全人源抗大别班达病毒抗体的制备及功能鉴定

目的:从发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)恢复期患者的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中,获得大别班达病毒(Dabie bandavirus,DBV)特异性抗体序列,制备全人源DBV抗体。方法:用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测恢复期患者血浆抗体效价,挑取恢复期患者PBMC样本进行磁珠富集,经流式细胞仪分选获得能够结合DBV糖蛋白的特异性单个B细胞,经B细胞受体(B cell receptor,BCR)测序获得抗体序列,进行单链抗体的原核表达,采用蛋白免疫印迹、ELISA和体外中和实验鉴定抗体的表达、结合能力和中和活性。结果:共收集25例SFTS恢复期患者血液样本,血浆中均发现了DBV糖蛋白和核衣壳蛋白的抗体。选取样本进行流式分选和BCR测序,分析后共获得6个单链抗体,对DBV均具有良好的结合能力和中和活性。结论:成功表达了6个与DBV具有中和作用的全人源抗DBV抗体。

层粘连蛋白特异性受体——整合素α6亚单位胞外区单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备针对整合素α6胞外区的单克隆抗体并鉴定其生物学特异性。方法 :利用整合素α6cDNA构建可表达整合素α6胞外区的原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达GST———整合素α6胞外区融合蛋白。融合蛋白经凝胶分离纯化后免疫Balb C小鼠 ,取其脾细胞 ,用传统杂交瘤技术与小鼠骨髓瘤细胞融合及次黄嘌呤、氨基喋呤与胸苷选择性培养。单克隆杂交瘤上清经ELISA双筛后 ,分析其亚类及进行免疫细胞化学鉴定。结果 :经ELISA双筛 ,获得了一株能稳定分泌针对整合素α6胞外区的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,其分泌抗体亚类为IgG1。免疫细胞化学显示此单抗在人肝癌细胞系BEL 74 0 2呈强阳性反应。结论 :通过原核表达产物制备并纯化了针对整合素α6胞外区的单克隆抗体 ,对分离纯化α6亚单位、研究其生物学作用及鉴定正常和疾病状态下是否表达整合素α6及其水平具有重要意义。

肝尾状叶的断层解剖与CT研究

目的:为临床影像诊断肝尾状叶病变提供形态学依据。方法:采用30例成人横断层标本和30例成人腹部CT图像,各选取肝尾状叶所在的4个连续横断面,观测尾状叶与脊柱的对应高度、位置、形态、毗邻关系及有关径值。结果:尾状叶在T10～L1脊柱高度均可100%显示;静脉韧带裂和下腔静脉分别居尾状叶的前、后方,可作为各层面识别尾状叶的标志结构;尾状叶的横断面形态,头侧层面以钩形多见,尾侧层面以舌形为主,断面标本和CT图像中分别有23.33%(7/30)和16.67%(5/30)乳头突与肝分离。结论:通过对肝尾状叶断面标本及其CT测量值的对比,显示两者间无显著差异;第一肝门层面肝尾状叶与肝右叶的最大横径之间有相关关系。

人血管内皮钙黏蛋白5单克隆抗体的制备及应用

目的制备并鉴定人血管内皮钙黏蛋白5(VECDH5)的单克隆抗体(m Ab)。方法用重组原核人VECDH5蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术进行细胞融合;间接ELISA筛选阳性克隆,得到稳定分泌抗VECDH5抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定其效价;Western blot法、流式细胞术、免疫荧光细胞化学染色、免疫组织化学染色鉴定其特异性及抗原表位。结果制备并获得1株可分泌特异性抗VECDH5的杂交瘤细胞株(2C11)。ELISA测定腹水效价高达1∶10 000。多种方法均证实该抗体能特异性识别人VECDH5蛋白,并可在上述不同方法中应用。经抗原表位鉴定,研究制备的2C11识别的氨基酸序列为LDREVVPWYNLTVEA。结论成功制备了亲和力高、特异型好的抗人VECDH5的m Ab。

