大鼠骨关节炎模型的建立及软骨组织中MMP-13和ADAMTS-5的表达

目的评价大鼠膝关节内侧副韧带离断与内侧半月板切除制作骨关节炎(OA)模型方法的可行性,探讨MMP-13和ADAMTS-5蛋白在大鼠骨关节炎模型软骨中的表达情况。方法 SD大鼠40只按随机数字法分为模型组(n=30)和假手术组(n=10),模型组采用膝关节内侧副韧带离断与内侧半月板切除制作膝OA模型,假手术组打开膝关节囊后缝合。模型组于术后4、6、8周处死大鼠,假手术组于术后8周处死大鼠。取大鼠关节软骨组织,分别采用Western blot技术及免疫组化方法测定软骨组织中MMP-13和ADAMTS-5蛋白表达情况。结果模型组术后4周即可见软骨退变,术后6周和8周时退变进一步加重,假手术组无明显软骨退变,各组相比大鼠关节软骨评分差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,MMP-13及ADAMTS-5蛋白表达在假手术组水平均较低。MMP-13造模4周开始升高,持续升高到第6周,第8周较之前降低。造模4周、造模6周和造模8周各组蛋白表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。ADAMTS-5造模6周开始升高,造模8周维持之前表达水平。造模4周分别与造模6周和造模8周相比,蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。造模6周大鼠关节软骨组织中蛋白表达和造模8周相比,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化检测蛋白表达趋势与Western blot检测结果一致。结论采用膝关节内侧副韧带离断与内侧半月板切除的方法可建立动物OA模型;MMP-13和ADAMTS-5在OA发病过程中的不同时期表达水平有明显变化,需要进一步的研究来探讨其相关信号通路。

盐酸多奈哌齐对骨关节炎大鼠软骨组织中肿瘤坏死因子-α和解整链蛋白金属蛋白酶-5表达的影响

目的探讨盐酸多奈哌齐对骨关节炎大鼠软骨组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)表达的影响。方法将30只无特定病原体级Sprague Dawley雌性大鼠随机分为正常组、模型组和盐酸多奈哌齐组,每组10只。模型组和盐酸多奈哌齐组大鼠膝关节腔注射40 g·L^(-1)木瓜蛋白酶0.15 mL制备膝骨关节炎模型,3 d注射1次,共注射3次;正常组大鼠注射等体积的生理盐水。造模成功后第7天,盐酸多奈哌齐组大鼠给予盐酸多奈哌齐(3 mL·kg^(-1))灌胃,每日1次;正常组和模型组大鼠给予相同剂量的生理盐水灌胃,每日1次;均持续灌胃6周。3组大鼠分别于灌胃1、3、6周时采用关节炎指数评分评估大鼠关节炎症程度;灌胃结束时取大鼠膝关节,采用苏木精-伊红染色观察3组大鼠关节结构改变情况;免疫组织化学法检测3组大鼠膝关节软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5蛋白表达,反转录聚合酶链反应法检测3组大鼠膝关节软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5 mRNA表达,Western blot法检测3组大鼠膝关节软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5蛋白表达。结果灌胃1、3、6周时,模型组和盐酸多奈哌齐组大鼠关节炎指数评分均显著高于正常组(P<0.05),盐酸多奈哌齐组大鼠关节炎指数评分显著低于模型组(P<0.05)。正常组大鼠未见滑膜组织炎症细胞浸润、滑膜纤维增生现象;模型组大鼠关节组织内大量炎症细胞浸润,关节囊可见囊性炎症增生,囊内韧带神经损伤,滑膜和纤维组织增生;盐酸多奈哌齐组大鼠滑膜组织炎症细胞浸润减少,纤维增生改善。模型组和盐酸多奈哌齐组大鼠膝关节软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于正常组(P<0.05),盐酸多奈哌齐组大鼠膝关节软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5 mRNA和蛋白相对表达量均显著低于模型组(P<0.05)。模型组和盐酸多奈哌齐组大鼠膝关节软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5阳性细胞数均显著高于正常组(P<0.05),盐酸多奈哌齐组大鼠膝关节软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5阳性细胞数均显著低于模型组(P<0.05)。结论盐酸多奈哌齐可通过抑制软骨组织中TNF-α、ADAMTS-5的表达对骨关节炎大鼠软骨起到保护作用。

