Overexpression of auxin/indole-3-acetic acid gene MdIAA24 enhances Glomerella leaf spot resistance in apple(Malus domestica)

Auxin is throughout the entire life process of plants and is involved in the crosstalk with other hormones,yet its role in apple disease resistance remains unclear.In this study,we investigated the function of auxin/indole-3-acetic acid(IAA)gene Md IAA24 overexpression in enhancing apple resistance to Glomerella leaf spot(GLS)caused by Colletotrichum fructicola(Cf).Analysis revealed that,upon Cf infection,35S::Md IAA24 plants exhibited enhanced superoxide dismutase(SOD)and peroxidase(POD)activity,as well as a greater amount of glutathione(reduced form)and ascorbic acid accumulation,resulting in less H_(2)O_(2)and superoxide anion(O_(2)^(-))in apple leaves.Furthermore,35S::Md IAA24 plants produced more protocatechuic acid,proanthocyanidins B1,proanthocyanidins B2 and chlorogenic acid when infected with Cf.Following Cf infection,35S::Md IAA24 plants presented lower levels of IAA and jasmonic acid(JA),but higher levels of salicylic acid(SA),along with the expression of related genes.The overexpression of Md IAA24 was observed to enhance the activity of chitinase andβ-1,3-glucanase in Cfinfected leaves.The results indicated the ability of Md IAA24 to regulate the crosstalk between IAA,JA and SA,and to improve reactive oxygen species(ROS)scavenging and defense-related enzymes activity.This jointly contributed to GLS resistance in apple.

9种杀菌剂对苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌的抑制效果

为明确能有效防控苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌的杀菌剂,本文从田间发病叶片中分离得到了苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌,借助形态学观察和分子生物学手段进行了鉴定,测试了9种常见杀菌剂对苹果炭疽病菌和黄瓜灰霉病菌的抑制效果,同时选取初筛抑制率高的杀菌剂进一步测试了EC50值。结果表明,抑制复合体Ⅲ细胞色素bc1氧化酶的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂吡唑醚菌酯可有效防治苹果炭疽病菌,抑制甾醇生物合成脱甲基化酶的三唑类杀菌剂戊唑醇可有效防治黄瓜灰霉病菌。

生物源杀菌剂及其与戊唑醇复配对苹果主要炭疽菌的室内活性评价分析

苹果免套袋生产已经成为苹果产业转型升级的必然趋势,然而去袋后,主要由胶孢刺盘孢和尖孢刺盘孢侵染引起的苹果炭疽病会引发烂果、落果,严重影响苹果产量和品质,且面临果面农药残留的问题。为此,筛选可用于防控上述病害的生物源杀菌剂至关重要。采用菌丝生长速率法首先测定了8种生物源杀菌剂对2种病菌菌丝生长的抑制效果,结果表明,50亿cfu/g多粘类芽孢杆菌、100亿cfu/g枯草芽孢杆菌、300亿cfu/g解淀粉芽孢杆菌对2种病菌菌丝生长的抑制效果较好,对胶孢刺盘孢的EC_(50)值分别为1.489×10^(-5)、5.911×10^(-1)、1.717×10^(-5)μg/mL,对尖孢刺盘孢的EC_(50)值分别为2.810×10^(-4)、1.302×10^(-1)、1.110×10^(-2)μg/mL。进而分析了上述药剂与常用化学药剂43%戊唑醇的最佳复配比,结果表明,100亿cfu/g枯草芽孢杆菌与43%戊唑醇按1∶1比例复配时,对胶孢刺盘孢的抑制效果最好,增效比为1.093×10;300亿cfu/g解淀粉芽孢杆菌与43%戊唑醇按1∶1比例复配时,对尖孢刺盘孢的抑制效果最好,增效比为1.542×10^(2)。综上,推荐选用50亿cfu/g多粘类芽孢杆菌、100亿cfu/g枯草芽孢杆菌和300亿cfu/g解淀粉芽孢杆菌作为防治苹果炭疽病的生物源杀菌剂,1∶1配比的100亿cfu/g枯草芽孢杆菌与43%戊唑醇以及1∶1配比的300亿cfu/g解淀粉芽孢杆菌与43%戊唑醇对病害防控具有明显的增效作用。该研究对化学农药减施和病害绿色防控提供了重要依据。

