灵芝LaeA基因的电子克隆、表达及生物信息学分析

为通过电子克隆得到灵芝LaeA基因序列,分析其基因序列信息,并初步探究其调控功能。采用电子克隆的方法,以已知桔青霉的LaeA蛋白序列为模板,在灵芝的EST数据库中进行序列相似性搜索比对(Blast),经序列拼接、序列验证和序列延伸等电子克隆方法获得灵芝LaeA基因的cDNA序列;采用生物信息学软件对LaeA基因编码蛋白质的基本理化性质、疏水性/亲水性、亚细胞定位、信号肽、二级结构、三级结构及进化关系等方面进行了预测和分析。结果表明,LaeA基因全长1 134 bp,编码378个氨基酸,蛋白分子质量为42.895 3 ku,存在于细胞质中,是亲水性蛋白;LaeA蛋白结构主要由47.88%无规则卷曲、33.33%α-螺旋和18.78%延伸链组成,有S-腺苷甲硫氨酸结合位点,属于AdoMet_MTases超家族蛋白;系统进化分析结果显示,LaeA蛋白与云芝、污叉丝孔菌等白腐担子菌类的亲缘关系较为亲近;qRT-PCR结果表明,LaeA基因在灵芝细胞液体静置培养过程中的表达量显著高于振荡培养方式。推测LaeA蛋白作为1种甲基转移酶蛋白,通过参与组蛋白的甲基化修饰,进而影响基因簇的表达水平。

空间条件对红花种子发芽的影响

目的：探讨空间环境对药用植物生长发育的影响。方法：以红花种子为材料，搭载返回式卫星，经空间飞行完成后在地面进行种子发芽的观察，同时用电泳方法检测种子的过氧化物酶、酯酶和可溶性蛋白质图谱。结果：空间飞行各组种子材料的平均发芽率高于地面对照组。飞行材料的过氧化物酶活性也高于地面对照组。飞行与地面材料的同工酶和蛋白质电泳图谱在种子发芽阶段略有变化，但绝大多数谱带一致。结论：空间环境的微重力和辐射对红花种子发芽均有影响，但它们在种子发芽阶段对基因表达影响不十分明显。失重可能与造成过氧化物酶活性升高的重要因素有关。

牡丹SCoT分子标记正交优化及引物筛选

以牡丹基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计对影响目标起始密码子多态性-聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的五因素(Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、dNTPs浓度和引物浓度)进行优化试验,建立了优化的牡丹SCoT-PCR反应体系:Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.60μmol/L、Taq DNA聚合酶0.50 U、模板DNA 1.00 ng/μL,1×PCR-Buffer,总体积20.00μL。比较各因素对扩增反应的结果,其中以Mg2+浓度的影响最大,DNA模板用量的影响最小。运用牡丹17个品种验证了该体系稳定可靠,并从36个SCoT引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的24个引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为今后利用SCoT标记技术对牡丹进行相关研究提供了科学依据。

葛根SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

【目的】优化葛根SCoT-PCR反应体系,筛选适用于葛根的SCoT引物,为利用SCoT分子标记进行葛根种质资源鉴定、遗传多样性分析及分子标记辅助育种提供技术支持。【方法】采用正交设计对SCoT-PCR反应体系中的DNA模板量、dNTPs浓度、Mg^(2+)浓度、Taq DNA聚合酶量和引物浓度5个因素进行优化,利用最佳SCoT-PCR反应体系筛选出适用于葛根的SCoT引物,并对该体系进行验证。【结果】最佳葛根SCoT-PCR反应体系20.00μL:DNA模板50.00 ng,dNTPs 0.25 mmol/L,Mg^(2+)1.50 mmol/L,引物0.80μmol/L,Taq DNA聚合酶0.50 U。利用该体系从36条SCoT引物中筛选出35条可从葛根中扩增出清晰条带的引物。使用3条引物对18个葛根材料进行PCR扩增,PCR产物表现出良好的重复性、稳定性和丰富的多态性。【结论】建立的最佳葛根SCoT-PCR反应体系和筛选获得的35条SCoT引物可适用于葛根种质资种鉴定、遗传多样性分析、相关分子标记开发等研究。

KT和NAA对铁皮石斛带芽茎段生长发育的影响

探讨不同浓度KT和NAA对铁皮石斛带芽茎段生长发育的影响。结果表明:MS培养基有利于铁皮石斛带芽茎段根的分化,MS+KT 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基对铁皮石斛带芽茎段芽和叶的分化均有促进作用。

杂交元胡新品种选育的研究

新品种杂交元胡是由正品浙江元胡与野生齿瓣元胡杂交后，利用无性繁殖固定其杂种优势，经单株选育而成。它综合了瓣元胡块茎大、生长旺盛，浙江元胡有效成分含量高、繁殖较快的优点，单位面积产量比浙江元胡提高５０％以上。药理试验表明抗炎、镇痛等主要作用与正品浙江元胡相似，且适应北方载培，填补了元胡在北方无当地品种的空白，为元胡在北方就地生产，就地应用提供了良种。

苦豆子不同外植体愈伤组织的诱导研究

以苦豆子的茎尖、茎、根、上胚轴、下胚轴、胚根为外植体,以MS附加不同激素配比的培养基为基质,进行了诱导苦豆子愈伤组织的适宜外植体及培养条件的筛选。确定出苦豆子诱导愈伤组织的最佳外植体为胚根,最佳培养基为MS,适宜的细胞生长素2,4-D浓度范围为1.2～2.0 g/L,适宜的6-BA浓度为0.16 g/L。

