离子注入对萝卜过氧化物酶、淀粉酶和蛋白酶同工酶的影响

研究了氮离子和氩离子注入萝卜种子对萝卜幼苗蛋白含量、过氧化物酶活性及过氧化物酶、淀粉酶和蛋白酶同工酶的影响。结果表明 :离子注入后 ,减低萝卜过氧化物酶活性和蛋白含量。萝卜不同生长时期同工酶变化不一样。在子叶时期 ,过氧化物酶同工酶谱带无明显变化 ,淀粉酶同工酶有酶带的消失 ;而在真叶时期 ,过氧化物酶在负极区减少一条酶带 ,Rf为 0 .2 2 ,正极区增加一条酶带 ,Rf为 0 .6 ,且随剂量增加 ,酶带着色增强 ;淀粉酶同工酶在注入剂量为 5× 10 5N+ / cm2 )时 ,有同工酶带增加 ,Rf为 0 .6 1。低剂量时蛋白酶活性增强 ,谱带增多 ,大剂量则减弱。因此 ,N+和 Ar+注入后 ,可影响萝卜过氧化物酶和淀粉酶的表达及蛋白质的合成或降解。

萝卜mRNA差异显示技术反应体系的优化及应用

以萝卜品种短叶十三为材料，对影响mRNA差异显示（DDRT—PCR）反应体系的主要因子进行优化试验，最终确定了优化体系（15μl）：随机引物0．5μmol／L，锚定引物1．0μmol／L，dNTPs0．1—0．2mmol／L，Mg^2＋1．5mmol／L，模板cDNA 15ng，TaqDNA聚合酶0．9U；并对PCR扩增程序中的复性温度进行梯度筛选，表明40℃较适合于萝卜mRNA差异显示（DDRT-PCR）反应体系。同时应用该优化体系分别对短叶十三花芽分化和扬花萝卜、春萝卜BYC抽薹过程中基因的差异表达进行初步分析。

高温胁迫下萝卜苗期的转录组分析

【目的】对高温胁迫下萝卜幼苗进行转录组测序分析,筛选不同耐热性萝卜品种间的差异表达基因,为阐明萝卜幼苗响应高温胁迫的分子机制提供理论参考。【方法】以耐热萝卜品种1116T和热敏感萝卜品种Wr129为对象,对其进行高温(40℃)胁迫处理0(常温,对照)和24 h,提取各时间点样品总RNA进行转录组测序,以|log_(2) Fold Change|≥1,P<0.05且TPM≥10为标准,筛选出差异表达基因(DEGs),并进行GO功能注释和KEGG代谢通路富集分析。【结果】随着高温胁迫时间的增加,Wr129和1116T幼苗茎叶逐渐发生萎蔫,胁迫24 h后Wr129叶片萎蔫下垂且干枯变黄,而1116T叶片轻度萎蔫下垂,仍保持绿色。12个文库共获得81.45 Gb Clean data,平均有62.30%的reads比对到萝卜参考基因组的一个位置。从2个不同耐热性品种中共鉴定到2701个差异表达基因。GO功能注释结果显示,2629个差异表达基因在GO数据库中得到注释,其中,有559个差异表达基因被注释为细胞组分类别中的叶绿体被膜、叶绿体基质和叶绿体类囊体3个条目,470个差异表达基因被注释为与胁迫响应相关的生物学过程。KEGG代谢通路富集结果显示,1166个差异表达基因富集到124条代谢通路,其中,有74个差异表达基因富集到光合作用和光合作用-天线蛋白代谢通路,23个基因富集到卟啉和叶绿素代谢通路,大部分基因在高温胁迫下被诱导;35个差异表达基因富集到谷胱甘肽代谢途径,其中14个谷胱甘肽-S-转移酶基因(GSTs)在高温胁迫下上调表达。高温胁迫24 h,Wr129和1116T幼苗叶片PSII的最大光化学效率(F_(v)/F_(m))和总叶绿素含量均下降,但1116T的下降幅度较小。【结论】Wr129和1116T的耐热性存在明显差异,其原因是1116T植株可通过调控光合作用和抗氧化系统相关基因的表达,减缓F_(v)/F_(m)和叶绿素含量下降速率,从而提高植株对高温胁迫的耐受能力。

