烤烟烟叶胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶分离条件的优化

通过不同流动相、测定温度、流速的对比，优化了分离烟叶总DNA中胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的高效液相色谱法。烤烟烟叶DNA采用CTAB法提取，高氯酸水解，用KOH调节pH到3—5，取上清液测定。色谱柱为NucleosilC18（250mm×4．6mm，5um）。优化后测定条件为：流动相采用甲醇：5mmol／L戊烷磺酸钠（10：90，V／V），流速0．7ml／min，柱温30℃，检测波长273nm，进样量20山。该方法简化了流动相的配制，缩短了分离时间，胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加标回收率分别为103．50％和96．67％，相对标准偏差为2．35％和2．80％。用该方法研究烤烟烟叶发育过程中总DNA胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量，效果良好，符合烟叶生长发育规律。