香料烟青枯病抗性基因的遗传分析

本研究以香料烟青枯病抗病品种Xanthi、感病品种Samsun、F1以及F2群体为研究材料,采用青枯病圃进行抗性鉴定,利用主基因+多基因混合遗传模型对各群体单株的病情指数进行分析,结果表明:香料烟青枯病抗性基因是受2对加性-显性-上位主基因+加性-显性多基因(E-1模型)控制遗传;主基因的遗传率为49.63%。

农杆菌携带柞蚕抗菌肽基因转入烟草的研究

柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌功能,对烟草等茄科作物的青枯病假单胞菌(Pseudomonassolanacearum)具有较强的杀菌效果。人工合成抗菌肽基因(122 bp)转入根癌农杆菌(Agrobnctcrium tumefaciena),感染烟草叶盘,诱导成苗。通过对卡那霉素敏感筛选,胭脂碱脱氢酶检定及抗菌肽片段探针杂交,确认抗菌肽基因已转入烟草。现正研究其在烟草中表达及抗青枯病的可能性。

花粉管通道法导入抗赤星病烤烟总DNA D_1代性状变异的研究

采用花粉管通道技术将抗赤星病烤烟ＣＶ８７的总ＤＮＡ导入感病烤烟ＮＣ８９，对其Ｄ_１代植株进行了田间生长性状、抗病性和烟叶品质的检测。结果显示，柱头滴加（ＤＺ）、切柱头滴加（ＱＤ）和子房注射（ＺＺ）等３种导入方法得到的Ｄ_１代植株在株高、株型、叶型、生育期等方面发生了较大的变异，变异率分别是１９．１０％，２０％和１８．２０％。３类植侏中分别有９．１０％，１０％和６．４０％的个体获得了对赤星病的抗性。在这些植株中，筛选出ＤＺ９８１１和ＱＤ９８１２在抗病性和烟叶品质上为优良植株。

新引国外烤烟品种的抗病性鉴定

为选育和利用抗病品种,有效防治烟草病害,采用人工诱发抗病性鉴定的方法进行了9个新引进的烤烟品种对烟草黑胫病、TMV、赤星病的抗性鉴定。结果表明:PVH2254,PVH2306,PVH2299抗性最好,高抗TMV,抗黑胫病,中抗赤星病;RGH04抗黑胫病,高抗TMV,中感赤星病,PVH2110和K326PVY中抗黑胫病、赤星病,感TMV;PVH1452抗黑胫病,感TMV,中感赤星病;NC71抗黑胫病,中感TMV和赤星病。

烟草青枯病内生拮抗菌的筛选、鉴定及其防效测定

One hundred and sixty endophytic bacteria strains were isolated from healthy tobacco plants in severely diseased plots in Guiyang county,Hunan province.Three endophytic bacteria strains: H-1,H-9 and H-11 showed relatively strong antagonistic against Ralstonia solanacearum.Strain H-1 was identified as Bacillus subtilis,while strains H-9 and H-11 were identified as Bacillus brevis by their morphological,physiological and biochemical characteristics.Results from several experiment trials showed that the endophytic bacteria could reduce the disease incidence of tobacco.The control efficiency reached from 84.3% to 98.7%,it indicated that biocontrol with endophytic bacteria was an alternative and potential method to control tobacco bacterial disease.

转基因SOD,POD高表达烟草幼苗抗热性研究

生理高温(38±1)℃处理转基因烟草品系及非转基因品系的幼苗,测定其SOD,丙二醛、可溶性糖含量、电导率和生物量等指标。结果表明,转基因品系SOD的活性更强,丙二醛的含量更低,生物量受到的影响更小。由此认为,转基因烟草品系幼苗比非转基因品系的抗热性更强,其中转基因POD高表达烟草品系的抗热性最强。研究结果表明通过转基因方法提高植物的抗热性是可行的。

利用冷诱导表达ICE1载体提高烟草抗寒性

利用拟南芥克隆转录激活因子ICE1和RD29A启动子,将ICE1连上RD29A启动子,构建成冷诱导植物表达载体pBin-RD29ICE1,通过农杆菌介导法转化烟草,获得了99棵抗性转基因再生烟草植株。通过PCR鉴定44%为阳性,将PCR检测到的44棵阳性植株进行Southern杂交检测,80%为阳性。转基因与野生型烟草同时经受低温处理,前者抗寒性明显提高。

水涝胁迫下烟草对水杨酸和硝普钠的生理响应

【目的】为了探明涝害胁迫下烟草对水杨酸(SA)和硝普钠(SNP)的生理响应,揭示SA和SNP对提高烟草耐涝性的生理机制。【方法】通过人工模拟水涝胁迫,研究SA和SNP单独和复合处理对烟草根冠比、根系活力、叶绿素含量、渗透调节物质及膜脂过氧化系统的影响。【结果】水涝胁迫下,SA和SNP可提高根冠比和根系活力,减缓叶绿素和类胡萝卜素含量的下降幅度;使叶片积累更多的可溶性糖、可溶性蛋白质和游离脯氨酸,增强细胞的渗透调节能力。SA和SNP还能提高涝害短期胁迫下SOD和POD的活性,延缓长期胁迫下酶活性的下降,降低过氧化氢的含量和氧自由基产生速率,进而降低丙二醛含量和相对电导率,增强烟草对水涝胁迫的适应性。【结论】生产上可用SA和SNP复合处理来缓解水涝胁迫对烟草的伤害,SA和SNP复合处理的效果最佳。

