利用荧光SSR标记构建杏新品系的分子身份证

以15份杏种质(包括4个新品系)为试材,采用6个荧光SSR标记进行PCR试验,构建了4个杏新品系的分子身份证,以期为利用分子鉴定技术对4个杏新品系进行品种权保护提供参考依据。结果表明:利用6个标记共检测到47个等位基因,57个带型,平均每个标记获得9.8个带型;利用其中5个标记构建10位数的分子身份证,‘开园’‘春华’‘英华’和‘美华’4个新品系的分子身份证分别是2578231744、5878341744、277a231344和6768174612,既互不相同,也与其它种质的分子身份证不同。这些结果为4个杏新品系利用分子鉴定进行品种权保护提供了依据。

山杏花粉离体培养条件及花粉管生长动态研究

以山杏优良无性系为试材,采用花粉离体培养的方法,研究了山杏花粉离体培养条件对花粉萌发率的影响、不同采样方式对花粉萌发率的影响和花粉管的发育过程,旨在为了解和控制山杏授粉受精过程提供参考依据。结果表明：当蔗糖、琼脂浓度为10.0%和0.5%时,0.010%的硼酸浓度最适合山杏花粉离体培养。室内水培花枝取样的花粉活力显著低于野外自然开花取样的花粉活力,在相关科研和生产实践中,应尽量缩短室内水培时间或从野外自然开花中获得花粉。不同山杏无性系的花粉活力差异明显。山杏花粉管在培养基中生长可以划分为4个时期：花粉萌发期（0.3-0.6h）,快速生长期（0.6-2.0h）,生长速度缓慢期（2.0-4.0h）和生长停滞期（4.0h以后）。

山杏愈伤组织诱导及植株再生

以山杏成熟胚和胚乳为外植体,以MS为基本培养基进行组织培养,研究了基于山杏经愈伤组织途径建立的再生植株技术。结果表明:以胚乳为外植体诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+6-苄基腺嘌呤(6-BA)1.0mg/L+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3g/L;愈伤组织的继代及分化培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+萘乙酸(NAA)0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3g/L;以成熟胚诱导愈伤组织和丛生芽增殖分化培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3g/L;生根培养基为1/2MS+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3g/L。

山杏SSR-PCR反应体系优化

以4种山杏群体为试材,采用L16(45)正交实验设计,研究了适合4种山杏群体的SSR-PCR反应体系。结果表明:总反应体系为20μL,其中DNA模板量20ng,引物浓度0.15μmol·L^(-1),Mg2+2.0mmol·L^(-1),Taq聚合酶量1.0U,dNTPs 0.25mmol·L^(-1)。采用引物Y45对43个山杏无性系的DNA进行扩增,扩增产物在100~200bp,多态性良好,稳定度高,可以用于山杏SSR分子标记研究。

杏SSR反应体系的优化研究

研究了杏SSR-PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响,并进行了体系验证。优化后的反应体系为：总体积20μL,1×buffer2、.0 mM/L Mg^2＋0、.25 mM/L dNTP、0.20μM/LPrimer6、0 ng/20μL模板DNA和0.05 U/μL Taq酶。利用32个杏品种验证此反应体系,6%的变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在184-267 bp之间,不同品种间DNA谱带具有多态性,且反应体系的稳定性和可重复性好。

杏离体根愈伤组织诱导及起源的研究

以杏离体根段为试材 ,研究了创伤、培养基对愈伤组织发生的影响及愈伤组织发生过程。结果表明 ,以离体去皮根段为外植体 ,MS为基本培养基 ,诱导愈伤组织较为适宜。愈伤组织是多起源的 ,但主要源于形成层。残存的韧皮部也可以脱分化形成愈伤组织 ,此外 。

应用RT-PCR检测歇马杏李属坏死环斑病毒

利用作者已建立的PNRSV RT-PCR检测体系对辽宁省大连市地方特产歇马杏田间植株携带PNRSV的情况进行了调查,结果表明被检植株PNRSV的感染率达83.33%,但带毒程度不同。

