制刺猬皮免疫调节白蛋白的多肽鉴定与分析

目的:对制刺猬皮免疫调节白蛋白(ALB)的多肽进行鉴定与分析。方法:应用LC-MS/MS、生物信息学软件结合同源序列比对和进化分析对制刺猬皮酶解后的成分鉴定,并对筛选得到免疫调节核心蛋白及多肽进行分析。结果:ALB是免疫调节关键蛋白,其中具有活性的多肽蛋白序列为RHPYFYAPELLYF,进化树分析显示欧洲刺猬与埃氏象鼩的ALB蛋白100%同源,亲缘关系最近,同源序列比对分析显示两物种的ALB蛋白都含608个氨基酸,氨基酸序列极为相似,具有活性的多肽蛋白序列RHPYFYAPELLYF无差异。结论:ALB的多肽在欧洲刺猬和埃氏象鼩中生物学功能相似,这为珍稀动物的临床替代性提供了部分基础证据。

多棘蜈蚣钙通道毒素多肽CaTX-Ssmd1原核表达及功能鉴定

为了检测广西多棘蜈蚣毒腺转录组文库新基因CaTX-Ssmd1编码的多肽是否具有阻断钙离子通道蛋白的生物活性,将构建的pGEX-4T-1-CaTX-Ssmd1原核表达载体转化Escherichia coli Rosetta(DE3),诱导表达产物经酶切和RP-HPLC分离后得到CaTX-Ssmd1成熟多肽.质谱检测显示CaTX-Ssmd1多肽分子量与理论值一致;钙成像实验表明CaTX-Ssmd1多肽能有效减弱高钾外液灌流激发的小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞[Ca^(2+)]i信号.结论:初步验证了原核表达纯化的CaTX-Ssmd1多肽为新发现的电压门控性钙通道(voltage gated calcium channels,VGCC)阻断剂,丰富了多棘蜈蚣生物活性多肽资源库.

中华白玉蜗牛来源糖胺聚糖的提取、分离及其抗氧化活性分析

糖胺聚糖是一种重要的药用活性寡糖,由于蜗牛糖胺聚糖的提取工艺尚不发达,使得蜗牛糖胺聚糖提取物中具有药理活性的有效结构仍不清楚,本文通过优化糖胺聚糖提取工艺,利用化学酶法联合丙酮循环脱脂工艺,经乙醇沉淀从蜗牛不同组织中提取糖胺聚糖,通过咔唑反应对蜗牛肌肉、内脏及黏液中的糖胺聚糖进行定量分析,结果显示,蜗牛肌肉、内脏及黏液中的糖胺聚糖提取率分别为0􀆰776%,1.961%和0.573%,二糖组分分析显示,蜗牛二糖组成以ΔUA2S-GlcNAc为主(98%),并有少量ΔUA2S-GlcNS存在。生物活性分析表明,从蜗牛肌肉、内脏和黏液中提取的糖胺聚糖均具有较高的抗氧化活性。其中,10 mg·mL^(-1)蜗牛黏液糖胺聚糖的总抗氧化能力(T-AOC)最高,为0.6064μmol·mL^(-1),其DPPH·自由基清除率也最高,为64.15%。本研究为蜗牛来源药用糖胺聚糖活性寡糖的制备分析提供研究基础。

翡翠贻贝肉酶解动物蛋白营养评价及其生理活性初探

对翡翠贻贝肉酶解动物蛋白 (enzymolyticanimalprotein ,EAP)进行的营养特性研究表明 :粗蛋白含量达72 .8% (干基 ) ,蛋白营养价高 ,氨基酸价为 93(第一限制氨基酸为含硫氨基酸 ) ;且富含赖氨酸、精氨酸、维生素、矿物质等 ;Glu、Asp、Gly等呈味物质含量丰富 ,是制作营养保健食品或海鲜调味料的理想原料。经动物实验表明 :翡翠贻贝肉EAP剂量为 32 0mg·kg-1体重时 ,对昆明小鼠移植性肿瘤S - 180的抑瘤率可达 5 0 .6 % 。

海洋肽的体外抗氧化作用

海洋肽系栉了孔扇贝中提取的多肽,分子量为800～1000。为研究其抗皮肤衰老的作用机制,测定了海洋肽对由邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子、Fenton反应产生羟自由基的清除率,过氧化脂质的最终分解产物丙二醛(MDA),油脂过氧化值(peroxide value,POV)。结果表明,海洋肽(3％,15％)对超氧阴离子的清除率分别为11.7％和41.8％,对羟自由基的清除率分别为8.6％和38.4％,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。同时,海洋肽(0.05％,0.50％)能降低5d和10d的POV和MDA含量(P<0.05,0.01)。实验证明,海洋肽通过有效清除超氧阴离子、羟自由基并抑制脂质过氧化而抗皮肤老化。