青少年扁平足的足底压力特征及对早期干预的指导价值

目的 分析青少年扁平足的足底压力特征及对早期干预的指导价值。方法 选取2018年11月至2021年10月四川省骨科医院收治的青少年扁平足患者59例为观察组,另选取同期健康体检的正常足青少年59例为对照组。采用足底压力分布系统检测两组的足底各区域接触面积、压力峰值、最大冲量,并统计扁平足患者保守治疗及手术治疗的情况。比较保守治疗、手术治疗患者的一般资料及足底压力特征,分析需手术治疗的影响因素,并构建Logistic回归方程模型。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC)分析其预测价值。结果 观察组第2~5趾骨区接触面积小于对照组,第1跖骨区、足弓区接触面积显著大于对照组(P <0.05);观察组第1跖骨区、第2跖骨区、第3跖骨区、第4跖骨区的压力峰值低于对照组,第5跖骨区、足弓区、足跟内侧区、足跟外侧区的压力峰值高于对照组(P <0.05);观察组第2~5趾骨区、第2跖骨区、足弓区、足跟内侧区、足跟外侧区的最大冲量大于对照组(P <0.05);经手术治疗的患者足弓区接触面积、足弓区、足跟内侧区、足跟外侧区的压力峰值及最大冲量、体质量指数大于保守治疗患者(P <0.05);足弓区接触面积,足弓区、足跟内侧区、足跟外侧区的压力峰值及最大冲量是扁平足患者需手术治疗的影响因素(P <0.05);建立Logistic回归方程模型:当logit(P)> 0.358时,曲下面积(areas under the curve,AUC)值为0.976,95%CI为0.896~0.998,约登指数为0.892,x2=28.115,敏感度为94.12%,特异度为95.12%。结论 青少年扁平足患者的足底压力特征主要表现为足弓区接触面积增加,足弓区、足跟内侧区、足跟外侧区的压力峰值及最大冲量明显提高,这是患者需手术治疗的重要因素,临床可根据足底压力检测结果制订干预措施。

青蒿琥酯对胶原诱导型关节炎模型大鼠IL-17表达的影响研究

目的研究青蒿琥酯对胶原诱导型关节炎(CIA)模型大鼠IL-17表达的影响并探讨其相关的作用机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为正常组和模型组。模型组进行造模处理且于造模成功后进行再次分组,即模型组、甲氨蝶呤组(MTX组)及青蒿琥酯组(Art组)。各组按照要求给予生理盐水或是药物处理,取左前肢和右后肢第3足趾关节进行HE染色,并于光镜下观察组织的病理形态。对中性粒、滑膜细胞增生、纤维组织增生及淋巴细胞核浆细胞浸润进行盲法评价。对每只大鼠的足趾和踝关节破坏分骨侵蚀和关节间隙改变两个方面进行检测。取关节滑膜,以免疫组化检测白细胞介素-17的蛋白表达水平。结果 CIA模型关节炎症在起病后7d达到高峰,而后逐渐降低,关节肿胀后1d,CIA组与正常组的差异有统计学意义(P<0.05),给药29d后,Art组和MTX组的肿胀均能被抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);CIA大鼠X线表现双侧为对称分布,且第三十天可见明显的骨侵蚀和骨增生;各组大鼠给药30d后,其滑膜组织增生和软骨破坏明显,其中Art组和MTX组其均可显著的抑制CIA大鼠的淋巴细胞、滑膜细胞增生及软骨破坏且差异具有统计学意义(P<0.05);在大鼠滑膜中,存在着50%的正常表达,但着色程度较弱,在IL-17表达面积的比较中,模型组较之正常组明显增多,着色程度较深,在阳性面积及着色强度的比较中,Art组明显低于模型组,MTX组明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论青蒿琥酯可有效的抑制IL-17的表达,阻止类风湿关节炎的进展和关节破坏。