中国黄连愈伤组织的诱导与次生代谢产物

利用野生和家栽中国黄连的幼叶、花葶、花蕾等,接种在含有2,4-D(1mg/L)、KT(1mg/L)、NAA(1mg/L)、琼脂(0.75％)、蔗糖(3％)的6·7-V、ER、MS培养基上,在22±1℃条件下进行暗培养45～55天,诱导出愈伤组织,其中以6·7-V培养基诱导频率较高,ER次之,MS较少,不同外殖体和接种时期的愈伤组织诱导频率亦不相同。幼叶与其诱导形成的愈伤组织次生代谢产物均含有小柏碱、药根碱、巴马亭;花亭除含小柏碱、巴马亭外,药根碱含量甚微,而花葶诱导形成的愈伤组织药根碱含量则显著增加。

黄连体细胞胚胎发生的研究

黄连(Coptis chinensis)叶片外植体在 MS+2,4-D 1 ppm 培养基上很容易产生愈伤组织。愈伤组织在转入分化培养基 MS+6-BA 0.5ppm+NAA 1ppm 培养基上以后,能产生大量胚状体。胚状体可经过球形、心形、鱼雷形及子叶期等诸阶段发育成小植株。对胚状体用4%的藻酸钠和2%的氯化钙进行人工种皮包埋后,在无菌条件下,胚状体转变成苗。愈伤组织在分化培养基上经几次继代后,整个愈伤组织可转变为胚性愈伤组织并形成一个个胚性细胞团。胚状体可从其表面或愈伤组织内的任一细胞团产生。这一研究结果为获得大量分散的单个胚状体及人工种子的研制提供了良好的实验系统。

中国黄连组织和细胞培养条件的研究 Ⅰ.不同培养基、碳源及培养温度对培养物生长和小檗碱含量的影响

中国黄连细胞无性系无论进行固体培养或液体悬浮培养,均以6,7-V培养基上的培养物生长速度快,小檗碱含量高。在6,7-V培养基的基础上,以蔗糖(试剂)或食用砂糖作碳源的培养物,其生长速度、干物质积累与小檗碱含量比萄葡糖或麦芽糖作碳源的高。适宜培养温度为22～25℃。

L-酪氨酸对中国黄连细胞小檗碱合成的影响

接种前附加1.0～12.0mg/L L-酪氨酸于含有2.0mg/L NAA和0.1mg/LKT的6,7-V固体培养基中,可使中国黄连细胞的小檗碱含量和小檗碱积累分别比对照(未添加)增加56.21～84.62％和58.22～107.59％。接种后5～15天添加4.0mg/L L-酪氨酸于含有2.0mg/L NAA和0.1mg/L KT的液体培养基中,可使小檗碱含量和小檗碱积累分别比对照增加22.69～42.55％和25.82～50.21％。添加L-酪氨酸于含2,4-D的培养基中反而抑制小檗碱的合成。

黄连组织培养细胞中生物碱的研究

黄连组织培养细胞中生物碱的研究黄炼栋，胡之璧（上海中医药大学，上海２０００３２）摘要：在川连和云连组织培养细胞和培养基中．检测到小檗碱、巴马汀、药根减，川连培养细胞中药根碱含量高出川连生药的１．８８倍．关键词川连；云连；组织培养细胞；生物碱；高压液相...

中国黄连组织和细胞培养条件的研究 Ⅲ、接种量、材料日龄对培养物生长和小檗碱积累的影响

以中国黄连细胞无性系为材料,在6,7—V固体和液体培养基的基础上进行不同激素配比试验,结果为:(1)在固体培养基含KT0.1mg/L的条件下,添加2,4—D1.0～4.0mg/L能使培养物生长旺盛,2,4—D浓度再增大,生长减慢,白化透明细胞增多,小檗碱合成受到抑制;液体悬浮培养的2,4—D浓度大于1.0mg/L时,培养物干重及小檗碱含量随着2,4—D浓度的增大而下降。固体培养添加NAA1.0～10.0mg/L能提高培养物干物质积累和小檗碱含量,液体悬浮培养的NAA浓度大于1.0mg/L时,细胞培养物的小檗碱含量随着NAA浓度的增大而下降。(2)在培养基含2,4—D1.6mg/L的条件下,固体培养以添加KT或BA0.1mg/L的培养物干重和小檗碱含量为高,液体悬浮培养物的小檗碱含量则随KT或BA浓度(0.01～1.00mg/L)的增大而提高。在固体培养方式下对培养物生长和小檗碱积累较为有利的激素配比为KT0.1mg/L+NAA2.0～4.0mg/L;在液体悬浮培养方式下对培养物生长和小檗碱积累较为有利的激素配比为KT0.01mg/+NAA1.0mg/L。

黄连愈伤组织的诱导及小檗碱和药根碱的含量测定

不同生长季节的黄连外植体在一系列培养基上诱导产生愈伤组织．经高效液相色谱法测定愈伤组织内小檗碱和药根碱的含量．结果表明，幼叶柄外植体在６７－Ｖ０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ上产生的愈伤组织的小檗碱和药根碱含量明显高于对照组．花苔外植体在６７－Ｖ０．５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ上诱导的愈伤组织小檗碱含量高于对照组．

中国黄连组织培养的细胞组织学研究

利用中国野生和家栽黄连幼叶切块,分别接种在含2,4—D1～2mg/1、KT0.1～1mg/1的6.7—V和ER培养基上诱导愈伤组织的形成。愈伤组织转入液体悬浮培养,获得游离细胞和细胞聚集体,通过平板培养或直接用细胞悬浮培养液接种于固体培养基产生细胞团（细胞株）。发生在幼叶切口上的愈伤组织起源于叶肉组织的活细胞,随后在叶块表面局部发生不同步的愈伤组织。愈伤组织有松散和致密两种类型,降低2,4—D浓度,提高激动素浓度能诱导形成致密型愈伤组织;若提高2,4—D浓度,降低激动素浓度,经连续培养,或用愈伤组织的细胞悬浮培养液进行固体培养,形成松散型愈伤组织。在继代培养中改变2,4—D和激动素浓度,松散型愈伤组织能转变为致密型愈伤组织。细胞分裂出现较多的无丝分裂。愈伤组织的局部薄壁细胞恢复分裂又形成新的生长中心,亦有形成鸟巢状结构。细胞悬浮培养能获得少数游离细胞和大量的细胞聚集体,经平板培养产生的细胞团在形态结构和生长速度上也有差异。

中国黄连组织和细胞培养条件的研究Ⅳ．蔗糖和硝酸铵对愈伤组织生长和小檗碱含量的影响

在６、７—Ｖ培养基中适合中国黄连愈伤组织生长的蔗糖浓度为３％，综合考虑愈伤组织生长较慢兼顾小檗碱含量，较为适合的蔗糖浓度为４％。在培养基中补加０．８ｇ／Ｌ硝酸铵对愈伤组织鲜重、干重和小檗碱含量均有不同程度的提高。