原生质体单核化技术在香菇育种中的应用

利用原生质体单核化技术，以香菇栽培种Ｌｅ１和野生种７０＃为亲本，通过原生质单核体杂交选育出申香８号。它具有优质、高产、抗逆性强和栽培适应性广等特点，已开始在我国香菇主产区应用，成为香菇主栽种之一。

香菇和虎皮香菇的种间原生质体融合

在香菇种间原生质体融合中,对虎皮香菇进行失活原生质体标记,对香菇进行温度敏感型标记,分别以虎皮香菇和香菇的单核和双核体为亲本,用化学融合方法,以高温(35℃)为选择压,筛选并构建了32个不同组合的香菇种间融合子。这些融合子与亲本菌株形成明显的拮抗反应,在木屑代料培养基上产生形态各异的子实体,并形成了新的遗传性状——菌丝体无锁状联合,但能形成子实体。

香菇子实体组织分离物与菌丝体的遗传相关性

以中国香菇主栽品种苏香为材料，利用现代分子生物学技术扩增获得DNA指纹图谱，以此估算出同一菌种子实体菇肉、菇柄组织分离物与菌丝体DNA相似系数，并构建了遗传相关聚类图，结果显示，同一菌种子实体的菇柄组织分离物与菌丝体的遗传相关性可能低于菇肉。

用单核原生质体杂交育成香菇新菌株申香8号

以香菇栽培种Le1和野生种0426为亲本,通过原生质单核体杂交选育出申香8号。它具有优质、高产、抗逆性强和栽培适应性广等特点,现已成为我国香菇主产区的主栽种之一。这证明原生质体单核化技术在香菇育种上是行之有效的。

从DNA水平上分析香菇不同菌株的遗传差异

本文选取了10个中国香菇野生种和2个栽培种.采用RAPD技术进行遗传差异测定.16个随机引物共扩增出118条DNA带,在此基础上分析并构建了遗传相关聚类图.结果表明,我国的香菇野生资源存在着较大的遗传差异,10个野生种菌株之间的遗传相似性在50%～80 %之间.

香菇完全亲和双、单杂交及其先导核的验证

选择香菇的野生株 （ Ｑ） 与栽培株苏香两种孢子单核体 （ Ａ１ Ｂ１， Ａ２ Ｂ２） 进行完全亲和双单杂交， 以拮抗试验辅以液体出菇试验初步鉴定双单杂交后代， 并以 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ技术 （随机扩增的多态性 Ｄ Ｎ Ａ 技术） 对杂交后代进行检测。每个杂交组合只得到一个杂交后代， 说明在完全亲和双单杂交供体中存在先导核。运用原生质体单核化与交配型鉴定技术对杂交后代中来自供体的先导核进行了追踪研究。结果表明， 受体交配型不同时， 其先导核也不同。在 （ Ａ３ Ｂ３＋ Ａ４ Ｂ４） × Ａ１ Ｂ１双单杂交中先导核为 Ａ３ Ｂ３ 核， 在 （ Ａ３ Ｂ３＋ Ａ４ Ｂ４） × Ａ２ Ｂ２ 双单杂交中先导核为 Ａ４ Ｂ４ 核。

利用酯酶同工酶技术检测香菇双单杂交后代

选用香菇的野生株Ｑ 与栽培株苏香的四种孢子单核体进行完全亲和双单杂交，运用拮抗试验并辅以液体出菇试验初步鉴定出１２ 个杂交后代，且对杂交后代酯酶同工酶进行了检测，并以聚类分析方法分析了菌株间酯酶同工酶酶谱的结果，较直观本质地反映了杂交后代及其与亲本之间的遗传差异，表明１ —１２ 号菌株是真正的双单杂交后代。

香菇原生质体杂交后代的遗传分析

以香菇菌株168、931、荷香1号和野生香菇及其杂交后代为材料,采用酯酶同工酶技术,研究香菇原生质体杂交后代与亲本之间的遗传关系。结果表明,供试菌株酯酶同工酶酶谱带数为4~10条,迁移率在0.092~0.804之间。所有杂交后代与亲本之间既有共同酶带,又有属于自己的特征酶带,可以初步认为供试的24个杂交后代有别于亲本,与前期的拮抗试验结果相符。聚类分析结果表明,当相异系数为0.68时,以59和xy2为亲本的杂交群体被分为2类,第1类为ln3、ln4、ln8,第2类为59、xy2;当相异系数为0.78时,以59和ztd为亲本的杂交群体被分为3类,第1类为ln15,第2类为ztd、ln1、ln7、ln10,第3类为59;当遗传相异系数为0.60时,以80和ztd为亲本的杂交群体被分为2类,第1类为亲本80,第2类为杂交后代与ztd;当相异系数为0.80时,以ztd、xy2为亲本的杂交群体被分为2类,野生菌株xy2单独被分为一类,表明该菌株与其他菌株的亲缘关系较远。聚类分析结果初步鉴定了杂交亲本与后代之间的亲缘关系,从而为今后的栽培试验提供了理论依据。

