石斛的分子生物学鉴定——基于RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析了15种石斛属药用植物,选用10个有效引物(10bp)扩增出99条DNA片段,用于遗传多样性分析、构建UPGMA聚类图。分析结果表明:RAPD方法能有效鉴别所试石斛属植物,其多态位点百分率为84.85%,表现出丰富的遗传多样性。

白芍原植物的传粉特性研究

研究药用白芍的传粉特性,为药用白芍的资源保护和优良品种选育提供科学依据。采取11种不同的处理方式,比较不同授粉方式的结实率和结实质量。芍药的自然结实率低;芍药的异株异花传粉可提高芍药的结实率达3倍,自然生长的花人工给予授粉结实率可提高近4倍;芍药的同株自花直接套袋、同株自花人工授粉和同株异花人工授粉的结实率均不高,分别为0.17%、0.84%、1.16%;去雄和去花冠处理结果表明芍药以异花传粉为主,同时花冠在传粉结实中也起到一定的作用。芍药具有微弱的自交性,芍药以异株异花授粉为主;异株异花授粉,可提高芍药的结实率;同时对芍药的结实率低的原因给以初步分析整理。

海水胁迫对白子菜生长及生理特性的影响

通过盆栽试验,以白子菜[Gynura divaricata(L.)DC.]为研究材料,设置6个海水浓度(0、10%、20%、30%、40%、50%),研究不同浓度海水处理对白子菜生长及生理特性[根系活力、膜透性、膜脂过氧化产物丙二醛(简称MDA)含量、保护酶活性、渗透调节物质含量、叶绿素含量]的影响。结果表明,白子菜能在0~50%海水胁迫下完成生活史,且≤30%海水浓度胁迫下白子菜形态无明显变化,各项生理活动能正常进行;在≥40%海水浓度处理下,白子菜株高、地上部生物量等指标均减少,保护酶活性下降,MDA含量、细胞膜透性明显增加,此时渗透调节物质的增加有助于减轻海水对植物细胞膜的伤害,增强植物的耐盐性。由结果可知,白子菜对低浓度的海水胁迫具有较强的适应性和耐受性,可以进一步挖掘其在盐渍土改良中的利用价值。

酰胺态氮对菘蓝生长及活性成分积累动态的影响

采用盆栽试验研究不同浓度酰胺态氮对菘蓝生长及活性成分积累的影响,为菘蓝合理施用有机氮肥提供理论依据。结果表明:(1)叶面喷施2次和1次酰胺态氮,随着浓度的增大,菘蓝单株干质量先增加后降低,叶面喷施3次酰胺态氮,随着浓度增大,单株干质量增加;叶面喷施酰胺态氮对叶片的促生长作用大于对根的作用。(2)叶面喷施2次5 g/L的酰胺态氮有利于叶内靛蓝的积累,喷施1次10 g/L利于靛玉红的积累。(3)叶面喷施3次10 g/L的酰胺态氮利于根中(R,S)-告依春含量的积累。研究结果说明酰胺态氮对菘蓝叶中靛蓝、靛玉红与根中(R,S)-告依春含量的动态积累影响不一致。结合酰胺态氮对菘蓝生长的影响,为获得高产优质的大青叶与板蓝根,应在菘蓝苗期叶面喷施质量浓度为15 g/L的酰胺态氮2次。

2种药用植物在喀斯特生境下的光合特征及适生性

为筛选喀斯特生态修复植物,探讨植物配置方案,利用Li-6400便携式光合测定系统分别测定了莽草、长刺楤木2种药用植物叶片的光合作用日变化特征,并结合植物叶片各生理生态因子对净光合速率(P_n)影响的通径分析、叶绿素含量、碳酸酐酶活力和稳定碳δ^(13)C同位素组成对比了2种植物在喀斯特生境下的适生能力。结果表明:长刺楤木的大多数光合作用指标(P_n、LUE、Cond、C_i、T_r)均高于莽草,且具有较高的抗胁迫能力和碳酸酐酶活力;2种药用植物在相同喀斯特生境下表现出不同的适应机制,长刺楤木的喀斯特适生性高于莽草,但莽草的抗干旱能力强于长刺楤木。

分光光度法测定4种维吾尔传统药用植物的总黄酮

以50%乙醇为溶剂,亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠为显色剂,以芦丁为对照品,在536nm波长处,用分光光度法对4种新疆维吾尔传统药用植物骆驼刺、凤仙花、酸模、石榴提取物中的总黄酮含量进行了测定,方法简单、方便,结果准确、可靠。其中酸模提取物总黄酮含量最高达到了37%,其次是骆驼刺丙酮提取物,含量为22.9%。这些结果为进一步开发新疆药用植物资源提供了一定的理论依据。