理塘县野生山莨菪中4种莨菪烷类生物碱的含量测定

目的:通过采集和测定理塘县不同产地野生山莨菪药材中4种莨菪烷类生物碱含量,为理塘县山莨菪种植及产业发展提供参考数据。方法:采用高效液相色谱法测定理塘县不同产地野生山莨菪药材中生物碱含量。结果:理塘县不同乡镇的12批野生山莨菪根样品中樟柳碱、山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品4种生物碱含量的差异较大,樟柳碱含量在0001%~0326%之间、山莨菪碱含量在0016%~0124%之间、东莨菪碱含量在0~0063%之间、阿托品含量在0038%~0342%之间、4种生物碱总量在0066%~0604%之间。结论:该县具有发展山莨菪特色种植产业的巨大潜力,建议以高塘镇、藏坝乡、濯桑乡等乡镇为核心建立山莨菪种植繁育和示范基地,并结合林草资源特点发展山莨菪仿野生栽培。

我国药材种子种苗产业存在的问题及其对策

目的 :引导我国药材种子种苗产业朝科学的、高质量的、规范的、合法的主向发展。方法 :在简要说明药材种子种苗在中药材生产中的重要作用的基础上 ,,提出目前我国药材种子种苗产业存在的问题 ,并概括了国家及科研单位近几年在药材种子方面做的工作 ,提出了药材种子产业的发展对策。结果与结论 :国家政府机构的大力支持与重视 ,科研单位的努力工作 ,必将使中药材种子种苗产业的现状有很大的改观。

石斛组织培养研究进展

目的 :综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。方法 :系统查阅国内外近 10年来的有关文献 2 0余篇。结果与结论 :介绍了石斛组培的多种方法 ,对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述 ,并提出了存在的问题及对策。

DNA分子诊断技术在药用植物研究上的应用

ＤＮＡ分子诊断技术在药用植物研究上的应用王康正（中国中医研究院中药研究所北京１００７００）高文远范磊赵淑平肖培根（中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所北京１０００９４）傅荣昭（中国科学院遗传研究所北京１００１０１）随着科学技术的进步和国内外在...

发根农杆菌介导的药用植物遗传转化研究进展

发根农杆菌介导的植物遗传转化是近年来发展起来的一项新的植物遗传转化技术。本文就发根农杆菌 Ri质粒的结构、发根农杆菌介导的植物遗传转化的方法和步骤 。

暗紫贝母鳞茎器官培养生长特征和生物碱累积的研究

本文应用组织培养中器官培养技术对我国特有的名贵中药材—暗紫贝母进行了生长量、生物碱含量等八个指标和培养天数关系的研究。结果表明:培养30—50d期间是鳞茎组织快速生长期,50d时鳞茎培养物中干物质积累最高,为适宜采收期。培养鳞茎在全生长阶段中生物碱含量都较高,是野生商品药材的1.22—1.50倍,从而有效地保持和提高了主要化学成分。

管花肉苁蓉HPLC指纹图谱研究

【目的】建立管花肉苁蓉药材的HPLC指纹图谱，为其药材质量评价提供依据。【方法】以松果菊苷为参照物，采用高效液相色谱法，对管花肉苁蓉药材进行了指纹图谱分析。色谱条件如下：Waters xterra RP18（250mm×4．6mm、5μm）色谱柱；乙腈-0．2％磷酸溶液梯度洗脱；流速1．0mL／min；检测波长330nm。【结果】该方法精密度高、重现性好，所测组分均达到基线分离，共分离了19个共有指纹峰，相似度在0．92-1．0。【结论】不同来源的管花肉苁蓉药材的内在质量存在差异，该方法可用于管花肉苁蓉药材的质量控制。

组培条件对云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的影响

目的 :寻找适合于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇的培养条件。方法 :对在不同光照条件下和不同培养基上的愈伤组织进行生长分析和紫杉醇含量测定。结果与结论 :黑暗、0 .1mg·L-1BAP和 1.0mg·L-12 ,4 D的激素组合 ,B5,DCR或 6 ,7 V基本培养基有利于云南红豆杉愈伤组织生长和形成紫杉醇 ;培养基中NO3 -浓度高有利于愈伤组织的生长 ,NH+ 4浓度高抑制愈伤组织的生长 ,但显著提高紫杉醇含量。

猪苓菌丝形成菌核栽培方法的研究

目的 阐明在伴生菌的作用下 ,不同栽培方法对猪苓菌丝形成菌核的影响。方法 以树棒为载体 ,粗砂为基质 ,纯猪苓菌种、纯猪苓菌丝形成菌核伴生菌和蜜环菌为供试菌株 ,采用花盆栽培方法。结果 猪苓菌种和伴生菌间隔接种于树棒鱼鳞口和晚期接蜜环菌有利于猪苓菌核的形成和生长。结论 伴生菌是猪苓菌丝形成菌核的关键生物因子 ;蜜环菌是猪苓菌核继续生长发育的主要营养来源。

发根农杆菌转化龙胆再生植株的研究

本文利用具Ri质粒的发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)通过叶盘法对药用植物龙胆(Gentiona manshurica Kitagaua)进行了转化实验,发根农杆菌15834感染龙胆,诱发产生毛状根,并得到再生的龙胆植株。冠瘿碱检测实验表明,再生植株显示甘露碱(mannopine)带,说明发根农杆菌Ri质粒的T-DNA部分已整合到龙胆植物细胞中。再生的龙胆丛生苗可以在不含激素的简化培养基上快速繁殖,转化的龙胆植株具有发达的根系,根部龙胆苦甙含量比对照高,从而为东北龙胆栽培事业的发展以及龙胆有效成份的工业化生产提供了基础资料。