苹果炭疽病菌对苹果果实致病机制初探

对活体内外苹果炭疽菌产生的细胞壁降解酶进行活性分析,初步明确了聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)和羧甲基纤维素酶(Cx)在该菌侵染苹果过程中的作用。结果表明,活体外PMG活性随培养时间增加呈上升趋势,Cx活性则先升后降。活体内,无论抗感品种接种后,均先出现PMG活性高峰,后出现Cx活性高峰;抗病品种的细胞壁降解酶活性要低于中感和感病品种,但酶活高峰出现较早。此外,未接种的健康苹果果实中也检测到细胞壁降解酶,但活性较低。

苹果炭疽叶枯病菌GcAP1复合体β亚基基因的克隆及功能分析

【目的】明确衔接蛋白(adaptor protein)GcAP1复合体β亚基在苹果炭疽叶枯病菌(Glomerella cingulata)生长发育和致病过程中的功能,检测GcAP1β在该菌中的时空表达模式,并揭示其是否调控多聚半乳糖醛酸内切酶(endopolygalacturonase)基因CgPG1和CgPG2、果胶裂解酶(pectin lyase)基因pnl-1和pnl-2以及果胶酸酯裂解酶(pectate lyase)基因pelA和pelB的表达,为深入开展苹果炭疽叶枯病菌衔接蛋白在致病信号传导途径中的分子机制研究打下基础。【方法】通过构建GcAP1β基因敲除载体和GcAP1β-gfp融合表达载体,利用农杆菌介导的遗传转化技术(ATMT)获得Δgcap1β突变体和GcAP1β恢复菌株Δgcap1β-GcAP1β,并由RT-PCR和Southern杂交分析进行鉴定。以野生型菌株W16为对照,对Δgcap1β突变体和GcAP1β恢复菌株Δgcap1β-GcAP1β的生长速度、产孢能力、分生孢子萌发率及附着胞形成率和致病性进行测定。利用生物信息学软件Prot Comp 9.0和TMHMM对GcAP1β蛋白进行结构分析,并结合GcAP1β-GFP信号观测,进行GcAP1β的亚细胞定位。利用qRT-PCR技术,检测GcAP1β在菌丝、分生孢子、芽管、附着胞和侵染阶段的表达量,并检测CgPG1、CgPG2、pnl-1、pnl-2、pelA和pelB在野生型菌株和Δgcap1β突变体中的表达量。【结果】GcAP1β基因全长2 321bp,含有3个内含子,编码720个氨基酸。与野生型菌株W16相比,Δgcap1β突变体菌落成褶皱状,菌丝生长速度明显减慢,而分生孢子产量、分生孢子萌发率、附着胞形成率无显著差异。Δgcap1β致病力明显降低,仅在苹果叶片上引起极小的点状斑。GcAP1β基因恢复菌株Δgcap1β-GcAP1β完全修复了因GcAP1β基因缺失造成的表型缺陷。荧光检测显示,融合蛋白GcAP1β-GFP分布于细胞质中。qRT-PCR检测结果表明,GcAP1β在苹果炭疽叶枯病菌各个发育阶段都有表达,且在侵染后表达量相对最高。GcAP1β的缺失导致CgPG1表达量降低至20.3%,CgPG2表达量降低至16.5%,pnl-1表达量降低至8.2%,pnl-2表达量降低至14.4%,pelA表达量降低至4.4%,pelB表达量降至0.8%。【结论】衔接蛋白GcAP1复合体分布于细胞质中,是苹果炭疽叶枯病菌生长发育所需要的;GcAP1调控CgPG1、CgPG2、pnl-1、pnl-2、pelA和pelB的表达,是苹果炭疽叶枯病菌一个重要的毒力因子。

枯草芽孢杆菌和丙环唑对采后苹果炭疽病的防治效果

研究了离子束诱变的枯草芽孢杆菌B-24和丙环唑等对苹果采后炭疽病的防治效果及其几种防御酶活性的影响。结果表明:丙环唑对苹果炭疽病菌丝有明显的抑制效果,抑制浓度EC50为0.067μg/mL。代森锰锌的抑制作用最弱,其EC50为1806.984μg/mL。不同化学药剂和不同浓度的药剂之间,对苹果炭疽病的保护防效有显著差异。丙环唑对苹果炭疽病的防效最好,对寄主酶活的诱导作用也最强,能诱导苹果果实POD和PPO活性显著升高。代森锰锌防效差,POD活性和对照接近。同一药剂,浓度高的防效好,果实中酶活性也高。枯草芽孢杆菌在离体条件下活菌液对苹果炭疽病菌的抑制效果最好,抑制率为100%,表现出明显的拮抗作用。活体试验表明枯草芽孢杆菌能明显减轻苹果果实炭疽病的发生,接种枯草芽孢杆菌能诱导苹果果实POD和PPO活性的升高。