枸骨叶总黄酮提取工艺研究

以枸骨叶总黄酮提取率为指标,利用热回流法,通过单因素和正交试验法优化枸骨叶总黄酮的提取工艺。枸骨叶总黄酮的最佳提取工艺条件为:50%乙醇,料液比1∶20,提取温度70℃,提取时间1.5 h。

卷丹的显微及组织化学观察

采用冰冻切片法、徒手切片法,利用亮视野显微镜、荧光显微镜、偏振光和扫描电子显微镜,对卷丹进行显微结构研究;利用荧光和组织化学染色的手段对卷丹进行组织化学研究。结果表明:(1)卷丹鳞叶内表皮和外表皮都由1层紧密排列的长方形细胞构成,外表皮细胞较长,大小为(230±60)μm×(50±10)μm,垂周壁略微弯曲,内表皮细胞大小为(120±30)μm×(70±10)μm,垂周壁微弯曲或浅波状;内表皮和外表皮都分布有少量气孔,无副卫细胞。(2)卷丹鳞叶有12~16个维管束,导管为螺纹导管。(3)薄壁细胞所含淀粉粒较多,都为单粒,卵圆形和长椭圆形,脐点偏心,层纹清晰可见。(4)荧光显微及组织化学染色表明,生物碱、多酚类和脂类物质主要分布在内表皮和外表皮细胞中,而多糖和皂苷类物质在内表皮、外表皮以及叶肉细胞中都有分布。卷丹不同部位的表皮、淀粉粒特征较为一致,维管束数目一定,大小差别较大。组织化学研究结果为百合的加工、评价、鉴定及进一步研究提供了基础。

野生黄芪内生拮抗细菌的研究

从健康野生黄芪中分离出内生细菌8株,经复筛后有3株具有抗菌活性。经培养滤液抑菌活性测定,菌株ZCJ2抑菌作用最强,根据其形态学和生理生化特征初步判断为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilius)。对菌株ZCJ2的16SrDNA基因片段进行扩增、克隆,测序后构建进化树,结果证明该菌株为Bacillus subtilius变种。

16个鱼腥草基因型遗传多样性的SRAP分析

2009年以16个鱼腥草为材料,通过正交设计研究了鱼腥草的SRAP-PCR反应体系和扩增体系,并运用SRAP标记技术构建了16个鱼腥草材料的SRAP-PCR图谱,同时应用DPS分析软件构建了UPGMA聚类图。结果表明:(1)最佳反应体系为总体积25μL中含40ngDNA,0.1mmol/LdNTPs,2.0mmol/LMg2+,37.5ng/μL引物和2UTaq酶。(2)从360对引物中筛选出条带清晰多态性好的118对,共扩增出7582个条带,其中多态性条带6590个,多态率为86.92%。(3)ZY06-028在Me9-GA18扩增产物的250bp处有特异性缺失带,而ZY06-016和ZY06-028在550bp处有特异性缺失带;在Me8-Em10的扩增产物中ZY06-42和ZY06-01分别在300bp和450bp处出现特异性的带,这些带可用来鉴定不同的鱼腥草基因型。(4)在遗传距离0.31处,可将16个鱼腥草基因型分为3个类群,其中ZY06-024和ZY06-01鱼腥草与其它基因型显著不同,分别单独聚为一类,其余的聚为一类。

怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因克隆和功能分析

通过怀玉山三叶青试管苗转录组数据库筛选到怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因的核心片段,利用RT-PCR技术克隆该病毒增殖蛋白3基因,并进行序列分析、亚细胞定位、器官表达分析和功能分析。结果表明:怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3基因cDNA总长度为873 bp,G+C含量为44.22%;怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3由290个氨基酸组成,分子量33374.79 u,等电点9.72,为疏水性蛋白;二级结构由α-螺旋(57.24%)、β-片层(10.69%)、无规则卷曲(32.07%)构成;三级结构为单体;预测怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3主要存在质膜、液泡膜、内质网中;怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3与葡萄烟草病毒增殖蛋白3(GenBank:XP_002275179.1、GenBank:XP_034684444.1)的同源性最高,同源性达到94.83%。通过烟草叶片亚细胞定位分析表明,烟草病毒增殖蛋白3定位于细胞质(可能包括细胞膜)和细胞核膜中。实时定量PCR结果显示,烟草病毒增殖蛋白3基因在怀玉山三叶青2个栽培种中的表达存在器官特异性,怀玉2号和怀玉1号均在叶中表达量最高;烟草病毒增殖蛋白3转基因阳性烟草的三叶青花叶病毒表达量显著高于烟草病毒增殖蛋白3转基因阴性烟草;与烟草病毒增殖蛋白3转基因阴性烟草相比较,烟草病毒增殖蛋白3转基因阳性烟草的净光合速率(P_(n))、气孔导度(G_(s))、蒸腾速率(T_(r))、最大光化学效率(F_(v)/F_(m))、实际光化学量子效率(ΦPSⅡ)、光化学淬灭系数(q_(P))及电子传递效率(ETR)显著下降,而非光化学淬灭系数(NPQ)显著上升。怀玉山三叶青烟草病毒增殖蛋白3具有典型烟草病毒增殖蛋白3的结构特征,氨基酸序列及核酸序列与同源物种相似度高,进化上高度保守,且可促进三叶青烟草花叶病毒的增殖,降低植株的光合作用效率。

鹅掌柴中总黄酮含量的测定

采用50％稀乙醇冷浸法、70％乙醇热回流法和95％乙醇超声波提取法提取鹅掌柴中总黄酮，以芸香苷为对照品，在A=510nm处分别测定鹅掌柴根、茎、叶中总黄酮类化合物的含量。结果表明，芸香苷在0—0．05mg／mL范围内峰吸光度与浓度线性关系良好（r=0．9999，n=6），仪器精密度RSD=0．31％（n=6）。50％稀乙醇冷浸法中鹅掌柴根、茎、叶总黄酮含量分别为3．54％、2．01％、6．11％；70％乙醇热回流法中鹅掌柴根、茎、叶总黄酮含量分别为4．48％、3．81％、7．14％；95％乙醇超声波提取法中鹅掌柴根、茎、叶中总黄酮含量分别为4．60％、3．95％、7．26％。

山鸡椒ISSR扩增条件的优化

采用改进的SDS法提取山鸡椒基因组DNA,利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg2+浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、TaqDNA聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于山鸡椒ISSR分析的扩增条件:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol/L Tris.HCl,pH值8.8,100 mmol/L KCl,1%Triton X-100,100 mmol/L(NH4)2SO4,15 mmo1/L MgCl2),0.8 UTaqDNA聚合酶,16 ng模板DNA,6 pmol引物,0.3 mmol/L dNTP,1.75 mmol/L Mg2+。利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对21个山鸡椒个体的DNA进行扩增,共得到107个位点,其中,91个为多态位点,多态位点百分率为85.05%,Nei指数为0.361 3,Shannon信息指数为0.522 1,表明山鸡椒的遗传多样性处于较高水平。

罗汉果分子生物学研究进展

罗汉果是广西著名的道地药材,也是我国特有的药食两用植物,具有重要的药用价值和开发前景。近年来,罗汉果分子生物学的研究涉及罗汉果种质资源鉴定、功能基因克隆、抗病性育种等方面,这些技术研究内容主要包括罗汉果性别鉴定、遗传多样性、转录组特征及功能基因克隆等。应用现代分子生物学技术已实现了罗汉果幼苗性别鉴定,全面揭示了其遗传多样性及品种间的亲缘关系;通过构建罗汉果转录组数据库,促进了对该植物的果实生长发育和代谢调控相关功能基因的研究;利用RNAi技术有望获得抗病毒病的罗汉果转基因植株。今后可利用罗汉果基因组数据,深入挖掘基因资源,研究候选基因的功能,明确罗汉果果实生长发育过程中的基因调控网络,利用基因工程手段促进罗汉果种质资源开发及分子遗传育种发展。

不同品系栝楼种子萌发特性比较

以栝楼品系KXY－001和KXY－005为试材，研究不同萌发温度和果实贮藏时间对种子萌发特性、淀粉酶活性及抗氧化酶（ CAT、SOD、POD）活性的影响。结果表明：栝楼品系KXY－001和KXY－005种子的最佳萌发温度均为25℃；若以收获的栝楼种子用于播种为目的，品系KXY－005可于果实采收后0～10 d内采种，品系KXY－001可于果实采后10～20 d后采种。