方格星虫延缓衰老作用研究

目的 :研究方格星虫提取物的延缓衰老作用。方法 :SD大鼠口服给药 30d后 ,采用硫代巴比妥酸显色法 (TBA法 )测定受试大鼠血清丙二醛 (MDA)含量 ,采用羟胺法测定血清SOD活性。采用果蝇生存试验测定方格星虫提取物对OregonK野生型黑腹果蝇生存时间的影响。结果 :方格星虫提取物经口给予SD大鼠不同剂量的方格星虫提取物 30d后 ,大鼠血清MDA含量显著降低 ,血清SOD活性显著增强。方格星虫提取物显著延长雌雄果蝇的平均寿命 ,显著延长雄果蝇的最高寿命。结论 :方格星虫提取物具有明显的延缓衰老作用。

扇贝多肽抑制紫外线A波诱导的HaCaT细胞凋亡依赖p38 MAPK通路和caspase-3

目的从p38促细胞分裂剂激活性蛋白激酶(p38MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度,研究扇贝多肽(poly-peptidefromChlamysfarreri,PCF)抑制紫外线A波(UVA)引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验分为6组:对照组、UVA模型组、UVA+5.68mmol.L-1维生素C阳性对照组、UVA+5.69mmol.L-1PCF组、UVA+2.84mmol.L-1PCF组、UVA+1.42mmol.L-1PCF组。以正交实验设计确立UVA诱导HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38MAPK及磷酸化p38MAPK表达;流式细胞术检测caspase-3的活性。结果PCF能明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡;SB203580和Ac-DEVD-CHO对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.425.69mmol.L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVA引起的p38MAPK磷酸化及caspase-3的活化。结论PCF可抑制UVA诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38MAPK通路和caspase-3活性有关。

不同海参多糖的化学组成分析比较

目的选取当前市场销售的品质不一的10种海参，分析比较其多糖的化学组成。方法采用酶解法和乙醇沉淀提取不同海参多糖，以总糖、硫酸根、糖醛酸、氨基糖和中性单糖含量为指标，进行化学组成分析比较，并在Q-Sepharose FF阴离子交换树脂色谱柱上分离，绘得洗脱曲线。结果10种海参多糖的总糖、硫酸根、糖醛酸和氨基糖含量的波动范围分别为40．33％～62．11％，19．54％～29．95％。9．85％～13．38％和4．92％～10．18％。中性单糖测定表明10种海参多糖均含有岩藻糖和半乳糖，部分含有甘露糖和葡萄糖，且岩藻糖含量很高。10种海参多糖在阴离子交换树脂色谱柱上的洗脱曲线明显不同，除仿刺参多糖和日本刺参多糖外，其余8种海参多糖均在盐浓度为3．2mol·L^-1的洗脱条件下洗脱完全。结论不同海参多糖在化学组成上差异明显，其在阴离子交换树脂色谱柱上分离的洗脱曲线也呈现不同特点。

异丁基壳聚糖多功能敷料的生物安全性

目的研究以壳聚糖衍生物-异丁基壳聚糖为生物基质材料而制成的多功能(止血、镇痛、抗菌、促愈合)创面敷料的安全性。方法采用皮肤刺激、皮内刺激、眼刺激法考察其刺激作用;利用皮肤斑贴试验观察其致敏作用;采用腹腔注射法观察其全身急性毒性作用。结果异丁基壳聚糖多功能敷料无刺激、无致敏及无明显急性毒性。结论异丁基壳聚糖多功能敷料具有良好的生物安全性。

粗吻海龙抗肿瘤作用的研究

采用小鼠移植性肿瘤(Heps、EAS)模型,对粗吻海龙的抗肿瘤有效部位进行筛选,结果表明40％乙醇提取物经大孔树脂柱分离,用蒸馏水洗脱部分对小鼠移植性肝癌作用最强,其抑制率为50.75％。

红非鲫(Oreochromis niloticus)鱼皮胶原蛋白酶解条件的研究

目的研究单酶和复合酶水解红非鲫鱼皮胶原蛋白制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)生物活性的寡聚肽的工艺条件。方法根据6种单酶的水解产物对ACE抑制作用的测定结果,确定了两种酶即菠萝蛋白酶和alcalase 2.4L碱性蛋白酶组成复合水解酶。采用正交试验确定了这两种酶单独水解鱼皮胶原蛋白的最适酶解条件。结果与结论菠萝蛋白酶和alcalase 2.4L蛋白酶的最适酶解温度,pH,酶/底物,时间,底物浓度分别为45℃,pH4.5,4000U.g-1,4h,6%和55℃,pH7.5,6000U.g-1,2h,4%。在此基础上,进行复合酶水解实验,结果表明先采用菠萝蛋白酶水解,再用alcalase 2.4L蛋白酶水解,效果更佳。采用该双酶复合水解工艺,所得水解产物的水解度为30.43%,体外对ACE的抑制率达68.6%。