香菇交配型基因的遗传研究——Ⅱ香菇孢子单核体和原生质单核体形态与生化性状上的差异

本文以香菇1号菌株的孢子单核体和原生质单核体为材料,用统计学方法对两类单核体的菌丝生长速度和羧甲基纤维素酶活性进行分析,并采用平均连锁聚类方法对酯酶同工酶图谱进行聚类,从交配型角度探讨了不同来源的两类单核体在形态和生化性状上的差异。结果表明:孢子单核体和原生质单核体在菌落形态、菌丝生长速度和羧甲基纤维素酶三个性状上表现出相同的差异趋势,在同一种交配型的个体间,孢子单核体的变异系数明显大于原生质单核体,在酯酶同工酶电泳图谱这一性状上,用聚类方法可以将绝大多数单核体归入所属的交配型范围内。这两类单核体具有的不同表型与它们的不同来源有密切的联系,有性世代中复杂的遗传行为导致孢子单核体中性状出现较大的变异,而作为无性后代的原生质单核体则表现出性状相对稳定的特征,这两类单核体表现出的差异为香菇的遗传和育种研究提供了重要的基础材料。

He:Ne激光诱变的香菇变异株遗传稳定性分析

对三株香菇菌种采用He Ne激光 (λ =632 8nm)进行两次照射 ,筛选出三株比出发菌株菌丝生长速率分别提高 1 7 3%、73 7%和 42 6%的变异株 ,经传代培养及酯酶同工酶谱分析 ,变异株具有良好的遗传稳定性 表明激光作为微生物新型诱变因子与传统化因子相比 ,具有正变率高、回复突变率低。

香菇交配型基因的遗传研究 Ⅰ一种交配型基因测定的新方法

本文建立了一种香菇交配型基因测定的新方法——原生质单核体系本交配到极性标记法.用这一方法不仅成功地分离和鉴定出不同香菇菌株的四种标准交配型基因,还有效地区分出亲本型和重用型两种交配型基因类型。这一技术为深入开展异宗结合食用菌的遗传研究提供了一个重要的工具。

香菇单核原生质体制备和再生菌丝交配型测定

从9个香菇野生种和栽培种中制备出不同比例的单核原生质体再生菌丝(37％～85％)。溶壁酶浓度、酶解时间和菌丝生理状况对单核原生质体形成无明显影响。在9个单核原生质体再生菌丝中,有5个测出两种交配型(AxBx,AyBy),比例从2:1～10:1不等;有4个只测出一种交配型(AxBx)。产生这一现象的原因与不同交配型的单核原生质体的再生率和菌丝生长速度有关。在交配型等位基因的测定中,9个菌种测出12个A因子和12个B因子,交配型等位基因的重复频率为14.1％。

香菇的失活原生质体融合

食用菌的原生质体融合必须对亲株进行遗传标记。筛选营养缺陷型或代谢突变型的传统方法,不仅需要花费大量的人力和物力,而且这些筛选是以诱变为基础,往往会引起亲本一些不利于产量和质量性状的突变。70年代发展起来的失活原生质体技术表明。

香菇杂种优势表达的生理途径

F_1和F_5两个杂交种的绝对生物学效率均高于两个亲本,超出幅度为29%～52%;在基物失重与呼吸消耗中,两个杂交种基本相同,处于两个亲本之间,并表现出两个性状均接近于双亲中最优亲本的趋势;在纤维素、半纤维素和木质素降解能力中,两个杂交种表现出双亲互补的特征;在营养生长阶段,两个杂交种利用培养基中非木质纤维素的趋势较强;在生殖生长阶段,则具有比亲本更强的利用培养基中木质纤维素的能力,笔者提出把有效生物转化率作为衡量香菇杂种优势的一个生理指标。

