FNDC5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染THP-1细胞系

目的:构建过表达Ⅲ型纤连蛋白结构域包含蛋白5(fibronectin typeⅢdomain-containing protein 5,FNDC5)基因的慢病毒载体,获得稳定转染FNDC5的THP-1细胞系。方法:PCR扩增目的基因FNDC5,将目的基因构建入pLenti-EF1a-EGFPP2A-Puro慢病毒载体中,在DH5α感受态细胞中进行扩增,测序及鉴定合格后利用四质粒包装系统转染293T细胞,包装成过表达慢病毒颗粒并测定病毒滴度。Western blot检测重组慢病毒中FNDC5的表达情况后,将获得的重组慢病毒转染THP-1细胞系,荧光显微镜观察并计算其转染效率。经嘌呤霉素筛选建立FNDC5过表达的稳转细胞系后,将细胞分为3组,分别为空白组、空载组和FNDC5组,用Western blot及RT-PCR检测其FNDC5的表达情况。通过油红O染色后观察FNDC5过表达对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞脂质蓄积的影响。结果:PCR产物鉴定及测序结果显示成功构建FNDC5过表达慢病毒载体;转染293T细胞后可检测到绿色荧光,Western blot检测FNDC5-Flag标签有表达,包装后病毒的滴度为1.32×10^9 TU/mL;Western blot及RT-PCR检测重组慢病毒转染THP-1细胞系,与空载组对比,FNDC5组中FNDC5蛋白表达明显增加[(238.0±24.9)%],有统计学意义(P=0.000);与空载组对比,FNDC5组中FNDC5 mRNA表达水平明显增加[(228.5±3.4)%],有统计学意义(P=0.000)。FNDC5过表达转染THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中的脂质蓄积减少。结论:本实验成功构建了FNDC5基因的过表达慢病毒载体,通过FNDC5过表达慢病毒感染建立了FNDC5稳转的THP-1细胞系,证明FNDC5可明显减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞的脂质蓄积,为后续研究奠定基础。

固定化Streptomyces sp.108转化美伐他汀为普伐他汀的研究

报道了链霉菌(Streptomycessp.108)固定化细胞制备的最适条件。初始底物(美伐他汀)浓度300mg/L,间接补加底物总浓度达到800mg/L时,普伐他汀产量为495mg/L,转化率为60%。在底物浓度为300mg/L时重复发酵3次,500mg/L时重复发酵2次,转化率分别达50.5%和53%。

瑞舒伐他汀抗动脉粥样硬化的临床应用价值与药理作用研究

目的:研究探讨抗动脉粥样硬化中瑞舒伐他汀的使用效果,并分析其药理作用。方法:选取2018年3月至2019年3月期间接治的80例动脉粥样硬化患者,采用随机数字表法分组,其中对照组40例,采用阿司匹林单一药物治疗,剩余40例作为研究组,采用瑞舒伐他汀进行治疗,规范治疗之后,对比两组患者的治疗有效率、血脂以及凝血功能。结果:研究组的治疗有效率要高于对照组,研究组患者的内中膜度、总胆固醇、甘油三酯以及低密度脂蛋白胆固醇指标要优于对照组,活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、血小板(PLT)相关参数比对照组明显较优,两组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:针对动脉粥样硬化患者采用瑞舒伐他汀进行治疗之后,可以观察到患者各项指标明显改善,对比常规阿司匹林药物治疗有效率更高,临床效果更好。

低剂量非维生素K拮抗剂口服抗凝药预防非瓣膜性心房颤动患者卒中的疗效

目的比较低剂量达比加群酯、利伐沙班和艾多沙班预防非瓣膜性心房颤动(NVAF)患者卒中的疗效。方法回顾性分析2021年3月至2022年11月于武汉大学人民医院心血管内科住院的NVAF患者,根据纳入对象所选用的非维生素K拮抗剂口服抗凝药(NOAC)分为达比加群酯组、利伐沙班组和艾多沙班组。比较3组患者的一般资料、栓塞事件和出血事件发生率。结果共入选360例,每组120例,平均随访11.1个月。三组一般资料无差异。达比加群酯组和利伐沙班组各发生6例有效性终点,艾多沙班组发生4例有效性终点,3组药物的有效性无明显差异(P>0.05)。达比加群酯组发生16例安全性终点,其中消化道出血6例,利伐沙班组发生20例安全性终点,其中消化道出血10例,艾多沙班组发生17例安全性终点,其中消化道出血3例。三组药物的总出血发生率无显著性差异(P>0.05),但利伐沙班组消化道出血发生率明显高于艾多沙班组[8.3%(10/120)vs 2.5%(3/120),P<0.05]。结论低剂量NOAC预防NVAF患者卒中的有效性无明显差异,尽管其总出血风险相当,但艾多沙班相较于利伐沙班的消化道出血风险更低。