蛙皮活性提取物的抗炎作用和体外抗菌活性研究

从美国沼泽绿蛙的皮中分离、提取得到蛙皮活性提取物，体外抗菌试验表明，该活性提取物对金黄色葡萄球菌等有抑制作用。另外，小鼠分别ｐｏ０．２２ｇ／ｋｇ和０．４５ｇ／ｋｇ活性提取物，能明显降低致炎剂导致的小鼠耳肿胀率，分别比空白组降低１８．３％和３１．６％；能明显抑制小鼠血管通透性，Ａ５９０ｎｍ吸收值分别比空白组降低２３．４％和２４．３％。

乌贼墨对小鼠生成白细胞介素─2的影响

研究乌贼墨对小ＩＬ—２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ—２）的诱生作用。用乌贼墨连续５ｄ给予ＢＡＬＢ／ｃ，小鼠灌胃后，取其抗凝血，分得淋巴细胞，制备ＩＬ— ２待检上清，通过 ＭＴＴ（［３─（４，５— Ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ— ２ｙＬ）─２，５ｄｉｐｈｅｎｙｌｔ ｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ］）比色法测其ＩＬ—２分泌活性。结果表明：致敏后２４ｈ小鼠血液中 ＩＬ—２活性升高达５０％以上，与对照组比较有明显差异（Ｐ＜０．０１），持续至４８ｈ开始呈下降趋势，９６ｈ后恢复正常。证实口服乌贼墨为诱生小鼠ＩＬ─２的唯一途径。

牡蛎天然活性肽对人胃腺癌BGC-823细胞周期与基因表达的调控

目的比较研究牡蛎天然活性肽(BPO)对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的生物学效应,并进一步探索其对胃癌细胞的作用机制。方法采用酸抽提、凝胶柱层析等方法,从牡蛎体内分离提取到牡蛎天然活性多肽组分BPO-1,以姜黄素和HMBA处理组为平行对照,流式细胞仪检测细胞周期变化及以免疫细胞化学方法检测相关癌基因、抑癌基因表达变化。结果BPO-1能有效抑制BGC-823细胞增殖活动,出现亚G1期细胞,细胞进入凋亡现象。BPO-1,姜黄素及其组合均能不同程度地上调BGC-823细胞p16,c-myc,Fas,p21WAF1/CIP1蛋白表达,下调突变型p53,bcl-2蛋白表达。结论BPO-1对胃癌细胞具有显著的诱导凋亡作用。其诱导癌细胞凋亡机制与其调节和干预bcl-2,c-myc等癌基因和p53,p16,p21WAF1/CIP1等抑癌基因的表达有关。

马氏珠母贝肉酶解蛋白抗疲劳功能的初步研究

目的对马氏珠母贝肉酶解动物蛋白(enzymatic hydrolyzed animal protein,EAP)的抗疲劳功能进行初步研究。方法小鼠负重游泳实验和力竭游泳运动实验,检测小鼠负重游泳时间,力竭运动后肝糖原和血清尿素氮的含量。结果3种剂量的EAP均能不同程度地延长小鼠负重游泳时间,有效降低力竭运动后小鼠肝糖元的消耗和血清尿素氮含量。结论EAP具有明显的抗疲劳功能。

马鹿角蛋白酶解物的抗氧化、抗疲劳和免疫活性

目的:以复合蛋白酶与风味蛋白酶双酶解的马鹿角蛋白酶解物和马鹿角蛋白作为受试样品,研究样品的抗氧化、抗疲劳和免疫调节功能。方法:采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸比色法和总还原力测定法,研究酶解物体外抗氧化的功能;通过测定酶解物灌胃小鼠的血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,分析其体内抗氧化功能;通过小鼠负重游泳、血乳酸、肝糖原测定研究酶解物的抗疲劳功能;通过ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验及小鼠碳廓清实验研究酶解物对小鼠免疫功能的影响。结果:马鹿角蛋白酶解物对羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-.)均有清除能力,且高于同等质量浓度的马鹿角蛋白,总还原力与马鹿角蛋白相比也有提高;可提高小鼠血清SOD活性,降低其血清MDA含量,并明显延长小鼠负重游泳时间、降低血乳酸值和增加肝糖原含量;可显著增强小鼠的免疫功能。结论:马鹿角蛋白酶解物具有抗氧化、抗疲劳和提高免疫功能的作用,活性明显优于马鹿角蛋白。

