RAPD分析氮离子注入甜菊种子后的幼苗基因组DNA变异

应用ＲＡＰＤ 技术检测经低能氮离子注入甜菊纯系种子引起的幼苗基因组ＤＮＡ 变异。筛选出ＯＰＪ系列中的１５ 种引物对实验及对照基因组ＤＮＡ 进行了ＰＣＲ 扩增，共获扩增片段１０３ 条，分子量在０．３ － ３ｋｂ 之间，其中５ 种引物ＯＰＪ－ １ ，７ ，９，１１ ，１２ 扩增出差异片段１２ 条。结果表明，低能氮离子注入甜菊种子可引起体内基因组ＤＮＡ 发生突变；ＲＡＰＤ 技术是检测基因组ＤＮＡ 发生诱变的一种简便、有效方法。本文同时探讨了离子强度和Ｔａｇ ＤＮＡ 聚合酶用量对甜菊ＲＡＰＤ 分析结果的影响，以及氮离子注入诱变效应的可能机制。

甜菊愈伤组织生长、分化与甜菊糖苷积累的关系

耐菊（Steviarebaudiana）愈伤组织中甜菊糖苷的积累与愈伤组织的生长呈负相关、与愈伤组织细胞的组织化及转绿呈正相关。愈伤组织芽的分化并不是积累较高水平甜菊糖苷的必要前提。绿色、质地致密、生长缓慢的愈伤组织，不论有芽分化或无芽分化时，其甜菊糖苷含量均较高。在电镜下观察到，这两种愈伤组织细胞具有类似的超微结构特征：细胞高度液泡化；叶绿体发育成熟，光合膜系统结构发达，基质浓厚且含有质体小球；微体具有典型的晶格结构，常与叶绿体紧密相靠。黄色、质地致密、生长缓慢的愈伤组织中甜菊糖苷含量较低，其细胞内质体富含淀粉粒，只有少量分散的片层结构，有的质体甚至完全被淀粉粒所充塞。黄色、质地疏松、生长快速的愈伤组织中甜菊糖苷含量最低，其细胞内质体结构简单，片层稀少。质体的发育和液泡的分化与甜菊糖苷的积累密切相关。愈伤组织具有较高的甜菊糖苷含量在于愈伤组织细胞的组织化以及细胞的高度液泡化并具有发育成熟的叶绿体。

甜叶菊“中山一号”快速繁殖的研究

用甜叶菊“中山一号”嫩茎或叶柄为外植体 ,MS为基本培养基 ,在附加BA(0 5mg/L) +NAA(0 2mg/L)的分化培养基上 ,分化率为85 % ;继代增殖在附加ZT(1 5mg/L) +NAA(0 1mg/L)的培养基上 ,每3～4周可增殖5～6倍 ;在附加BA(0 1mg/L) +NAA(0 5mg/L) +IBA(0 5mg/L)的生根培养基上 ,生根效果最好 ,出瓶前须炼苗2～3d ,生根苗移栽成活率在90

甜叶菊愈伤组织诱导及不定芽的形成

通过建立甜叶菊愈伤组织培养体系,以甜叶菊种子萌发出的无菌苗为材料,以茎尖、叶片及茎段为外植体,采用正交试验设计,筛选适合愈伤组织诱导的最佳培养基。结果表明,3种外植体均能成功的诱导出愈伤组织,其中以叶片的诱导效果最佳,为诱导愈伤的最佳外植体;NAA浓度和GA3浓度对愈伤组织诱导的影响较大,最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+GA33.0 mg/L。试验的9种培养方案中,有7种培养方案有不定芽的产生,以茎尖为外植体的培养方案的不定芽诱导率最高,均达到65%以上。叶片诱导出的愈伤长势较好,但难以继续分化,茎尖形成不定芽数量最多,但不定芽长势不佳,不适合进行进一步培养。