山杏胚培养影响因素研究

以当年生野生山杏成熟种子为试材,采用组织培养法,研究了种皮、不同浓度赤霉素(GA_3)以及光照条件对山杏种子萌发的影响。结果表明:光照16h、黑暗8h条件下,MS培养基中添加0.16mg/L GA_3能有效促进去种皮山杏种子的萌发,未去除种皮的山杏种子均未萌发;在遮光条件下,去种皮种子在添加了0.16mg/L与0.50mg/L GA_3的MS培养基中发芽率均为100%,幼苗比光照16h、黑暗8h培养条件下的高且生长速度快,但黄化现象严重;将幼苗移至土壤中,能够正常生长,成活率达100%。

‘凯特’杏花粉离体培养条件筛选

以‘凯特’杏为试材,采用不同培养基组分及不同培养基类型的方法,测定了花粉萌发率和花粉管伸长长度,研究了不同培养基组分及不同培养基类型对花粉萌发和花粉管伸长的影响。结果表明:固体培养基适合‘凯特’杏离体萌发,最适培养基组分是10%蔗糖+0.10%硼酸+0.5%琼脂;在该培养基上,花粉萌发率达90%以上,花粉管生长长度为13 510.30μm。

特早熟试管杏新品种群的选育

本项目首次研究了特早熟杏胚培育种 ,解决了 7项胚培技术关键 ,建立了特早熟杏胚培育种技术体系 ,首次人工育成 10个特早熟试管杏新品种 ,形成了一个特早熟试管杏品种群。以新育成的特早熟杏为试材 ,研究了果实性状遗传、雌雄蕊发育、自花和异花授粉亲和性、花期抗霜冻能力及配套栽培技术。该品种群果实发育期 5 0～ 5 7天 ,自花结实率高达 19%～ 31% ,花期抗霜冻能力强 ,早果丰产 ,色彩艳丽 ,酸甜适口 ,品质极佳 ,综合性状明显优于华北生态群老品种和欧洲生态群。现正在有计划地进行成果转化和产业化开发 ,已在全国 16个省 (市 )

野杏花粉离体培养条件筛选及花粉生活力研究

以野杏优良家系和无性系为研究对象,采用花粉离体培养的方法,对野杏花粉离体培养条件及其生活力进行研究,以期为野杏杂交育种中父本植株的选择提供参考依据。结果表明:培养基组分中蔗糖浓度、培养时间是影响花粉生活力的主要因素。最适宜野杏花粉离体培养的培养基组分浓度为10%蔗糖,0.005%硼酸,培养6.0h。根据野杏花粉管生长速率,可将其划分为4个生长阶段,其中0.3~1.0h为花粉萌发阶段,1.0~2.5h为快速生长阶段,2.5~6.0h为缓慢生长阶段,>6.0h为生长停滞阶段。野杏各家系及无性系均为正常可育,其中家系209号花粉生活力最强,其花粉萌发率及花粉管长度分别为81.33%和1 136.14μm;无性系J118号萌发率最高,花粉管长度最长,分别为63.35%和1 043.78μm。野杏家系花粉萌发率和花粉管长度间无相关性,而无性系呈显著正相关。野杏家系花粉萌发率极显著优于无性系,且有3个家系的花粉生活力均极显著优于西伯利亚杏家系。

