甘氨鹅脱氧胆酸盐对人正常肝细胞HL-7702的影响

目的观察甘氨鹅脱氧胆酸盐(glycochenodeoxcholate,GCDC)对人正常肝细胞HL-7702凋亡诱导作用,探讨GCDC诱导HL-7702细胞凋亡的机制。方法终浓度分别为50、100、150、200、250μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞4、8、12、24h,光学显微镜镜下观察细胞形态学改变、用Am-Blue细胞活性检测和乳酸脱氢酶活性的测定及AnnexinV-FITC/PI双染色法检测GCDC对HL-7702细胞凋亡的影响,用荧光指示剂Fluo-3/AM测定HL-7702细胞内钙离子浓度。结果 (1)终浓度为150μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞24h后,细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变,包括核固缩、核碎裂和凋亡小体形成等。(2)Am-Blue吸光光度法、GENMED乳酸脱氢酶(LDH)总活性比色法及AnnexinV-FITC/PI双染色法定量检测结果均显示,GCDC均可诱导HL-7702细胞凋亡且呈剂量及时间依赖性。(3)GCDC能使HL-7702细胞内钙离子浓度增加且具有浓度和时间依赖性。结论 GCDC可能通过增加HL-7702细胞内钙离子浓度诱导人正常肝细胞HL-7702凋亡,其作用具有浓度和时间依赖性。

调脂清肝胶囊对实验性高脂血症及脂肪肝的作用

目的:研究调脂清肝胶囊对实验性高脂血症和脂肪肝的作用。方法:采用饲饵性大鼠高血脂模型观察调脂清肝胶囊的降血脂作用,采用乙硫氨酸所致小鼠脂肪肝模型观察调脂清肝胶囊预防脂肪肝作用。结果:调脂清肝胶囊明显降低高血脂大鼠血清总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量,升高高密度脂蛋白(HDL-C)含量,提高(HDL-C)/(CHO)比值;明显减轻高血脂大鼠肝和腹后壁脂肪重量;对脂肪肝小鼠肝脏脂肪性改变有明显的改善作用。结论:调脂清肝胶囊具有明显的降低血脂和预防脂肪肝作用。

5种常用中药注射剂对人正常肝细胞L-02的影响

目的 :观察 5种中药注射剂 (榄香烯、鸦胆子、华蟾素、康莱特、肝力 )体外对人正常肝细胞L 0 2增殖的影响。方法 :将人正常肝细胞L 0 2进行体外培养 ,采用MTT法测定不同浓度、不同时间 5种中药注射剂的体外抑制作用。结果 :榄香稀、鸦胆子对L 0 2细胞具有较强的抑制作用 ,康莱特具有一定的抑制作用 ,而肝力抑制作用不明显 ,华蟾素则具有明显的时间依赖性。结论 :榄香烯和鸦胆子在体外对L 0 2细胞具有较强的抑制作用 ,康莱特抑制作用较弱 ,肝力则无明显抑制作用 。

pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒在Chang Liver细胞中的表达和鉴定

目的构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株。方法采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T载体连接。双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)。构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平。结果pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建。Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建UBE2C基因的真核表达质粒并建立其稳定表达的Chang Liver细胞株,为下一步研究奠定基础。

金刚藤多糖的水提工艺及影响大鼠慢性盆腔炎血液流变研究

目的:优选金刚藤多糖水提工艺,并对其进行影响慢性盆腔炎血液流变研究。方法:以金刚藤多糖得率为指标,采用单因素考察结合正交试验设计优化金刚藤多糖水提工艺条件,再通过对大鼠全血黏度与血浆黏度的测定,来探究金刚藤多糖对慢性盆腔炎血液流变的影响。结果:金刚藤多糖水提最优工艺参数为加12倍量水,80℃提取3次,每次2 h;金刚藤多糖可显著降低全血黏度与血浆粘度。结论:优选的水提工艺稳定可靠,金刚藤多糖能影响慢性盆腔炎血液流变,具有潜在开发利用价值。