‘爱媛38’果腐病致病菌鉴定及其杀菌剂的筛选

对‘爱媛38’杂柑果腐病病果进行组织分离、纯化,得到果腐病致病菌株AY–11和GP–1,运用形态学和分子生物学(ITS、LSU、TUB和EF–α)方法对菌株进行鉴定,确定AY–11和GP–1分别为假可可毛色二孢(Lasiodiplodia pseudotheobromae)和可可毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae);将菌株回接到健康柑橘果实可致其发病,从发病组织再次分离得到L.pseudotheobromae和L.theobromae,确定AY–11和GP–1是主要致病菌。致病菌对‘意大利酸橙’‘摩洛哥酸橙’‘爱媛38’‘春见’‘枸头橙’均有较强致病性,在枝、叶、果上形成褐色水渍状圆形病斑,其中春见的病斑最大。运用菌丝生长速率法对21种药剂进行室内筛选,结果对AY–11菌丝抑制作用最强的为40%多菌灵可湿性粉剂,EC50值为0.025μg/mL;对GP–1菌丝抑制作用最强的为29%吡萘·嘧菌酯悬浮剂,EC50值为0.023μg/m L。田间药剂防控试验结果显示,45%咪鲜胺水乳剂1000倍液、75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂5000倍液、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂800倍液、25%吡唑醚菌酯乳油1000倍液处理的防效达100%,这些杀菌剂用于田间均能减少烂果率,有效防控‘爱媛38’果腐病。

柑桔溃疡病内生拮抗细菌Bc51的研究

从中国南宁柑桔叶片中分离到对柑桔溃疡病菌有拮抗作用的细菌菌株Bc51。根据16S rDNA序列同源性、形态学特征和生理生化反应,将该菌株鉴定为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。温度、pH值和培养基对洋葱伯克霍尔德氏菌抑制柑桔溃疡病菌生长的能力有显著影响。在温室测试中,观察到60.3%柑桔溃疡病斑的形成受到洋葱伯克霍尔德氏菌抑制。连续8次在人工培养基上转代培养,洋葱伯克霍尔德氏菌对柑桔溃疡病菌生长的抑制力没有发生明显改变。洋葱伯克霍尔德氏菌对植物病原菌有较宽的抑菌谱,表明除柑桔溃疡病外,该菌对其它作物病害的防治也具有潜在的应用价值。

基于高光谱成像技术的柑橘黄龙病病情诊断及分类

【目的】柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是一种无法根治且易扩散的病害,建立柑橘黄龙病病情诊断及分类的方法,以及时发现并去除病株,防止感染其他果树。【方法】基于高光谱成像技术,利用最小噪声分离变换进行降维去噪、像元纯净指数获取纯净像元并建立训练集,通过Fisher判别法对柑橘黄龙病病情进行鉴别并分类。【结果】通过对训练集设置适当的门限值,柑橘黄龙病病情识别正确率达90%以上。【结论】利用高光谱技术进行柑橘黄龙病病情诊断具有较高的可行性。

柑橘黄龙病检测方法研究进展

黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害,该病在北美、南美、西亚、东亚和南亚的一些国家和地区时有发生,造成巨大的经济损失,严重威胁着世界柑橘产业。柑橘黄龙病的传统检测方法有病害田间诊断、指示作物鉴定、病原显微镜观察、血清学、DNA-DNA杂交和PCR检测等方法。近年来,美国一些科学家把高光谱图像技术应用在柑橘黄龙病检测领域,提高了检测速度,降低了检测成本。综述了国内外关于柑橘黄龙病检测诊断方面的研究进展,介绍了该领域传统检测方法的特点和存在问题以及高光谱图像检测技术的主要特点,着重介绍了高光谱图像技术在黄龙病检测方面的最新应用技术、设备和实例。提出了柑橘黄龙病诊断领域,在实现无损检测的前提下,降低成本、提高检测实时性和诊断速度的发展趋势。

柑橘黄龙病药物防治策略

柑橘黄龙病(HLB)是世界范围内柑橘生产上的毁灭性病害,已在全球范围造成了巨大的经济损失。黄龙病由韧皮部限制性寄生菌Candidatus liberibacters spp.引起,主要通过柑橘木虱Diaphorina citri(Kuwayama)在田间传播。目前,黄龙病的主要防治方法有:一是传统的“三板斧”防治策略,即种植无病苗木、严防木虱(大面积连片统防统治)和挖净病树;二是药物防治,主要包括抗生素化学药物、窄谱靶向化学药物、免疫诱导物、纳米制剂等在内的多种抗菌剂。本文对近年来国内外柑橘黄龙病药物防治的相关研究进行了系统论述,以期为柑橘黄龙病菌新型防治药剂研发提供理论依据和参考。

