苇状羊茅与多年生黑麦草内生真菌菌丝基因组DNA提取的优化及PCR初步检测

感染内生真菌的禾草在牧草和草坪业上具有重要的生态和经济意义，家畜采食感染Neotyphodium coenophialum和N．lolii的苇状羊茅Festuca arundinacea和多年生黑麦草Lolium perenne会发生中毒。研究收集天津口岸1998年以来进境的部分苇状羊茅和多年生黑麦草种子，对经镜检确认带有内生真菌的种子进行分离培养，对疑似菌株的茵丝用改进的Moiler等方法进行基因组DNA抽提，测定浓度及纯度，对照原方法，DNA的纯度有较大提高，浓度略有上升。Tubulin2基因的引物IS1～IS3扩增结果显示为单一的条带，结合形态学和序列比对，分离培养得到的茵株可以基本确定为N．coenophialum和N．lolii。根据Genbank中N．coenophialum和N．lolii的NC25基因序列设计出引物F1～R1，扩增得到能区分开N．coenophialum和N．lolii的单一条带（相差160bp），建立了N．coenophialum和N．lolii的PCR检测方法，结果准确可靠。