蝶窦的CT与断层解剖比较研究

目的了解蝶窦CT图像和实体解剖的区别,为蝶窦手术提供解剖学和影像学资料。方法采用CT技术和断层解剖方法,对15例尸头和50例颅骨标本蝶窦的形态、类型、径线、毗邻等进行观察。结果蝶窦的前后径大于上下径,上壁和前壁薄,下壁和后壁较厚。在蝶窦CT水平层面上可清楚显示其气化类型,前后壁、两侧壁及中隔的位置、厚度、毗邻;在冠状层面上可显示上、下壁厚度及上壁与垂体、颈内动脉的关系。蝶窦内可见管型视神经管隆起和管型颈内动脉隆起,其出现率分别为23.8%和21.9%。视神经管隆起仅见于发育良好的枕鞍型和全鞍型蝶窦,一般后壁较薄,最薄者仅为0.6mm。结论蝶窦的气化程度差异较大,视神经、颈内动脉可向窦腔内突入。发育良好的枕鞍型和全鞍型蝶窦与脑干间仅隔以纸样薄骨板。经蝶窦入路手术,应控制手术操作范围,避免损伤操作范围及毗邻结构。

小鼠抗人B7-1(CD80)单克隆抗体的制备及其对肿瘤细胞的抑制作用

目的制备小鼠抗人B7-1(CD80)单克隆抗体(mAb),研究其对天然表达B7-1的恶性肿瘤细胞体外生长和迁移的影响。方法以人B7-1基因转染的L929-B7-1细胞免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb,并通过流式细胞术检测mAb对肿瘤细胞膜型B7-1的识别。以天然表达B7-1的Daudi细胞、Raji细胞及8266细胞为观察对象,分别加入(5、10、20、40)μg/m L B7-1 mAb处理,采用噻唑蓝(MTT)法检测mAb对肿瘤细胞体外增殖的影响,TranswellTM法分析mAb对肿瘤细胞体外迁移的影响,流式细胞术分析mAb对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。结果成功制备1株能稳定分泌小鼠抗人B7-1 mAb的杂交瘤,命名为5G10。经流式细胞术分析,该抗体与Daudi、Raji、8266、U266、BEL-7402及MCF-7肿瘤细胞的阳性结合率分别为(96.30±2.12)%、(95.70±1.79)%、(96.80±2.48)%、(23.20±2.35)%、(1.68±0.35)%、(0.55±0.04)%;与对照组相比,20μg/m L 5G10 mAb明显抑制Daudi细胞、Raji细胞及8266细胞的增殖,肿瘤细胞迁移率明显降低,细胞凋亡率明显增加。结论小鼠抗人B7-1 mAb能特异性识别和结合不同肿瘤细胞膜表面的B7-1,并能显著抑制天然表达B7-1的肿瘤细胞的体外生长、迁移并促进其凋亡。

现行增值税存在的问题及完善构想

现行增值税实行几年来,就实践而言,在征税范围、税率设计、税款抵扣、税率优惠等方面存在问题,文章就这些情况,进行了原因分析,并提出完善问题的构想。

人脐带间充质干细胞条件培养基对舌鳞癌Cal-27细胞增殖的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)条件培养基对舌鳞癌Cal-27细胞生物学特性的影响。方法:培养HUC-MSCs和Cal-27细胞,倒置显微镜下观察细胞形态;将HUC-MSCs条件培养基与Cal-27细胞体外间接共培养,CCK-8法检测Cal-27细胞的增殖活性,绘制生长曲线;通过Western blot法检测HUC-MSCs条件培养基对Cal-27细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达。结果:生长曲线结果显示,HUC-MSCs条件培养基可抑制Cal-27细胞增殖,并呈一定的浓度依赖性,这些变化伴随Cal-27细胞内PARP-1表达上调,Bcl-2、β-catenin、cMyc表达下调。结论:HUC-MSCs条件培养基可抑制Cal-27细胞增殖并促使其凋亡,这可能与细胞内的Wnt/β-catenin信号通路被抑制有关。