高总苷兼高RA苷甜菊新品种‘中山6号’的选育

‘中山6号’是由高RA苷含量品种‘中山4号’(♀)和高总苷含量品种‘中山3号’(♂)杂交优选单株扦插繁殖获得的高总苷、高RA苷含量优良新品种。‘中山6号’的株高平均92.7cm,叶绿色,柳叶形,叶缘锯齿宽且深裂;自然分枝能力良好。该品种始蕾期8月初,干叶收割期在植株始蕾期前一周。干叶原料生产种植平均栽培密度约9000株/667m2,干叶平均产量为220kg/667m2,植株有效成分糖苷总含量(2015检测结果)为21.81%,RA苷含量为13.99%。

高RA苷甜菊新品种‘甜种1号’的选育

‘甜种1号’是由高RA苷含量品种‘中山3号’和高总苷含量品种‘中山4号’杂交F，代高R—A苷含量的甜菊新品种。‘甜种1号’的平均株高为77．35cm，叶色翠绿，叶缘锯齿宽且深裂，呈柳叶形；分枝多，地上部分枝数平均6．74；在江苏地区干叶产量194—210kg／667m2。2015年省鉴定试验该品种RA苷含量为7．79％（干叶质量比），RA苷／总苷为61．58％，对照品种惠农4号RA苷／总苷为51．9％，比对照增加9．68％（绝对值）。

离子注入甜菊种子效应初报

甜菊种子用Ｎ离子束照射（能量３５～１００ｋｅＶ，剂量１０１３～１０１６／ｃｍ２）经二年试验看出，Ｎ离子注入可促进生长，与对照相比，最优处理剂量１０１３／ｃｍ２的株高、节数、叶片数、干叶重及茎根干重分别提高２２％、１０％、３８％、５４％、８１％，植株茎粗及单株叶面积分别提高１４％及４７％，单株产量提高１２％，小区产量增加４１％，总糖甙含量提高２．８度，优质糖莱包迪Ａ甙含量提高１．８８度，总产糖量增加８３％，莱包迪Ａ糖产量增加１６２％。本文还就其诱变机理与γ射线处理区别进行了讨论。

离子注入甜菊的诱变效应研究

用７５ｋｅＶ的氮和碳离子的不同剂量注入甜菊干种子，以γ射线作对比，研究其Ｍ１生物学效应和Ｍ２突变。结果表明，离子束能诱发甜菌染色体结构变异，染色体畸变细胞率随离子注入剂量的提高呈增加趋势。离子束对甜菊的Ｍ１损伤效应低于γ射线，而诱发的Ｍ２突变高于γ射线。碳离子诱发的染色体畸变细胞率和Ｍ２有益性状突变高于氮离子。离子注入杂交一代丰１×日原和日原×丰２的诱变效应大于济宁种和丰２。

氮离子注入甜菊的细胞学效应

用不同能量氮离子注入甜菊干种子，在Ｍ１根尖细胞内可观察到各种可见染色体结构变异及有丝分裂行为异常。随着注入离子的剂量和能量的提高，染色体畸变细胞率呈增加趋势。统计分析显示，离子注入的剂量效应大于能量效应。染色体畸变细胞率与氮离子注入剂量的直线回归关系不显著，但与γ辐照剂量的直线回归关系达极显著，γ射线对甜菊Ｍ１的辐射损伤大于氮离子束。

4种盐胁迫对甜叶菊高RA品种江东1号种子萌发影响的比较研究

以甜叶菊高RA品种江东1号为试验材料,比较中性盐NaCl、Na2SO4与碱性盐NaHCO3、Na2CO3对其种子萌发的影响。结果表明,随着Na+浓度的升高,4种盐处理下甜叶菊种子的发芽势、发芽率、发芽指数等指标总体呈下降趋势,抑制作用明显;甜叶菊种子能够忍受的Na+胁迫浓度范围为0～80 mmol/L;同样Na+浓度下,碱性盐抑制作用大于中性盐,总体表现为Na2CO3>NaHCO3>Na2SO4>NaCl;在20 mmol/L Na+的低浓度下,NaCl处理对甜叶菊种子萌发表现出促进作用,无盐害效应;复水后,种子能恢复部分活力,但恢复率较低。试验表明,甜叶菊种子具有一定的耐盐性,但其抗盐碱性不强。

