西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫cox1和nad1的多态性

目的分析西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫cox1、nad1的基因多态性。方法采集西藏中部地区45份散养牦牛和绵羊细粒棘球蚴包囊,提取包囊生发层DNA,根据细粒棘球蚴线粒体cox1、nad1基因序列设计扩增的引物序列,用PCR技术扩增线粒体cox1、nad1基因片段,将扩增产物做琼脂糖凝胶电泳并测序;利用MEGA11.0软件做cox1、nad1序列特征与同源性比对,并构建系统进化树;运用DnaSP 5.0软件计算序列单倍型数量(H),分析核苷酸多样性(Pi)、单倍体型多样性(Hd)特性;利用Network软件为cox1、nad1基因的所有单倍体构建单倍体网络图,判断西藏中部地区散养牦牛和绵羊的主要单倍型。结果(1)cox1、nad1序列长度分别为925、839bp。(2)在cox1序列中,A、T、G、C碱基的平均含量分别为32.6%、33.1%、17.4%、16.9%;而nad1序列中,A、T、G、C碱基的平均含量为19.5%、47.6%、25.5%、7.4%;同源性分析结果显示,cox1序列之间的同源性为99.6%~100.0%,nad1序列之间的同源性为98.1%~100.0%;西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫基因型为G1、G3、G6。(3)cox1、nad1单倍型个数分别为19个、7个,Hd、Pi分别为0.89600、0.56000和0.36500、0.00060。(4)单倍型网络图显示,Hc-2、Hc-12、Hn-1为西藏中部地区散养牦牛和绵羊的主要单倍型。结论西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫基因型为G1、G3、G6,G1是主要基因型。上述结论为探明西藏中部地区细粒棘球蚴的分型和病原体遗传演化的情况提供了参考依据。

虫子鸡蛋价值及市场分析

本文主要对虫子鸡蛋的营养价值、市场价值及社会价值进行了分析,并探讨虫子鸡蛋的市场化可能存在的问题,以期为高价值功能性鸡蛋的开发提供一定参考。

肝片吸虫GST真核表达载体构建及重组蛋白活性分析

目的构建肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)的真核表达载体,研究重组蛋白的免疫原性。方法以构建好的重组质粒pET30a-FhGST为模板,利用PCR技术扩增肝片吸虫谷胱甘肽S-转移酶基因(GST),连接真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-GST,转染Hela细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光,Western blotting检测重组蛋白表达情况。结果重组质粒pEGFP-GST在Hela细胞中获得了表达,Western blotting结果表明真核表达质粒表达的重组蛋白能与自然感染肝片吸虫的山羊阳性血清发生特异性反应。结论肝片吸虫GST真核表达载体构建成功,真核表达产物可与自然感染的山羊阳性血清发生特异性反应,具有生物学活性,可做为分子疫苗的候选进行进一步的研究。

氨肽酶基因anp-1在秀丽隐杆线虫生长发育中的生物学功能

本试验构建重组RNA干扰载体,通过饲喂法沉默秀丽隐杆线虫(C.elegans)氨肽酶基因anp-1,观察C.elegans表型变化,分析anp-1基因在C.elegans生长发育中的生物学功能。RNA干扰anp-1基因导致C.elegans N2株L4期幼虫体长明显短于对照组(P<0.001),寿命显著缩短(P<0.001)。荧光定量PCR试验结果表明,饲喂RNAi菌株,anp-1基因mRNA的相对表达量减少了约85%(P<0.001)。同时,干扰anp-1基因表达导致C.elegans daf-16、ins-7、age-1和unc-62等寿命相关基因mRNA表达发生显著变化(P<0.05)。表明氨肽酶基因anp-1在C.elegans发育和寿命调节中发挥重要作用,拓展了对氨肽酶在线虫生长发育中生物学功能的理解和认识。

旋毛虫重组二肽基肽酶1在体外对大鼠外周血单个核细胞增殖、吞噬、凋亡等的影响

本文旨在分析旋毛虫二肽基肽酶1(dipeptidyl-peptidase 1,Dpp1)在体外对大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)增殖、迁移、凋亡以及一氧化氮(NO)分泌和吞噬功能的影响。根据GenBank中旋毛虫Dpp1基因序列设计一对特异性引物,RT-PCR获得该基因,将其亚克隆到pET-32a原核表达载体,IPTG诱导后获得重组蛋白rDpp1。将大鼠PBMCs与rDpp1共孵育,用间接免疫荧光试验(IFA)分析rDpp1与大鼠PBMCs的结合情况,分析不同质量浓度(10、20、40μg·mL^-1)的rDpp1对细胞增殖、迁移、NO分泌、吞噬功能和细胞凋亡的影响。结果表明,40μg·mL^-1rDpp1极显著促进PBMCs增殖;10μg·mL^-1rDpp1能显著促进PBMCs迁移,而20及40μg·mL^-1时表现极显著的促进;20与40μg·mL^-1rDpp1极显著促进PBMCs分泌NO;10μg·mL^-1rDpp1能显著促进PBMCs的吞噬功能,而20及40μg·mL^-1时表现极显著的促进;各质量浓度蛋白均极显著地促进PBMCs的凋亡。旋毛虫二肽基肽酶1在体外能通过多种途径影响大鼠外周血单个核细胞,对调节宿主免疫应答有一定的促进作用。

日本血吸虫尾蚴发育的超微结构观察:Ⅲ.肌肉

在超微结构水平对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)发育期尾蚴的主要肌肉包括体壁、头器、腹吸盘和尾部等进行观察,首次证明发育期体壁肌层组织最早见于S2,在原始基膜(PBL)下方有1～2层类似纤丝胞质块,为早期肌细胞管状胞质延伸至原始基膜下的结构,S3这种现象更为明显;典型体壁外环肌与内纵肌在S4与S5已形成。腹吸盘早期原始肌细胞的分化见于S3,至S5强大的腹吸盘肌纤维已形成。文章首次提出内间质层在S3、S4的体部存在及S5与头器形成的关系,阐明其多层次肌原纤维的生理意义;对S5尾于肌原纤维分组、它们之间的走向、尾叉结构的特点等与尾蚴游动及钻穿宿主皮肤机制的理解提供形态学基础。