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籽鹅卵泡颗粒细胞烯醇化酶过表达模型的建立及其对孕酮分泌的影响
被引量:
4
1
作者
张伟宏
计红
+2 位作者
王江璐
赫荣贺
杨焕民
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2014年第1期85-88,共4页
目的:建立α-烯醇化酶(ENO1)腺病毒过表达载体转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞模型,探讨ENO1过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。方法:采用ENO1腺病毒过表达载体以梯度感染复数值(MOI)100、250、350、400pfu/cell转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细...
目的:建立α-烯醇化酶(ENO1)腺病毒过表达载体转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞模型,探讨ENO1过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。方法:采用ENO1腺病毒过表达载体以梯度感染复数值(MOI)100、250、350、400pfu/cell转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞,于转染后24 h、48 h,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)研究ENO1过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果:最佳转染条件是,当MOI为350 pfu/cell,转染48 h后,转染率达100%;通过荧光定量PCR与Western blot法,检测到ENO1 mRNA与蛋白均过表达(P<0.01);与培养液组和腺病毒空载体组相比较,ENO1过表达使颗粒细胞孕酮分泌量极显著增加(P<0.01)。结论:ENO1过表达会使体外原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞孕酮分泌量增加。
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关键词
ENO1
过表达
孕酮
颗粒细胞
下载PDF
职称材料
ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达
被引量:
1
2
作者
戴安娜
胡佳慧
+3 位作者
屈玉杏
刘婉洋
许显玉
陈风雷
《安徽农业科学》
CAS
2019年第2期89-93,共5页
[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产...
[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×10~6~10×10~6 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。
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关键词
慢病毒
ERO1α
过表达
RAW264.7细胞
下载PDF
职称材料
题名
籽鹅卵泡颗粒细胞烯醇化酶过表达模型的建立及其对孕酮分泌的影响
被引量:
4
1
作者
张伟宏
计红
王江璐
赫荣贺
杨焕民
机构
黑龙江八一农垦大学动物科技学院
出处
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2014年第1期85-88,共4页
基金
黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD20116)
文摘
目的:建立α-烯醇化酶(ENO1)腺病毒过表达载体转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞模型,探讨ENO1过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。方法:采用ENO1腺病毒过表达载体以梯度感染复数值(MOI)100、250、350、400pfu/cell转染原代培养籽鹅卵泡颗粒细胞,于转染后24 h、48 h,荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达。双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)研究ENO1过表达对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果:最佳转染条件是,当MOI为350 pfu/cell,转染48 h后,转染率达100%;通过荧光定量PCR与Western blot法,检测到ENO1 mRNA与蛋白均过表达(P<0.01);与培养液组和腺病毒空载体组相比较,ENO1过表达使颗粒细胞孕酮分泌量极显著增加(P<0.01)。结论:ENO1过表达会使体外原代培养的籽鹅卵泡颗粒细胞孕酮分泌量增加。
关键词
ENO1
过表达
孕酮
颗粒细胞
Keywords
ENO1
overexpression
progesterone
granulosa cells
分类号
S-852 [农业科学]
下载PDF
职称材料
题名
ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达
被引量:
1
2
作者
戴安娜
胡佳慧
屈玉杏
刘婉洋
许显玉
陈风雷
机构
扬州大学兽医学院
江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《安徽农业科学》
CAS
2019年第2期89-93,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31702298)
中国博士后科学基金项目(2017M621843)
+3 种基金
江苏省自然科学基金项目(BK20170498)
江苏省高校自然科学研究计划资助项目(17KJD230002)
江苏高校优势学科建设工程资助项目
扬州大学大学生科创基金项目(x20180623)
文摘
[目的]构建小鼠ERO1α基因慢病毒过表达载体,并筛选其在RAW264.7细胞中稳定表达。[方法]利用PCR方法扩增ERO1α基因的CDS区并测序;将目的片段亚克隆到慢病毒过表达载体pCD513B-1上,构建pCD513B-ERO1α慢病毒过表达载体;通过病毒包装产生慢病毒并转导RAW264.7细胞;转导后的细胞进行嘌呤霉素抗性筛选,获得稳定表达的细胞;利用RT-qPCR和Western blot方法检测ERO1α的表达效果。[结果]ERO1α慢病毒过表达载体构建成功,病毒滴度为5×10~6~10×10~6 TU/mL;慢病毒成功转导RAW264.7细胞并且稳定高表达。[结论]成功构建ERO1α慢病毒过表达载体,并在RAW264.7细胞中稳定高表达,为进一步研究ERO1α在免疫系统中的功能提供了技术支持。
关键词
慢病毒
ERO1α
过表达
RAW264.7细胞
Keywords
Lentivirus
ERO1α
Overexpression
RAW264.7 macrophage
分类号
S-852 [农业科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
籽鹅卵泡颗粒细胞烯醇化酶过表达模型的建立及其对孕酮分泌的影响
张伟宏
计红
王江璐
赫荣贺
杨焕民
《中国应用生理学杂志》
CAS
CSCD
2014
4
下载PDF
职称材料
2
ERO1α慢病毒过表达载体的构建及其在RAW264.7细胞中稳定表达
戴安娜
胡佳慧
屈玉杏
刘婉洋
许显玉
陈风雷
《安徽农业科学》
CAS
2019
1
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职称材料
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