胸腺内S-100阳性细胞数量越多,对胸腺切除的疗效越差。认为胸腺内指突状细胞的数量增多在重症肌无力胸腺自身耐受机制障碍及患者临床预后中的作用不容忽视。

大鼠实验性重症肌无力的免疫电镜研究

本文成功地制作了大鼠ＥＡＭＧ模型，在观察动物临床表现和检测血清ａｎｔｉ－ＡｃｈＲＡｂ的同时还对ＮＭＪ进行了电镜观察。ＥＡＭＧ急性期大鼠ＮＭＪ出现巨大吞噬细胞浸润，而突触前，后膜改变不明显；在慢性期ＮＭＪ与肌纤维间隙不规则，突触前、后膜间隙扩大，突触后膜上的ＡｃｈＲ明显减少，触脚亦减少，突触后膜变得简单化，而神经终未端内的囊泡和线粒体却基本保持完好。

重症肌无力患者胸腺Fas基因突变及氨基酸变异分析

目的 :分析重症肌无力 (MG)患者胸腺Fas基因突变及其编码蛋白质的氨基酸变异 ,探讨Fas分子在重症肌无力发生中的作用。方法 :提取 8例MG患者胸腺总RNA ,经RT PCR法扩增出Fas基因全长 ,克隆后用荧光标记法进行基因测序 ,用DNASIS、OMIGA软件与Genbank中Fas序列进行同源性比较和分析。结果 :8例患者胸腺组织 6例出现Fas基因突变 ,突变率为 75 % (6 /8) ,其中 5例发生 2个以上位点突变 ,只有 1个位点突变的 1例 (1 2 .5 % ,1 /8) ;突变类型为 1 6 4位A→G ,相应的氨基酸变异为 5 5位Asp→Gly,96位His Arg,1 92位Arg→Lys和 2 5 1位Lys→Arg。Fas基因高度保守 ,患者之间同源性为 99.6 %～ 1 0 0 % ,Fas分子同源性为 98.7%～ 99.7%。结论 :重症肌无力患者胸腺组织中存在Fas基因突变和Fas分子结构变异 。

实验性重症肌无力小鼠脾淋巴细胞糖皮质激素受体测定

为探讨糖皮质激素受体（ＧｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄＲｅｃｅｐｔｏｒ．ＧＲ）与实验性自身免疫性重症肌无力（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｍｙａｅｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ．ＥＡＭＧ）的关系及其意义，应用放射配体法测定ＥＡＭＧ及用强的松治疗的ＥＡＭＧ小鼠脾淋巴细胞ＧＲ水平。模型组小鼠脾淋巴细胞ＧＲ的数量（４０７８±１３３６位点／细胞）以比照组（５３９１±１６０７位点／细胞）明显降低（Ｐ＜０．０１），强的松治疗组小鼠免疫细胞ＧＲ水平较模型组明显不调（Ｐ＜０．０１）。提示免疫细胞ＧＲ水平下降与重症肌无力（Ｍｙａｓｔｈｅｎｉａｇｒａｖｉｓ．ＭＧ）发病机理可能有关，应用糖皮质激素治疗ＭＧ时。

重症肌无力患者血清AchR_(ab)与CAE_(ab)的不同特异性

本文报告用IHA检测103例MG患者血清中CAF_(ab),其中74例同时测定了AchR_(ab)。通过对两种抗体检测结果的比较,显示两者具有不同特异性。此外,为了证实CAE与AchR为不同的抗原物质,将AchR特异结合剂——^(124)I-α-GBT与CAE共同温育,结果未显示有^(125)I-α-BGF-AchR复合物放射性结合峰出现。说明CAE的活性成分不含AchR。以上结果证明,CAE-CAF_(ab)与AchR-AchR_(ab)为两种不同特异性的抗原-抗体系统。IHA检测CAE_(ab)对MG患者早期发现胸腺瘤具有重要诊断价值。