不同柑橘品种溃疡病抗性及不同时期药剂处理防效评价

对11个柑橘品种离体叶片进行溃疡病菌接种,统计病情指数;选取5个对溃疡病易感的柑橘品种在病菌接种后不同时期进行药剂处理试验,评价溃疡病病菌接种后防治的最佳时期和药剂防效。结果表明,接种12 d溃疡病抗性由高到低依次是长安金柑>贡柑>红肉蜜柚>砂糖橘>金橘蜜柚>马家柚>沙田柚>橘红>纽荷尔脐橙>沃柑>茂谷柑;4种药剂防效由高到低依次为可杀得>中生菌素>代森锰锌>乙蒜素,病菌接种后12 h内进行药剂处理,防效较高,超过24 h防效下降趋势增大。

柑桔溃疡病菌致病性研究初探

从四川、湖北两省收集的柑桔病样分离出2个溃疡病菌株,经生物学和PCR鉴定后,分别针刺接种于纽荷尔脐橙、福本脐橙、卡拉卡拉脐橙和春见桔橙等4个柑桔品种;接种2 d后调查发病情况,使用DPS软件8.01的Duncan新复极差法进行分析。结果表明,接种后4 d是最佳观察时期,4个柑桔品种分别接种上述菌株后发病率无明显差异,老叶和成叶的发病率要高于嫩叶的发病率,叶片不同部位之间的发病率也基本相当,桔橙的抗病性要高于脐橙的抗病性。

柑桔衰退病毒在3种寄主不同组织中分布的研究初报

应用直接组织点免疫(DTBIA)和反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),对接种了柑桔衰退病毒(CTV)的3组共45株锦橙、凤凰柚和木并柑进行了检测,结果表明,CTV在嫩枝中的检出率最高,其次依次是嫩叶、老枝和老叶。

苹果坏死花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的建立

根据GenBank数据库已登录序列设计了12对苹果坏死花叶病毒(apple necrotic mosaic virus,ApNMV)的检测引物,通过引物筛选和体系优化,建立了以ApN1-F3/R3为引物的ApNMV的TB Green染料法实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测技术。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为97.3%,相关系数为0.997,灵敏度是常规PCR的100倍。采用q PCR方法对60份田间苹果样品进行检测,结果显示,常规PCR对ApNMV的检出率为51.7%,而qPCR的检出率为56.7%。该技术适用于田间样品的检测。

柑橘褐斑病的病原分离和药物筛选

从云南马关近2 a来发生的一种柑橘褐斑病的病理组织中分离得到1株病原菌,依其培养性状和形态特征,初步鉴定为径点霉属,并比较了其对11种市售农药的敏感性。结果表明:氟硅唑、中生菌素、多抗霉素、丙森锌、氟菌唑、异菌脲6种药物对病菌菌丝生长的抑制活性较高,其中氟硅唑最灵敏,其EC50为0.03μg/mL;丙森锌和中生菌素次之,EC50分别为1.8μg/mL和3.14μg/mL;氟硅唑和百菌清对孢子的抑制效果较好,1μg/mL抑制率均在80%以上;丙森锌、佳爽和多抗霉素也有一定的保护作用。

柑橘衰退病毒柚分离株的p25/Hinf1 RFLP分析

对123个柑橘衰退病毒柚分离株进行p25/Hinf1 RFLP分析明确:样品中,单一p25/Hinf1 RFLP组群样品占样品总量的82.9%,说明我国田间受侵染柚类中柑橘衰退病毒株系相对较为单一;RFLP组群6的样品占样品总量的79.7%,说明目前柚类生产上的优势流行株属于p25/Hinf1 RFLP组群6,初步认定为强毒株系;柑橘衰退病毒株柚分离株S102、S104、S106、S108属于p25/Hinf1 RFLP组群5,初步认定是弱毒株系。

重庆地区柑桔衰退病毒组群分析

柑桔衰退病毒(CTV)存在着许多生物学特性不同的株系。通过铲除感染强毒株植株或利用弱毒株交叉保护的方式来防治柑桔衰退病都需要对CTV株系进行准确、可靠的鉴定。根据对CTV衣壳蛋白基因(CPGs)的限制性片段长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,发现在重庆地区CTV主要以CP/HinfⅠRFLP第1,3和6组群为主,并且在田间以多株系混合感染为主。

琯溪蜜柚黑斑病菌防治药剂室内筛选试验

选用了18种药剂对琯溪蜜柚黑斑病菌Phyllosticta citriasiana进行室内毒力测定。结果表明,在供试药品中具有保护和治疗作用的复配剂型抑菌效果较好,其中苯甲.丙环唑的毒力最高,EC50为0.055 9mg/L,其次为苯甲.嘧菌酯,EC50为0.060 1mg/L,在浓度为0.15mg/L时两者都可完全抑制病原菌的生长;保护性杀菌剂以50%多菌灵的抑菌效果最好,浓度在0.5mg/L时有完全抑制作用;铜制剂杀菌剂的毒力较低,松脂酸铜的EC50为468.140 0mg/L,抑菌效果差。