云南烟草花叶病毒外壳蛋白基因的分离克隆及序列分析

从云南弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝植斑分离，经免疫电镜（ＩＥＭ）鉴定为ＴＭＶ；在烤烟品种红花大金元上以ＴＭＶ普通株作对照进行致病率测定，确定为强毒株系。以烟草花叶病毒（ＴＭＶ）云南强毒株系ＲＮＡ为模板，根据国外研究结果，自行设计、合成寡核苷酸为引物，通过ＰＴ－ＰＣＲ体外扩增，得到约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段，将其克隆到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α上，并进行了序列分析。分析表明，该其因含４７７个核苷酸，编码１５９个氨基酸，与国外发表的Ｕ１株系比较，核苷酸同源率为９８．１％，氨基酸同源率为９７．５％。获得了云南烟草ＴＭＶ外壳蛋白全基因片段。

不同香料烟品种和品系对烟草黑胫病菌的抗病性研究

以浙江绍兴地区 15个香料烟品种和品系对烟草黑胫病菌进行抗病性鉴定 ,采用游动孢子液灌根接种、茎注射接种和茎伤口菌丝块接种。结果表明 ,供试的 5个亲本和 10个杂交后代中 ,亲本品种沙姆逊、Toy、Argjiro和巴斯马高度感病 ,杂交后代中 Toy×沙姆逊和泰国沙姆逊×巴斯马也较易感病 ,而沙姆逊× Toy、ms沙姆逊×沙姆逊和巴斯马×沙姆逊 3个品系却高度抗病。采用的 3种接种方法中 。

辐射与花药培养相结合筛选烟草抗黄瓜花叶病毒病突变体

用６０Ｃｏγ射线辐射处理小孢子处于单核靠边期的烟草Ｋ３２６、ＮＣ８９、８６１１花蕾并进行花药培养，获得的单倍体植株移栽成活后接种黄瓜花叶病毒病（ＣＭＶ）汁液。结果表明，ＮＣ８９、８６１１单倍体植株的抗病性变异与６０Ｃｏγ射线辐射剂量之间存在一定范围的定向性，剂量≥４ｋｒａｄ时，植株叶片变异与ＣＭＶ症状相似，不利于选择；剂量＜２ｋｒａｄ时，植株的抗病性与对照之间没有差异；剂量＝２ｋｒａｄ时，植株的抗病性与对照之间的差异可达到显著水平，并在２ｋｒａｄ处理的ＮＣ８９、８６１１单倍体植株群体中筛选到了抗ＣＭＶ突变体。

烤烟新品种云烟201的选育及其特征特性

云烟201系选用Ms8610-711作母本,KX13作父本选育而成的烤烟雄性不育杂交种.该品种主要植物学性状变异系数小,遗传稳定,田间生长整齐一致.株式塔型,打顶后近似筒型,自然株高168.8cm,打顶株高107.5cm,可采收叶19.7片,叶形长椭圆形,茎叶角度中,主脉粗细中等,烟叶产值与对照K326相近,大田生育期110～115d.烤后原烟颜色深黄、金黄色多,光泽中至强,油分有、偏多,结构疏松,叶片厚度适中,质量较好.该品种抗烟草普通花叶病、黑胫病,中抗南方根结线虫病,耐青枯病、黄瓜花叶病,感赤星病、马铃薯Y病毒,是一个品质、抗性、产量、适应性等方面兼顾的优良新品种,特别适宜在烟草普通花叶病高发地区种植.

“净叶黄”抗赤星病遗传规律的测定

净叶黄是从长脖黄的原始群体中途育出来的高抗赤星病种质，为进一步提高该种质的利用率，设置了正、反交，回交及自交试验。通过对其后代大量表现型的分析，摸清了净叶黄抗赤星病的遗传规律。初步结论：净叶黄抗赤星病受显性基因控制，抗病性已稳定，遗传力强，杂交成功率高，易于利用。与净叶黄杂交育成的品种，对赤星病均有一定的抗性。

复制酶基因介导的抗病毒烟草植株的研究

将构建的携带烟草花叶病毒（ＴＭＶ）５４ＫＤ蛋白基因及黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）３’端缺失０．９Ｋｂ的１．６Ｋｂ片断复制酶基因植物表达载体ｐＢＩＣＴ，导入根癌农杆菌３１１ＳＥ系，用叶圆盘法转化烟草，在含有卡那霉素的选择性培养基上诱导生芽、生根，得到２８株成活苗．移入大田后，随机挑选４．株植物，提取植物总ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测，结果４株植物中都有复制酶基因的整合，而未经转化的对照组植物则没有．转基因植株在大田试验中表现了良好的抗烟草花叶病毒及黄瓜花叶病毒能力．

