哮喘小鼠CD4^+T细胞中microRNA-31和FOXP3 mRNA的表达及相互关系的研究

目的初步探讨哮喘CD4+T细胞中microRNA-31和FOXP3的表达水平、两者的相关性及激素对它们的影响。方法以卵蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘小鼠模型。将15只BALB/c小鼠分为正常对照组、OVA组和地塞米松组,ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4和IFN-γ水平;实时荧光定量PCR检测小鼠脾脏CD4+T细胞的microRNA-31和FOXP3 mRNA的水平,并分析二者之间的相关性。结果 OVA组BALF中IL-4水平高于正常对照组[(228.29±66.18)pg/ml vs(66.63±17.33)pg/ml,P<0.05],地塞米松组BALF中IL-4水平与正常对照组或OVA组相比,无统计学差异。各组间IFN-γ无统计学差异。OVA组CD4+T细胞中FOXP3 mRNA为正常对照组的0.10倍(P<0.05);地塞米松组CD4+T细胞中FOXP3 mRNA为OVA组的3.75倍(P<0.05);正常对照组与地塞米松组之间FOXP3mRNA无统计学差异。OVA组的microRNA-31为正常对照组4.79倍(P<0.05);地塞米松组的microRNA-31为正常对照组4.85倍(P<0.05);OVA组microRNA-31水平和地塞米松组相比无统计学差异。microRNA-31和FOXP3 mRNA的Pearson相关系数为-0.609(P<0.05)。结论哮喘中microRNA-31和FOXP3 mRNA具有相关性。microRNA-31与地塞米松可能通过不同的途径调节CD4+T细胞中FOXP3 mRNA的表达。

Galectin-7多克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备鼠抗重组半乳糖凝集素7（Galectin-7）多克隆抗体及其在膀胱癌组织中特异性鉴定。方法PCR 法从人包皮组织中扩增 Galectin-7基因，并构建到 pET28a 表达载体中，使用 IPTG 诱导重组蛋白的表达，通过镍柱亲和层析纯化获得 Galectin-7蛋白。以纯化的 Galectin-7蛋白混合福氏完全佐剂免疫 Balb／C 小鼠制备抗体，并用 ELISA，Western blot 及免疫组织化学法检测抗体。结果成功表达、纯化了 Galectin-7重组蛋白，ELISA 检测 Galectin-7蛋白免疫的小鼠血清效价为1∶32000，Western blot 显示该抗体能与天然的 Galectin-7特异结合，免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人膀胱肿瘤组织的天然 Galectin-7。结论通过制备重组 Galectin-7蛋白为免疫原，免疫家兔，成功地制备了效价高、特异性好的抗 Galectin-7多克隆抗体。