香菇菌株限制性片段长度多态性

香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）菌株的ＤＮＡ片段通过克隆转移到质粒载体ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＭ１３—（ｐＢＳ）以获得部分基因文库。文库中三个随机克隆和一个密环菌中ｒＤＮＡ克隆被用作限制性片段长度多态性探针。其中三个探针可检测到多态性，揭示了３２个野生和栽培香菇菌林的遗传分离。菌林间的相似性用平均链锁聚类方式（ＵＰＧＭＡ）聚类，相似性超过６０％的分为一组。２３个菌株被分成４组。９个菌林与其它菌株相似性均低于６０％而独立存在。从我们的结果看出，香菇的遗传分离普遍存在于菌株间而与地理位置没有相关性。ＲＦＬＰ具有研究香菇种内遗传分离的潜力，并可用作遗传分析的遗传标记，因此能够为育种工作和遗传分析提供科学依据。

香菇单核原生质体再生菌丝的遗传性状分析

香菇单核原生质体再生菌丝和孢子单核体菌丝的菌落形态、菌丝生长速度和羧甲基纤维素酶活性具有不同的变异系数，在相同交配型内，单核原生质体再生菌丝个体之间差异小，而孢子单核体菌丝个体之间变相大。经测定，单核原生质体再生菌丝杂交后代菌丝生长速度和羧甲基纤维素酶活性的广义遗传力分别为６１．０％和８８．８％。单核原生质体再生菌丝自交后代的菌丝生长速度和羧甲基纤维素酶活性均表现出较大的变幅。单核原生质体再生菌丝的回交后代出现以受体性状为主的变异趋势，进一步证明单双核杂交是对现有栽培菌株进行遗传改造的有效途径。

香菇亲本菌株及其杂交后代的RAPD分析

运用随机扩增多态性DNA（RandomamplifiedpolymorphicDNA，RAPD）技术对源于两个香菇（Lentinulaedodes）双核菌株的孢子单核体、原生质体单核体及其杂交后代进行了基因组DNA多态性分析。用9个随机引物共扩增出116条DNA片段，其中82．5％具有多态性。综合分析9个随机引物的扩增谱带，可将所有供试亲本单核体清楚地分开，且早核体聚类分析的结果与其来源及遗传背景相吻合。此外，用两个双核亲本菌株的各4个不同交配型的孢子单核体两两支配所得的所有杂交组合，也均可与双核亲本菌株明确地区分开来。因此，在杂交育种中，RAPD分析可为亲本的选配及杂种的鉴定提供可靠依据。

香菇杂交26号菌株选育的研究

本研究采用种质标记法,以可出菇的交配基因型为遗传标记,以胞外酶种类,对底物专一性及酶活为生化标记,通过对糖苷酶的筛选进行育种。香杂26号是带有种质标记的新菌株,遗传标记:A_(14)B_(13)×A_1B_2,生化标记:内源纤维素酶酶活:45mm及外源纤维二糖酶酶活:45mm。香杂26号与亲本No.8.No.40酯酶同工酶谱比较,除同源酶带外分别出现了互补型酶带谱,显示出强优势组合的新菌株。生物学特性表明,香杂26温度适应范围广(10～30℃),菌丝生长期短(60天),生物效率高(室内栽培:118.44%比对照No.40增产62.8%,生产中试:90.98%),子实体中型匀称,柄细而短,伞厚,含水量低。用交配基因型做遗传标记可将杂交组合控制在可出菇范围。

细胞工程株“平香一号”育种研究

以平菇和香菇为材料,应用细胞工程理论和技术获得细胞工程株.自1990年经原生质体融合获得子实体后.经过4年10个世代的选育.培育出遗传性状稳定的高产细胞工程株、命名为“平香一号”。经过3次产量中试.证明其菌丝洁白、粗壮,菌柄中生.无抱子,生育期比香菇短.生物转化率为154.6％,产量超过双亲、杂种优势显著.

香菇原生质体融合及融合子的鉴定

以香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）种内不同株一对亲和的单核菌丝（７４０２〈２〉和９１０１〈１２〉）为亲本，以碘乙酰胺失活７４０２〈２〉作为筛选标记，经过原生质体制备、ＰＥＧ融合及融合子再生等步骤，选育得融合子。融合子与双亲无拮抗性，在菌丝形态，核数目及可溶性蛋白质图谱、酯酶同工酶谱和过氧化物酶谱上均与双亲单核菌丝及担孢子杂交子有区别。将Ｋｎｏｗｌｔｏｎ等于１９８４年建立的一种分离高频再生衍生株的方法首次运用至食用菌中，使原生质体再生率提高２－３倍，为融合操作提供了方便。