甜菊含甙量的变异及R－A型良种的选育

从甜味成分种类及含量的不同，研究甜菊（ＳｔｅｖｉａｒｅｂａｕｄｉａｎａＢｅｒｔｏｎｉ）实生群体和单株无性系的变化，从中选育优质甜味成分含量高的良种。主要结果：（１）在实生群体中，丰产株型（圆纺锤形株）占７．３％，其中，优质甜味成分Ｒ－Ａ含量超过Ｓｔ含量的Ｒ－Ａ型株占１０．９６％，它们的Ｒ－Ａ含量变幅为３．３～１２．０％。（２）Ｒ－Ａ型良种Ｊ－２单株无性系在繁殖达２０００万株时，叶片大小和含甙量均存在极显著差异，Ｒ－Ａ含量变幅为４．５～１２．２％。（３）从Ｒ－Ａ含量为３．８６％的实生群体中选出Ｒ－Ａ含量为７．０４～１２．０３％的单株及从Ｒ－Ａ含量为９．１０％的良种单株无性系中选出Ｒ－Ａ含量为１０．１５～１２．１５％的单株，它们的Ｒ－Ａ含量均大幅度提高。

赤霉素对不同甜叶菊品系主要农艺性状、糖苷含量及产量的影响

喷施不同浓度的赤霉素(GA)于4种不同类型的甜叶菊品系叶表面,考察外源激素处理对其主要农艺性状、糖苷含量及糖苷产量的影响。结果表明:(1)赤霉素处理组同对照组相比,处理后株高、节长显著增长,且节间伸长效果主要集中在茎秆中部,叶长显著变短、叶宽显著变窄,叶长宽比值增大,单株干叶产量下降;赤霉素处理间,表现出一定的浓度效应,即随着赤霉素处理浓度增大,表现出一定的株高增加,叶长、叶宽减小的趋势。(2)就提高植株糖苷含量而言,100 mg/L的GA处理(A1)提高了SR1型甜叶菊的RA苷的含量,100 mg/L和300 mg/L GA提高了SR3品系ST苷含量,300 mg/L GA提高了SR2品系ST苷含量。(3)就糖苷产量而言,由于各处理下其干叶产量均显著下降,最终导致所有GA处理中,除300mg/L的GA处理显著提高了SR2的ST苷产量外,其余GA处理均不利于甜叶菊RA或ST糖苷产量的提高。

甜叶菊组织培养条件的研究Ⅱ.不同基本培养基、不同碳源对愈伤组织形成及芽诱导的影响

以MS为基本培养基进行甜叶菊组织培养 ,培养物生长速度快 ,分化频率高 ;以蔗糖作碳源的培养物 ,其愈伤组织诱导率、出芽率均比葡萄糖、麦芽糖作碳源的高。

甜叶菊组织培养条件的研究Ⅰ．外植体、激素浓度、琼脂浓度对愈伤组织形成及芽诱导的影响

以茎尖为外植体进行甜叶菊的组织培养，比以叶柄、叶片、茎段、下胚轴为外植体，愈仿组织诱导率、出芽率都高；在ＭＳ基本培养基上，适合茎尖生长、分化的激素浓度为０．５ｍｇ／ＬＢＡ、０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ；琼脂浓度为０．７％

