粉防己碱通过NF-κB和MAPK信号通路影响人滑膜细胞炎症及对类风湿性关节炎治疗作用研究

目的:探讨粉防己碱对滑膜炎的作用及对类风湿性关节炎(RA)的治疗作用。方法:体外建立白细胞介素(IL)-1β诱导的人滑膜炎细胞模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性;将细胞分为NC组、IL-1β组、IL-1β+粉防己碱(5μmol/L)组、IL-1β+粉防己碱(10μmol/L)组和IL-1β+粉防己碱(20μmol/L)组,用不同浓度的粉防己碱(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)处理2 h,然后用IL-1β(20 ng)刺激细胞6 h,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测细胞上清IL-6、IL-8、TNF-α含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中p-p65/p65、p-IκBα/IκBα、p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK的蛋白表达水平;体内建立胶原诱导型类风湿性关节炎(CIA)小鼠模型,将60只小鼠随机分为假手术组、模型组、粉防己碱低、中、高剂量组(浓度分别为7.5 mg/kg、15 mg/kg、30 mg/kg)检测小鼠关节肿胀度和关节炎指数;采用苏木精-伊红(HE)和番红固绿染色法检测小鼠关节组织的病理学变化。结果:与NC组比较,IL-1β组细胞IL-6、IL-8、TNF-α含量以及p-p65/p65,p-IκBα/IκBα,p-ERK/ERK,p-p38/p38,p-JNK/JNK的蛋白表达增加(P<0.05);与IL-1β组比较,粉防己碱低、中、高组(浓度分别为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)细胞IL-6、IL-8、TNF-α含量以及p-p65/p65、p-IκBα/IκBα、p-ERK/ERK、p-p38/p38及p-JNK/JNK的蛋白表达下降(P<0.05)。与假手术组比较,模型组小鼠的关节肿胀度和减小关节炎评分增加,同时炎性细胞浸润关节组织和软骨基质降解和损坏(P<0.05);与模型组比较,粉防己碱各剂量组小鼠的关节肿胀度和减小关节炎评分降低,同时炎性细胞浸润关节组织和软骨基质降解和损坏缓解(P<0.05)。结论:粉防己碱能够抑制滑膜炎的发生,并且可能与抑制NF-κB和MAPK信号介导的促炎细胞因子释放有关,同时粉防己碱对RA具有潜在的治疗价值。

中药外洗方结合穴位贴敷治疗老年膝骨关节炎的疗效

目的:探讨中药外洗方结合穴位贴敷治疗老年膝骨关节炎的临床疗效。方法:选取2019年6月—2020年6月在河南中医药大学第一附属医院就诊的64例老年膝关节骨性关节炎患者作为研究对象。采用随机数表法分为观察组与对照组,每组各 32 例。对照组在常规对症治疗基础上进行穴位贴敷治疗,观察组在对照组治疗方案基础上联合中药外洗方治疗,对比两组患者膝骨关节炎治疗效果及功能改善情况。结果:治疗前两组患者膝关节Lysholms评分比较,差异无统计学意义 (t=1.506,P>0.05),但观察组治疗后Lysholms 评分明显高于对照组,差异有统计学意义 (t=5.069,P<0.05)。治疗前两组患者视觉模拟评分 (VAS) 以及生活质量评分比较,差异无统计学意义 (t=0.947、1.052,P>0.05),但观察组治疗后VAS及生活质量评分明显高于对照组,差异有统计学意义 (t=3.482、4.965,P<0.05)。治疗前两组患者关节液中IL-1、IL-6水平比较,差异无统计学意义 (t=1.065、3.227,P>0.05),但观察组治疗后IL-1、IL-6水平明显低于对照组,差异有统计学意义 (t=3.649、12.849,P<0.05)。两组患者治疗期间均未发生严重不良反应或并发症,同时观察组治疗后总有效率为93.75%,明显高于对照组的75.00%,差异有统计学意义 (χ^(2)=7.058,P<0.05)。结论:采用中药外洗方结合穴位贴敷治疗老年膝关节骨性关节炎,可有效减轻患者临床症状,改善膝关节功能,对降低局部炎性因子水平、提升患者生活质量具有重要意义。

通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜炎性细胞TLR的影响

[目的]观察通络止痛方对人膝骨关节炎滑膜炎性细胞Toll样受体(TLR)的影响。[方法]取院内行全膝关节置换术患者术中废弃滑膜组织,进行原代培养,取3~4代成纤维细胞进行不同浓度浓度通络止痛方干预,具体分为:高浓度组(2.5 mg/mL)、中浓度组(0.25 mg/mL)、低浓度组(0.025 mg/mL)、对照组(0 mg/mL)。应用real-time PCR检测细胞内TLR4 mRNA表达情况,应用流式细胞术(FCM)检测细胞中TLR2、TLR4表达情况。[结果]与对照组比较,高、中浓度组通络止痛方人膝骨关节炎滑膜炎症细胞TLR4 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)。低浓度组通络止痛方对滑膜炎症细胞TLR4 mRNA抑制作用与对照组相近,差异无统计学意义。中、高浓度组抑制作用与浓度呈正比。高、中、低浓度通络止痛方组TLR4表达率与对照组比较都有明显的降低(P<0.05),且随着浓度升高,TLR4的表达率逐渐降低;高、中、低浓度通络止痛方组TLR2表达率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]高、中、低浓度通络止痛方均可以显著抑制Toll样受体的表达,提示通络止痛方可能通过Toll样受体通路影响或抑制人膝骨关节炎滑膜炎症反应。