烟草NtGRAS基因的克隆与转录激活及表达特性分析

以烟草品种NC89为试验材料,通过电子克隆获得1个烟草GRAS家族基因NtGRAS。该基因编码区长为1 311 bp,编码436个氨基酸。生物信息学分析结果显示,NtGRAS蛋白的相对分子质量为47 781,等电点为5.16,亚细胞定位于细胞核。进化树分析发现,NtGRAS蛋白与拟南芥At SCL23蛋白高度同源。酵母转录激活结果表明,Nt GRAS蛋白具有转录激活活性。实时荧光定量PCR分析表明,NtGRAS在烟草的根、茎、叶和花中均有表达,其中在根部的表达量最高;低温(4℃)、NaCl(200μmol/L)和干旱均能诱导NtGRAS基因上调表达。

hrpZ_(Psg12)转基因烟草及其抗性评价

【目的】将来源于大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea)Psg12菌株的hrpZPsg12基因导入烟草"云烟87",对转化植株进行烟草普通花叶病毒(TMV)、烟草马铃薯Y病毒(PVY)和烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)的抗病性鉴定,为培育多抗烟草新品系奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法,将hrpZPsg12基因转入烟草"云烟87"中,对T0和T1代转基因植株进行PCR检测、Southern杂交,并对T1代转基因植株的抗病性进行评价。【结果】hrpZPsg12基因成功转入"云烟87"中,PCR检测表明共获得7株T0代阳性植株、35株T1代阳性植株。对T1代PCR阳性植株进行Southern检测,表明外源目的基因hrpZPsg12已经整合进烟草基因组中,并可在转基因后代植株中稳定遗传。抗病性测定表明,T1代转基因烟草对TMV和PVY表现高抗,对烟草野火病表现中抗。【结论】获得了高抗TMV和PVY及中抗烟草野火病菌的转hrpZPsg12基因植株20和15株。

内生枯草芽孢杆菌B-001菌株抗菌肽纯化与性质

An antagonistic peptide,H16,produced by endophytic Bacillus subtilis B-001 was purified via ammonium sulphate precipitation,DEAE-Sepharose FF chromatography,FPLC Phenyl FF chromatography and HPLC C18 chromatography.The peptide showed strong antagonistic activity to Ralstonia solanacearum.LC-ESI-MS analysis showed molecular weight of the peptide was 7 367.4 Da,which was the same with that by SDS-PAGE.It was thermostable and not sensitive to proteinases.

转人工合成GFM CryIA基因烟草表现明显杀虫活性

为了使来自原核生物的苏云金芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓＢｅｒｌｉｎｅｒ，Ｂｔ）的杀虫晶体蛋白（ＩＣＰ）基因能够在高等植物中得到很好的表达，对编码这种杀虫晶体蛋白基因的核苷酸顺序进行了必要而又合理的修饰和改造：不改变杀虫晶体蛋白基因的氨基酸编码顺序，将杀虫晶体蛋白基因的密码子更换成植物基因组中常用的优化密码子，同时更换掉Ｂｔ杀虫晶体蛋白结构基因中的不稳定元件，人工全合成了长度为１８２４ｂｐ的杀虫晶体蛋白基因———ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因。为了检测合成的ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因的生物杀虫活性，将ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因导入了烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．），经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因已整合到转基因烟草植株的基因组中。用再生的转ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因烟草植株的叶片喂养二龄棉铃虫（ＨｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａＨüｂｎｅｒ），进行杀虫活性检测，结果表明，转ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因烟草植株能显著地抑制棉铃虫的生长发育，表现出有效的杀虫活性。与此相反，对照植物即未转ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因烟草植株受到棉铃虫的严重危害。这一实验结果证明：人工合成的ＧＦＭＣｒｙＩＡ基因在烟草植株中获得?

转抗旱基因作物的研究进展

在烟草中已分别进行过与抗旱有关的甘露糖醇－１－磷酰脱氢酶基因、甜菜碱脱氢酶基因，二氢吡咯－５－羧酸酶基因，晚期胚胎发生丰富蛋白（ＬＥＡ２５）基因，海藻糖合成酶基因，过氧化物酶基因的转抗旱基因烟草的研究。转Ｍｎ－ＳＯＤｃＤＮＡ的转基因苜蓿，表现了较强抗寒性和抗旱性。转ＨＶＡ１基因的转基因水稻，其第二代的抗旱性和抗盐性得到了明显提高。转抗旱基因作物在我国北方农业中有着广阔的应用前景，但转抗旱基因作物研究在我国还比较薄弱。

转双基因烟草抗虫931的选育与应用

利用现代生物技术培育出转双基因高抗虫烤烟品系抗虫９３１。研究表明：抗虫９３１对烟青虫具有高效杀虫作用，烟青虫幼虫取食其烟叶后，在２．５～３．５天内可１００％的死亡，并对各龄期幼虫的抗性表现一致。在烟草整个生育期内不使用农药即可保证烟田无烟青虫的危害。转双基因烟草抗虫９３１的农艺性状。