银杏叶提取物对柑桔青霉病菌的抑菌效果

银杏叶提取物对柑桔青霉病菌抑菌效果的试验结果表明,乙醇浸提物、石油醚萃取物、三氯甲烷萃取物和水萃取物4种提取物对柑桔青霉病菌均有一定抑制效果,但只有石油醚萃取物对柑桔青霉病菌抑菌效果好,处理5天后对供试病菌的EC50为14.85μg/mL;石油醚萃取物100μg/mL处理柑桔30天后的防治效果达到82.22%。

柑橘黄龙病对赣南脐橙果园土壤生物学性质的影响

通过平板计数法、比色法、Biolog Eco微平板分析法测定柑橘黄龙病(citrus huanglongbing,HLB)不同染病级别脐橙的土壤微生物种群数量、土壤酶活性及土壤微生物功能多样性。结果表明,与健康的晚棱脐橙相比,在感染黄龙病前期其土壤生物学性质的变化不大;在感染的中后期,由于根系在营养缺乏和病害的双重影响下逐渐坏死,根系生态系统遭到破坏,晚棱脐橙土壤的微生物数量、土壤酶活性及土壤微生物功能多样性均明显下降。

柑橘黄龙病RAA-LFD检测方法的建立

本研究基于柑橘黄龙病菌50S核糖体亚基基因的保守片段设计并合成引物和探针,通过对反应条件的优化,建立了柑橘黄龙病菌RAA-LFD检测方法。该方法可快速高效地完成柑橘黄龙病菌检测,灵敏度可达到10 copies/μL;特异性试验结果显示,除柑橘黄龙病菌基因组呈阳性外,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、胸膜肺炎放线杆菌、单核细胞增生李斯特菌、支气管败血波氏杆菌、沙门氏菌均为阴性,特异性良好。利用该方法检测102份柑橘叶样本,结果显示,56份样本核酸为阳性,46份样本核酸为阴性;与荧光定量PCR法、RAA荧光法比较,RAA-LFD检测法弱阳的检出率偏低,但是RAA-LFD检测法摆脱了仪器依赖,操作更简便快速,无需电泳检测,避免了核酸扩增产物开盖污染的风险,适用于柑橘黄龙病菌的快速检测,适合在基层使用。

广西南丰蜜桔感染黄龙病的调查研究

为了解广西南丰蜜桔黄龙病感染情况,在南宁、柳州和桂林等地采集南丰蜜桔黄龙病疑似样品,对样品按症状分类并记录,然后利用黄龙病亚洲种的16SrDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c进行PCR扩增,扩增结果在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。结果表明,共收集了193份南丰蜜桔黄龙病疑似样品,其中,61份为斑驳型黄化,3份为均匀黄化,19份为缺锌状黄化,35份为表现正常,5份为叶脉黄化,70份为其他类型黄化。检出阳性样品共75份,总阳性率为38.9%,96%阳性样品出自非正常叶疑似样品。斑驳型黄化叶、缺锌状黄化叶、其他黄化叶和正常叶疑似样品阳性率分别是82.0%、31.6%、22.9%和8.6%,另两类样品阳性率为0。来自南宁、柳州和桂林的疑似样品检出阳性率分别为25.0%、36.6%和42.9%。黄龙病已经在广西的南丰蜜桔上发生严重为害。

广西及广东惠州沙糖桔黄龙病亚洲种检测初报

采用柑桔黄龙病亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)的16SrDNA特异引物fD1/fD2和OI1/OI2c,对采自广西沙糖桔主要产区及广东惠州的234份沙糖桔叶片样品DNA进行NestedPCR扩增,扩增产物在1%琼脂糖凝胶电泳上检测。结果表明,广西南宁、桂林、柳州、百色、崇左、梧州、来宾、防城港、东兴及广东惠州的沙糖桔部分或大部分感染了柑桔黄龙病亚洲种病原,检出率分别为35.7%、66.7%、70.0%、74.5%、54.5%、29.7%、88.9%、20.0%、33.3%、95.0%。

抗柑桔褐斑病菌和炭疽病菌宽皮柑桔种质的筛选

由交链格孢菌Alternaria alternata引起的柑桔褐斑病和胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起的柑桔炭疽病是重庆万州地区红桔的主要真菌病害。为筛选适合万州地区发展的宽皮柑桔品种,采用离体叶片室内人工接种-病情指数抗性评价方法探讨了16份宽皮柑桔种质对柑桔褐斑病菌和炭疽病菌的抗性。结果表明,对于柑桔褐斑病菌,不知火桔橙、W·默科特桔橙、春见桔橙和温州蜜柑为高抗种质;对于柑桔炭疽病菌,不知火桔橙、W·默科特桔橙、蔓生红桔和苏红为高抗种质;万州主栽的四川老系红桔虽抗柑桔炭疽病菌,但高感柑桔褐斑病菌,可用抗两种病菌的鹅蛋红桔、福桔、安江红桔以及高抗两种病菌的不知火桔橙和W·默科特桔橙进行品种替换和升级。