壳寡糖抑制肿瘤作用的实验研究

目的:通过建立H22肝癌荷瘤鼠作为实验动物模型,研究壳寡糖对肿瘤抑制作用的影响。方法:选择小鼠体内注射的方法,将不同浓度壳寡糖注入荷瘤小鼠体内,观察肿瘤生长情况,对其进行免疫功能的测定;同时通过MTT比色法观察壳寡糖对LH-7人肺癌细胞的体外生长抑制作用。结果:壳寡糖对肿瘤的生长有抑制作用;壳寡糖可提高荷瘤小鼠血清的IL-2和IFN-γ含量,增加荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺重量;显微镜观察肿瘤组织出现坏死;壳寡糖对LH-7细胞生长有抑制作用,抑瘤率与浓度有关,与时间无关;透射电镜显示细胞有凋亡趋势。结论:壳寡糖可抑制肿瘤生长,提高机体免疫功能;同时壳寡糖可能诱导LH-7肿瘤细胞凋亡。

蚯蚓中平喘蛋白组分的提取分离及其作用机制的初探

目的初步研究蚯蚓平喘蛋白组分(Eisenia foetidaprotein,EP2)及其平喘活性。方法以新鲜赤子爱胜蚓为原料,通过蛋白质的硫酸铵沉淀和离子交换色谱法,分离得到一组平喘活性蛋白成分(EP2)。采用经典的肺阻力(RL)和动态肺顺应性(Cdyn)指标评价EP2对致敏豚鼠抗原攻击前后的肺功能变化;采用体外试验观察EP2拮抗白三烯D4引起豚鼠离体气管平滑肌的收缩反应;同时应用双向凝胶电泳-质谱技术对蛋白组分EP2进行了初步分析鉴定。结果在整体试验中,EP216.8mg.kg-1口含吞服预处理能明显抑制致敏豚鼠抗原攻击后引起的RL增加和Cdyn下降,作用稍弱于阳性对照药孟鲁司特;在离体试验中,EP2能明显拮抗白三烯D4收缩气管平滑肌的作用,作用强度与孟鲁司特接近;双向凝胶电泳-质谱技术分析证明蛋白组分EP2中含有蚯蚓种属中的蛋白F-I-0、F-I-1以及纤溶酶组分A,均为丝氨酸蛋白酶类胰蛋白酶家族成员。结论EP2具有平喘作用,作用靶点可能通过拮抗白三烯受体,提示EP2的有效成分可能是白三烯拮抗剂。

10批市售僵蚕商品药材质量评价

目的:采用多指标评价市售僵蚕药材质量状况,为临床合理用药提供参考。方法:按照2015年版《中国药典》(一部)对市售10批僵蚕药材外观性状进行观察,对水分、总灰分含量进行测定,采用傅里叶变换红外光谱法对药材进行鉴别,采用紫外-可见分光光度法和高锰酸钾滴定法分别测定有效成分蛋白质和草酸铵的含量。结果:10批僵蚕的水分含量在2.84%~4.07%之间(RSD<5%,n=3),总灰分含量在7.79%~34.32%之间(RSD<5%,n=3);紫外和红外光谱图基本相似,均能反映出蛋白质多肽类物质的特征峰;蛋白质含量在29.87%~57.19%之间(RSD<0.5%,n=3),草酸铵含量在0.27%~4.77%之间(RSD<5%,n=3)。结论:10批市售僵蚕均为正品且为炮制品;水分含量符合2015年版《中国药典》(一部)规定,但总灰分含量未达其要求;其主要成分为蛋白质多肽类物质,但有效组分蛋白质多肽与草酸铵含量差异较大。

泥蚶提取物-海生素抗肿瘤作用的实验研究

目的:探讨泥蚶提取物 海生素对体外培养的人肺癌、乳癌、胃癌细胞增殖的影响和对小鼠移植性肿 瘤预防治疗的作用。方法:采用MTT法检测海生素(0.5%～2%)对体外培养的人肿瘤细胞增殖的抑制作 用;体内实验则首先尾静脉给予小鼠147,210,300mg·kg-1·d-1的海生素,共3d。然后用小鼠实体瘤S180、 肝癌实体瘤(Heps)和艾氏腹水瘤(EAC)株接种小鼠,接种后继续给药10d,计算抑瘤率和荷瘤小鼠生命延长 率。结果:海生素在0.5%～2%的剂量范围内,对体外培养的3种肿瘤细胞均有抑制作用。其中对肺癌细胞 最明显,且存在量效关系(r=0.974,P<0.01)。体内实验结果显示灌胃给药海生素147～300mg·kg-1剂 量范围内,对接种的S180和肝癌实体瘤(Heps)的抑瘤率分别达到19.34%～65.19%和32.23%～79.53%,对 艾氏腹水瘤(EAC)小鼠的生命延长率为40.54%～57.66%。结论:海生素对体外培养的人肺癌、乳癌和胃癌 肿瘤细胞和对接种的小鼠肿瘤具有明显的抑制作用,且毒副作用小,有可能开发成为一种海洋抗肿瘤药物。