红富士苹果果实炭疽病病菌的分离与鉴定

采集具有炭疽病症状的红富士果实样品进行组织分离、培养,获得苹果炭疽病菌株(编号为Acg1),采用形态学、分子生物学相结合的方法对其进行鉴定。根据分离菌株的菌落、分生孢子形态特征、r DNA-ITS序列分析将分离到的Acg1菌株鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。

杜仲内生真菌中抗苹果炭疽病活性菌株的筛选

对杜仲植株中的内生真菌进行分离纯化,共得到32株内生菌株。通过离体平板对峙培养检测、光学显微镜观察,以及测定在活体果实上的拮抗活性,研究杜仲拮抗真菌与病原菌及其寄主植物苹果果实之间的相互作用。对峙培养显示杜仲内生真菌DZGS07对苹果炭疽菌有较强拮抗作用,具有较强的营养和空间竞争能力,显微观察表明其能造成病原菌菌丝畸形等现象。在生防研究中,内生真菌DZGS07对苹果炭疽病具有较好的生防潜力,处理后的第7天防效达84.19%;对该菌株的ITS序列进行测定分析,初步鉴定DZGS07为炭疽菌属(Colletotrichum)的真菌。

苹果炭疽病致病机理研究

通过对苹果炭疽病菌(Colletot tichumgloeosporioides)产生的细胞壁降解酶的活性分析,明确了在苹果炭疽病菌的致病过程中,纤维素酶、果胶酶和漆酶是主要的致病因素。各类酶的动态变化显示,首先起作用的是果胶酶,纤维素酶和漆酶,参与了病害的扩展;病健处各类酶的活性变化结果表明:各类酶在病健处的酶活最大,是引起病斑扩展的主要因素。苹果病果中漆酶的存在,说明在苹果组织中含有的芳香族化合物、芳香酸衍生物及抗坏血酸等底物能够诱导炭疽病菌产生漆酶、漆酶对这些物质的氧化加速了苹果组织的腐败。

苹果炭疽叶枯病的田间防控试验

对凯润等药剂防治苹果炭疽叶枯病的效果进行研究。结果表明,在金帅、嘎啦两个品种的炭疽叶枯病防治中,25%凯润乳油2 000倍+70%丙森锌可湿性粉剂700倍、25%凯润乳油2 000倍+43%戊唑醇悬浮剂3 000倍两个组合效果最好,且显著优于其他药剂组合。25%凯润乳油是防治苹果炭疽叶枯病的适合推广应用杀菌剂,在发病严重的果园,6月、7月尤其连续降雨前后要及时喷施该药剂。

卡松对苹果果实炭疽病的控制效应及作用方式研究

在实验室人工接种条件下,研究了新型杀菌剂卡松对苹果炭疽病的控制效应、作用方式及施药技术。结果表明,1.5%卡松水剂对苹果果实炭疽病有很好的防治效果,作用方式以保护作用为主,并具有一定的治疗作用;施药方式以药液浸果为优。结果还表明,苹果果实炭疽病的人工接种以针刺法效果较好。

炭疽病菌侵染对枇杷果实病程相关酶活性的影响

对采后枇杷果实接种炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides),研究测定一些与病程相关酶活性的变化。结果表明:接种炭疽病菌的枇杷果实过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性明显升高,均于接种后第2天达到一个活性高峰,而POD于第5天出现了第二个活性峰,并且这两种防御酶的峰值出现时间基本与明显病斑显症时期一致;真菌细胞壁降解酶β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性都于第3天出现一个活性高峰,β-1,3-葡聚糖酶活性增幅高于几丁质酶。

红富士苹果果实中炭疽病病菌的分离与鉴定（英文）

采集具有炭疽病症状的红富士果实样品进行组织分离、培养,获得苹果炭疽病菌株(编号为Acg1),采用形态学、分子生物学相结合的方法对其进行鉴定。根据分离菌株的菌落、分生孢子形态特征、rDNA-ITS序列分析将分离到的Acg1菌株鉴定为胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)。