黄皮属2个种的染色体分析

报道了黄皮[C lausena lansium(Lour.)Skeels]和山黄皮[C lausena lansium-olens(B lanco.)M err.]的染色体数目及核型。结果表明:2者均为2n=2x=18;黄皮的核型公式为2n=18=16m+2sm,山黄皮的核型公式为2 n=18=14 m+4 sm,均为“1 A”型,几乎对称,为较原始类型。简单探讨了2者亲缘关系。

水肥耦合对金花茶幼苗生长响应及综合评价分析

以金花茶(Camellia nitidissima)幼苗为材料,采用三因素五水平二次回归通用旋转组合设计,研究金花茶幼苗对水肥耦合的生长响应,旨在找出金花茶幼苗生长最为优良的水肥条件,为金花茶幼苗的栽培及应用提供科学依据。结果表明:10—12月间,金花茶幼苗株高、地径长势最佳,且根冠比最高的水肥条件为土壤含水量13.80%,单株施肥量氮(N)5.43g、磷(P2O5)2.40g;生物量最大的水肥条件为土壤含水量13.80%,单株施肥量氮(N)10.87g、磷(P2O5)2.40g。主效应及耦合效应分析表明,水、氮、磷三因素对金花茶幼苗株高与地径相对增长量的影响极显著,而对生物量无显著影响,水氮交互对株高相对增长量影响极显著;不同水肥耦合条件下,金花茶幼苗各生长指标均呈显著性差异(P<0.05)。通过苗木综合评价得出,最适宜金花茶幼苗生长的水肥条件为土壤含水量13.80%,单株施肥量氮(N)10.87g、磷(P2O5)2.40g。

氮对地枇杷幼苗生长及生理特征的影响

探讨了水培条件下,不同浓度的氮对地枇杷生长和抗氧化酶活性的影响。结果表明,水培条件下地枇杷的最适氮浓度为300mg/L,此时地枇杷干物质积累量较高,且总分枝的长度、叶片数和分枝没有受到抑制,地枇杷叶绿素含量也有所增加。不同浓度氮处理均能促进地枇杷根中氮的积累,而对茎叶中氮含量影响不大;此外,缺氮会促进地枇杷根对磷的吸收,而高浓度的氮能够抑制磷在地枇杷茎和叶中的积累;氮对地枇杷根中钾的含量影响不大,而随氮浓度增加,氮对地枇杷茎和叶中钾的累积有抑制作用。氮浓度不同,地枇杷不同部位的酶活性变化也不相同。低浓度氮处理下,地枇杷主要通过增加根中CAT活性、叶中SOD活性和CAT活性来适应环境;高浓度氮处理时,地枇杷主要通过增加根中SOD活性和POD活性、叶中CAT活性和POD活性来适应环境。

药用植物紫锥菊叶的显微鉴别研究

本试验通过对药用植物紫锥菊叶的表皮、横切面和粉末进行系统的显微观察研究,描述了其微观特征,给出了紫锥菊叶上、下表面的气孔指数。该结果不仅可用于紫锥菊与同属其余两种药用植物(狭叶紫锥菊、淡紫松果菊)的显微鉴别,也补充了紫锥菊叶研究的不足,为紫锥菊的进一步研究提供更加全面的参考资料。

NaCl胁迫下罗汉果幼苗生长和生理特性的变化

为了研究盐胁迫对罗汉果幼苗生长及生理生化特征的影响,用不同浓度(40、80、120、160、200、240 mmol/L)NaCl溶液胁迫处理罗汉果幼苗,并观察其生长和生理指标的变化。结果表明:随着NaCl浓度的增加,罗汉果幼苗的生长量逐渐降低,当盐浓度为120 mmol/L时,罗汉果地下部分、地上部分鲜质量分别较CK减少26.76%、23.55%;超氧化物歧化酶(SOD)活性随着盐浓度的增加总体呈增强趋势,过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性则随盐浓度的增加先增强后减弱;随着盐浓度的增加,可溶性蛋白、可溶性糖含量先增加后减小,在盐浓度为120 mmol/L时达到最大值;随着盐浓度的增加,丙二醛(MDA)含量呈上升趋势,并且始终显著高于对照。此外,CAT活性与MDA含量、SOD活性呈极显著正相关,与POD活性呈极显著负相关,可溶性糖含量与SOD活性呈极显著正相关。由此说明不同浓度的盐胁迫对罗汉果幼苗生长和生理指标均有不同程度的抑制作用,当盐浓度达120 mmol/L以上时,会严重抑制罗汉果幼苗的生长,甚至会造成幼苗死亡。