茎秆专用型能源甜高粱杂交种辽甜9号选育及栽培技术

辽甜9号(303A/304),以自选不育系303A为母本,甜高粱恢复系304为父本杂交组配而成。2009～2010两年参加全国高粱品种区域试验,结果表明,辽甜9号生物产量69 598.9 kg/hm2,茎秆含糖锤度20.6%,茎秆出汁率55.1%。辽甜9号是A3型细胞质茎秆专用型能源甜高粱杂交种,为不育化类型,没有籽粒,有效解决能源甜高粱抗倒伏能力差、防鸟害难等问题,还可以满足加工企业原料生产轻简化及收获阶段化的需要,是生产燃料乙醇较理想的能源作物品种。

离子注入后的甜菊种子电导率及发芽能力变化

以氮、碳离子注入甜菊种子研究其电导率、ｐＨ值及发芽能力的变化，结果表明，被处理种子的电导卓，随着浸种时间的延长而提高，以注入能量７５ｋｅＶ与剂量１０１４最为敏感，氮离子比碳离子对电导率的影响作用更大；离子注入甜菊种子后，ｐＨ值均在４．５～５．０之间，碳离子稍高于氮离子，能量与剂量的变化反应不敏感；离子注入后甜菊种子的发芽势与发芽率有相同趋势，小剂量、低能量促进种子发芽，碳离子比氦离子作用更为明显。

木霉突变体T1010变异特性分析

木霉突变体T1010与出发菌株实验比较,其生长速度、产孢量、菌丝重量分别提高13.62%、48.52%、29.03%;T1010对培养液中氨态氮的吸收率比出发菌株T32提高37.09%,T1010对无机磷的吸收率比出发菌株提高15.17%,T1010对K+吸收率比出发菌株高16.49%,在pH值为7.34的培养液中培养3d后,T1010的pH值为5.77,出发菌株的pH值为6.67;突变体T1010对培养液中葡萄糖的吸收能力比出发菌株提高19.64%,突变体T1010利用培养液中的氨基酸量较少,比出发菌株降低18.26%。拮抗作用结果显示,T1010对病菌瓜萎蔫镰刀菌抑制作用、覆盖作用分别比出发菌株提高87.45%、57.38%。

甜菊种子贮藏技术研究

本研究采用同一个品种的来自3个不同生态区的种子,在两种包装条件,贮于18℃、-10℃、0℃及室温下。经三年(1989—1992年)跟踪测定种子发芽力,研究甜菊种子在不同贮藏条件下的生活力变化:Ⅰ、不密闭条件:种子生活力随贮藏温度不同,降低速率亦不同,即生活力的降低速度,室温>0℃>-10℃>-18℃。随着贮藏时间延长,种子发茅力逐渐降低,12个月贮藏期是甜菊种子生命力的转折点,北京常温下甜菊种子的有效寿命约一年左右。Ⅱ、密闭条件:生活力变化规律与不密闭条件类同,只是密闭条件下总体生活力比不密闭条件下的高,贮于0℃以下的甜菊种子,三年以上仍有一定发芽率。最后就甜菊种子寿命及贮藏条件与种子寿命关系进行了讨论。

云南斑茅的染色体和植物学性状观察初报

斑茅是与甘蔗近缘的野生种之一,在分类学上有人将其归人甘蔗属(Ssccharum),有人将其归人蔗茅属(Erianthus).本文按前一种分类.斑茅在甘蔗杂交育种中的利用研究始于1985年,尽管至今尚未选育出以其为亲本之一的杂种后代的优良品种,但甘蔗育种界的学者们并未忽视它在杂交育种中可利用的潜力,继续在班茅和甘蔗远缘杂交及其后代性状遗传方面进行探索.为了开发利用云南丰富的斑茅野生资源,给甘蔗远缘杂交育种提供必要的基础理论,特设计本研究.

甜菊良种同圃三级繁育制度及配套技术

在同一繁育圃内,运用分级选留母根和混合采收种子相结合的选优保纯措施,可同时繁育出高纯度原种、原种和生产用种,解决了甜菊有性繁殖易杂交退化,而无性繁殖倍数低、成本高、难普及等难题。