重症肌无力患者血清sIL-2R的研究

目的探讨重症肌无力（ＭＧ）患者血清可溶性ＩＬ－２Ｒ（ｓＩＬ－２Ｒ）水平的变化及临床意义。方法应用单克隆抗体，采用免疫酶标ＥＬＩＳＡ法检测了３８例不同临床类型（Ⅰ、ⅡＡ、ⅡＢ型）ＭＧ患者和３５例健康对照者的血清ｓＩＬ－２Ｒ水平。结果ＭＧ患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高干健康对照组（Ｐ＜０．０１），伴有胸腺瘤和病情较严重的ＭＧ患者血清ｓＩＬ－２Ｒ水平的增高也较显著（Ｐ＜０．０５）。结论ＭＧ患者血清ｓＩＬ－２Ｒ的水平异常增高，这一指标可用于评估机体免疫力和作为ＭＧ患者病情严重程度的标志。

重症肌无力患者外周血T、B淋巴细胞Bcl-2的表达

目的 探讨重症肌无力 (MG)患者外周血单个核细胞Bcl 2蛋白表达及其临床意义。方法 以流式细胞仪双标记免疫荧光方法测定 4 7例临床确诊的MG患者外周血T、B淋巴细胞Bcl 2蛋白表达和CD3+T细胞Bcl 2蛋白表达的平均荧光强度 (MFI)。结果 ( 1)MG组外周血CD3+、CD4 +、CD8+T淋巴细胞和CD19+细胞Bcl 2蛋白表达明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,CD3+T细胞蛋白表达Bcl 2的MFI( 0 .572± 0 .177)亦明显高于对照组 ( 0 .170± 0 .147) (P <0 .0 1)。 ( 2 )MG组外周血CD3+、CD4 +、CD8+T淋巴细胞及CD19+细胞的Bcl 2蛋白表达与年龄无明显相关 ,而与临床严重程度绝对评分密切相关 (r=0 .63、0 .65、0 .61、0 .78,P <0 .0 5)。CD3+T细胞蛋白表达的MFI与MG患者病程相关密切 (r=0 .62 ,P <0 .0 1)。 ( 3)免疫抑制治疗后MG组临床严重程度绝对评分与淋巴细胞亚群Bcl 2蛋白表达、CD3+T细胞蛋白表达的MFI同步地较治疗前有明显下降 (P <0 .0 1)。结论 外周血淋巴细胞Bcl 2蛋白异常表达对MG发病及临床症状有重要作用。

抗乙酰胆碱受体α－银环蛇毒素结合区抗体可变区的序列分析

通过对３株抗乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）的α－银环蛇毒素（α－ＢＴ）结合区抗体的配位特异性测定和可变区基因序列分析，探讨重症肌无力（ＭＧ）的发病机制。这３株抗体相互竞争对ＡＣｈＲ的结合，说明它们具有共同的识别部位。３株抗体的Ｈ链可能来源于同─种系基因，并且在抗原亲和成熟过程中发生体细胞突变；Ｌ链则由不同的亚组基因编码。结果表明，抗ＡＣｈＲα－ＢＴ结合区抗体的Ｈ链在决定抗体配位特异性上起重要作用。

IgG亚型检测与疾病的相关研究

IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白,占70%-75%,也是最重要的抗感染分子,IgG根据其分子主链（γ链）抗原性差别及二硫键数目和位置的不同,可分为四个亚型,分别是IgG1,IgG2,IgG3和IgG4,它们在正常人体内含量分别为65%、23%、8%、4%左右.各种亚型都有各自特性和不同的功能,IgG作用大多通过IgG亚型来完成.IgG1是 IgG中最重要的亚型,具有很强的激活补体和结合吞噬细胞的能力.IgG2在对多糖抗原的免疫、应答中占优势.IgG3在对蛋白质及多肽类抗原产生的免疫应答中常常表现出比IgG1更高的亲和力.IgG4可能是IgG各亚型中最不活跃的成分,它主要参与过敏反应.本文现对IgG亚型检测与疾病的相关性研究进展作一综述.

重症肌无力的分子生物学研究

重症肌无力的分子生物学研究许贤豪（北京协和医院神经科，北京１００７３０）分子生物学已深入到临床各学科，当前有种趋势，那就是用分子生物学观点来认识、用分子生物学手段来诊、疗临床各科有关疾病。现以重症肌无力为例来说明此问题。重症肌无力是一种累及神经—肌肉...