苹果炭疽菌DNA改良提取法及PCR体系的优化

以苹果炭疽病胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为试材,采用改良的SDS法、改良的CTAB法和改良的尿素法等对基因组DNA进行了提取和比较,并对ITS1-5.8S-ITS2区基因PCR扩增体系中模板的添加量以及退火温度进行了调整和优化。结果表明:采用这3种方法均能提取得到目的 DNA,但采用改良的SDS法提取的基因组DNA产率最高、质量最好;当在25μL PCR体系中添加0.75μL粗提DNA 10倍稀释液以及退火温度设定为51℃时PCR产物的质量最高。

甘肃省苹果炭疽病病原鉴定及ITS序列分析

果实炭疽病是苹果生产中常见的重要病害之一。通过形态特征结合病原菌的内部转录间隔区(internal transcribed spacer sequence,简称ITS)区域比对分析,确定引起甘肃苹果果实炭疽病的病原为胶孢刺盘孢(Colletotrichum gloeosporioides)。

苹果炭疽病的诊断与防治实用技术

苹果炭疽病又称苦腐病、晚腐病,在我国各苹果产区普遍发生,危害严重。该病除为害苹果外,还可侵染海棠、梨、葡萄、桃、核桃、山楂、柿、枣、栗、柑橘、荔枝、芒果等多种果树以及刺槐等树木。1田间症状苹果炭疽病主要为害苹果树果实,也可侵染枝条、果台及衰弱枝等。果实受害,多从近成熟期开始发病,果实发病初期,果面可见针头大小的淡褐色小斑点.

苹果种质及杂种对炭疽菌叶枯病的田间抗性分析

炭疽菌叶枯病(GLS)是近年来在我国各地呈暴发趋势的一种苹果病害。为了发掘及选育抗性资源,以40份苹果品种(系)和5个杂交分离群体的8 000余株杂种树为试材,2016~2017年连续2 a进行了GLS田间抗性鉴定。结果表明:不同苹果种质及杂种对GLS的田间抗性差异明显,其中抗性资源22份;GLS抗性基因可能由隐性单基因控制;以抗性亲本富士、新红星构建杂种分离群体,有利于抗性优系的选择。我国苹果GLS抗性种质资源较为丰富。

北京地区苹果炭疽病的发生与防治

炭疽病是苹果果实重要病害，我国苹果产区都有发生，曾经造成严重损失。在北京地区，此病曾在‘国光“大国光“倭锦’等品种上严重发生。田间在7月上旬可见少量病果，果实进入成熟期后及贮藏期大量发病，给果农造成较大损失。近年来，因品种改变、果实套袋、用药改进，苹果炭疽病发生面积相对稳定。一般年份病果率在10％左右，但必须重视其潜在威胁。

大蒜鳞茎粗提物对苹果炭蛆病抑菌作用及贮藏品质的影响

以新鲜大蒜鳞茎为原料,采用水匀浆法制备粗提物,通过室内抑菌试验及喷涂处理后测定其对苹果炭蛆病菌的抑菌作用及对苹果贮藏品质的影响。结果表明,大蒜鳞茎粗提物对苹果炭蛆病菌丝生长和孢子萌发均有显著抑制作用,抑制孢子萌发和菌丝生长的最低有效质量浓度为0.781 mg/m L,当质量浓度达到12.500 mg/m L时,其对孢子萌发和菌丝生长的抑制率分别达到98.48%和87.06%。另外,用大蒜鳞茎粗提物对苹果喷涂处理,可以有效减缓苹果硬度、总酸度及VC含量的下降幅度,能够更好地保持其贮藏品质。

苹果炭疽叶枯病菌致病力分析及苹果种质抗病性鉴定

苹果炭疽叶枯病是由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)引起的一种真菌病害,现已上升为世界苹果生产中的主要病害之一。了解不同来源的苹果炭疽叶枯病菌致病力差异及明确苹果种质资源对苹果炭疽叶枯病的抗性,对品种选育、品种合理布局以及控制病害的流行具有重要的参考价值。本研究对不同来源的79株病原菌进行了室内致病力测定,获知该菌致病力差异明显,其中强致病力菌株所占比例大。同时,本研究也对327份苹果种质资源进行了室内抗病性鉴定,其中高抗资源160份,中抗资源6份,中感资源22份,高感资源139份。表明我国现保存的苹果种质资源中存在丰富抗病种质。进一步按苹果分类系统分析发现,抗病资源在当前栽培的主要品种群中均有分布,特别是红玉品种群、富士品种群抗病资源最为丰富。