山杏良种枝接繁殖技术体系优化

以山杏良种为试材,采用正交实验设计,优化了其枝接繁殖技术,以期提出低成本、高效率的枝接关键技术,为优化和完善山杏良种快繁技术体系提供技术支撑。结果表明:不同处理的枝接效果差异显著,母树年龄、采穗部位、接穗斜面长度对枝接效果均有显著影响。不同处理的枝接工效差异明显,采穗部位、接穗斜面长度对枝接工效影响显著。7号处理,即接穗斜面长度1.5 cm、母树年龄1年、采穗部位枝条下段,嫁接高度4 cm,枝接效果最好,其成活率、嫩枝粗度和嫩枝长度分别为98.67%、7.38 mm和94.32 cm;7号处理枝接工效用时为29.67 min,平均可节约生产成本31.7%。综合枝接效果和工效,7号处理成活率高,生长效果好,工效快,成本低,为最优组合,可以在山杏良种推广中加以应用。

杏核仁主要性状变异及概率分级

杏核仁含有丰富的变异性状,对核仁主要性状进行合理分级可以在数量化和规范化的基础上对杏种质资源进行评价,建立更为具体精确的评价标准是杏种质开发利用的基础。该研究选取22个杏种质,测定核仁主要性状指标并对其变异和概率分级进行分析。结果表明:杏核仁主要性状的变异较为丰富,在8.02%~69.59%,各个主要性状指标间变化规律不一致;杏核仁主要性状Sig.值均处于0.16~1.00,所有主要性状指标均符合正态分布。通过对杏核仁主要性状的分析,提出了基于杏核仁主要性状分布特征的杏种质资源概率分级指标体系,将杏品种依据各性状指标分为3级,并指出各级质量指标范围,使用这一标准可以将杏种质区分出来。不仅可以补充和完善杏分类和鉴定的评价标准,还可以为其它植物种质资源评价中观测数据的规范化和标准化处理提供参考。

基于成熟期的杏品种遗传多样性SSR分析

以168份杏育成品种为试材,采用SSR分子标记方法,利用16对多态性好、稳定性强、带型清晰的特征引物,扩增等位基因,研究了不同杏树不同群体的遗传多样性,以期为杏种质资源鉴定和品种亲缘关系分析在分子水平上提供依据。结果表明:杏群体的Nei’s基因多样度平均值为0.715 8,Shannon遗传表型指数为1.497 3,说明杏的总体遗传变异偏高,品种多样性丰富。通过对杏的成熟期进行遗传分析,结果发现,早熟和中熟2个类群的遗传数据相近,推测可能存在相近的遗传关系,晚熟与早熟类群等位基因数据差异较大,说明二者亲缘关系较远。

李、杏远缘杂交种的创造及其利用研究

李×杏远缘杂交一代的结果植株 ,其树高、枝条色泽、叶片形态、果实风味等各方面都表现出李、杏的中间型。没有一株的果实具备足够的经济性状 ,生产上没有应用价值。从李×杏远缘杂交二代中 ,培育出一个具有抗寒、矮化、质佳、丰产、核小的杏新品种。在李×杏远缘杂交一代中发现 ,有些植株表现出树体矮小、树冠紧凑、根皮率在 36%～ 69%之间 ,与山杏砧的嫁接成活率达 90 %以上 。

银杏两个WD40转录因子基因克隆及序列分析

WD40转录因子也称WDR(WD repeat)蛋白,是一种古老蛋白家族,参与调节类黄酮次生代谢途径中多种酶基因的表达,从而影响类黄酮的积累。以三年生银杏苗为试材,采用RT-PCR和RACE-PCR方法,研究了银杏WD40基因序列,以期深入了解银杏叶类黄酮合成代谢的分子机理。结果表明:GbWD401序列包含一段2 313bp的开放阅读框,编码一个770aa的肽链;GbWD402序列包含一段1 605bp的开放阅读框,编码一个534aa的肽链。银杏GbWD401和GbWD402基因推测编码蛋白序列均含有典型WD40重复基序。GbWD401蛋白序列与无油樟AtWD401相似性为49%,GbWD402蛋白序列与无油樟AtWD402相似性为78%。系统进化树发现,GbWD401与无油樟AtWD401、荷花NnWD40划归为同一分支;而GbWD402与无油樟AtWD402划归为另一分支。