萝卜花粉培养及自交育性检测

对18种固体培养基进行筛选,得出蔗糖10%、琼脂0.5%、硼酸0.02%和蔗糖5%、琼脂0.3%、硼酸0.04%两种配方,在温度25℃,相对湿度大于95%,时间在4h是培养萝卜花粉的适宜条件,花粉萌发率达97%以上。通过自花授粉、显微镜观察及苯胺蓝染色紫外灯箱观察花柱中花粉管生长状况相结合来分析花粉在自花柱头上的育性,对花粉活力还进行了化学染色方面的探索。结果表明:0.1%苯胺蓝染液可以准确分析花粉管能否穿越自花柱头,从而鉴定自交亲和性,而碘化钾染色法不适合检测萝卜花粉活力。

萝卜不育系和保持系几种同工酶分析

以萝卜细胞质雄性不育系和保持系为试材,采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳方法对花期叶进行过氧化物酶同工酶、淀粉酶同工酶进行分析。结果表明:不育系和保持系的同工酶存在着谱带增减及强弱的差异。

油用萝卜角果发育特征及胚胎超微结构的比较

以萝卜为试材,采用形态学解剖、细胞微结构观察等方法对萝卜角果、胚珠和胚胎的发育情况进行全程追踪,以期为萝卜种子含油机理研究提供参考依据。结果表明:萝卜胚珠及胚胎在拐杖胚时期质量急剧上升,超微结构观察表明球形时期胚胎最外层细胞开始出现分化,且油体在拐杖形胚胎时期向子叶胚胎时期发育的萝卜胚胎细胞中大量出现。该研究揭示萝卜胚胎发育形态及油体动态变化趋势,为进一步研究萝卜种子发育规律和油体形成过程奠定了基础。

秋冬萝卜雄性不育系06-42A的选育

以郑州市蔬菜研究所选育的萝卜胞质雄性不育系48A为不育源,选用8个不同遗传背景的秋冬青萝卜自交系为转育父本,通过杂交和连续回交选育出优良的萝卜雄性不育系06-42A及相应的保持系。对其不育率及不育度鉴定,其不育率及不育度均为100%,开花结实正常,蜜腺发达。同时对06-42A进行配合力测定,所配组合表现出较强的杂种优势。

基于ITS序列的胭脂萝卜亲缘关系分析

以胭脂萝卜为试材,采用PCR扩增其ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列,研究了序列同源性并构建系统发育树,以期为胭脂萝卜亲缘关系分析提供参考依据。结果表明:胭脂萝卜ITS1-5.8SrRNA-ITS2序列总长度为655bp,ITS1(G+C)含量为51.4%,长度为220bp;5.8SrRNA(G+C)含量为53.4%,长度为217bp;ITS2(G+C)含量为55.1%,长度为218bp。胭脂萝卜与台北的Mei-Hwa、南京的Cd-03、台北的Mei-Nong、南京的Yanghua、杭州的Baiyuchun、渥太华的SW77的同源性最高(99%),归为同一种。由系统发育树可得20个样品的总平均遗传距离是0.134,结合形态学特征表明待测胭脂萝卜可能由白皮白心萝卜进化而来。

根癌农杆菌介导的萝卜遗传转化方法研究

以"短叶-13"萝卜为试材,采用浸花法,使用含有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的根癌农杆菌浸泡生长状态良好的萝卜花序,研究了农杆菌介导萝卜遗传转化的新方法。结果表明:GFP蛋白能够在萝卜幼根中成功表达。