副鸡嗜血杆菌的分离鉴定

副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum,HPG)是鸡传染性鼻炎的病原菌。近年来,北京、陕西、四川等地证明了该病的发生。为了了解该病在山东省的流行状况,从山东德州地区5个鸡场的20只疑似鸡传染性鼻炎鸡体内共分离到6株细菌,经细菌分离培养、生化试验、鸡胚接种试验和16s rDNA基因序列分析等方法鉴定为副鸡嗜血杆菌。并经玻片凝集试验、Dot-ELISA、血凝试验分型研究,证实6株分离菌株均为副猪嗜血杆菌A型。从而为以后鸡传染性鼻炎的免疫治疗提供理论依据。

亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞对牛体细胞克隆胚体外发育的影响

为探索用亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞是否有利于牛体细胞克隆胚的体外发育,将采集的卵母细胞分成3组:对照组,采集后的卵母细胞直接放入成熟液培养,不用亮甲酚蓝处理;控制对照组,卵母细胞于PBS中放置90 min后放入成熟液中培养;试验组,将采集的卵母细胞在含有26μmol/L亮甲酚蓝的PBS中放置90 min。然后将处理过的卵母细胞根据着色情况分为两组,即BCB+(胞质呈蓝色,成熟卵母细胞)和BCB-(胞质未着色,生长期卵母细胞)。各组卵母细胞24 h体外成熟培养,统计各组卵母细胞成熟率。分别用成熟后的各组卵母细胞用于细胞核移植,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数。结果表明,BCB+组卵母细胞的成熟率明显高于BCB-组卵母细胞的成熟率(74.0%,53.4%),差异显著(P<0.05)。BCB+组的囊胚率(45.0%)与对照组、控制对照组和BCB-组的囊胚率(34.9%,36.4%和5.2%)相比差异显著(P<0.05)。另外BCB+组的囊胚细胞总数(114.5±7.5)较其他组差异显著(P<0.05)。表明通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植,可以获得更高的克隆囊胚率。

发酵中药对免疫应激肉鸡血液指标的影响

为探讨发酵中药对免疫应激肉鸡血液指标的影响。选用7日龄健康AA肉鸡200只,随机分为5组:对照组(基础日粮)、LPS应激组(基础日粮+LPS)、1%未发酵中药组(基础日粮+LPS+1%未发酵中药)、0.5%发酵中药组(基础日粮+LPS+0.5%发酵中药)和1%发酵中药组(基础日粮+LPS+1%发酵中药)。除对照组外,其他各组分别在15、17、19、21、23、25、27日龄时腹腔注射LPS 100、200、200、250、250、400、400μg/(kg·bw),对照组注射等量的生理盐水。最后一次注射后24 h采集血液,测定血液常规和血清生化指标。结果显示:(1)与对照组相比,LPS应激组肉鸡的血液白细胞数目显著升高(P<0.05),血清中总蛋白、球蛋白、尿素氮和总胆固醇含量明显上升(P<0.05);谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)等血清酶活性显著升高(P<0.05)。3个中药组总蛋白和白蛋白含量均显著高于对照组(P<0.05)。(2)与LPS应激组相比,2个发酵中药组白细胞数目和AST血清酶活性显著下降(P<0.05),1%发酵中药组ALT和0.5%发酵中药组CK的血清酶活性显著下降。表明LPS应激对肉鸡血液常规和血清生化指标均有一定影响,添加中药能够显著降低肉鸡炎症反应,调控蛋白质和脂肪代谢,减轻免疫应激损伤,发酵中药优于未发酵中药。

水牛活体采卵和无透明带胚胎培养体系的优化

本研究旨在探索哺乳动物体外受精(IVF)胚胎单独或少量培养时发育效率低、无透明带胚胎的体外发育潜能受阻的问题,以期建立提高水牛活体采卵(ovum-pick-up,OPU)和徒手克隆(handmade clone,HMC)胚胎发育潜能高效稳定的体外生产体系。研究首先比较了单个微滴内共培养的胚胎数量(1、3、5、10和20枚)对胚胎发育效果的影响;而后采用微穴体系(well-of-the-well,WOW)和辅助共培养体系(培养微滴中添加包埋IVF胚胎的琼脂糖小块)培养OPU-IVF胚胎,并用WOW体系培养无透明带的徒手克隆重构胚,与传统的微滴培养体系比较其体外发育效果。结果表明:单个微滴内培养的胚胎数量为1、3和5枚时,囊胚发育率极显著低于10枚和20枚组(P<0.01);与微滴培养体系相比,辅助共培养和WOW体系均极显著提高OPU-IVF胚胎的囊胚率(P<0.01),且WOW培养体系极显著促进HMC重构胚的卵裂率和囊胚率(P<0.01)。综上所述,胚胎群体培养有助于胚胎发育,在保证系谱明确的前提下琼脂糖包埋辅助胚胎共培养体系和WOW体系提高了OPU-IVF体外胚胎发育效率,且WOW体系还可用于无透明带胚胎的高效培养。

肌源性干细胞的研究进展

肌肉组织中有多种成体干细胞,有研究者从肌肉组织中分离得到不同亚群的干细胞,其中肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSCs)作为肌卫星细胞的前体细胞,具有较强的细胞再生能力并表现出很强的细胞活力和多向分化的潜能。MDSCs不仅能够分化为中胚层细胞类型,包括肌细胞、脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞等,还可以打破胚层的限制分化为外胚层的神经细胞和内胚层的肝细胞。MDSCs是一种很好的基因载体,已成为临床医学和组织工程学的新型种子干细胞,并被广泛应用。文章针对MDSCs的分离培养、鉴定、生物学特性和临床应用前景展开了详细论述。

L-茶氨酸对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡的影响

本试验通过建立过氧化氢(H_2O_2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究L-茶氨酸对H_2O_2诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率及其凋亡通路关键基因表达量的影响。选取42日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,培养于含5%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基中,待细胞密度达到60%~70%时,随机分为5组,分别为培养基中无额外添加物的对照组、添加800μmol/L H_2O_2的Ⅰ组、添加800μmol/L H_2O_2+4 mmol/L L-茶氨酸的Ⅱ组、添加800μmol/L H_2O_2+8 mmol/L L-茶氨酸的Ⅲ组和添加800μmol/L H_2O_2+16 mmol/L L-茶氨酸的Ⅳ组,每组3个重复。作用12 h后,应用流式细胞术(FCM)检测山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡比率,并采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)对山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡通路关键基因半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸-8(Caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)、Fas相关死亡域蛋白(FADD)和凋亡酶激活因子(Apaf-1)的表达量进行检测。结果显示:1)通过膜联蛋白-V(annexin V)/碘化丙啶(PI)联合染色结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组(Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组)细胞晚期凋亡比率显著降低(P<0.05),且细胞晚期凋亡比率随L-茶氨酸添加浓度的增加逐渐降低。2)通过RT-q PCR检测结果可知,与Ⅰ组相比,各L-茶氨酸添加组Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1基因的表达量皆显著降低(P<0.05)。由此得出,L-茶氨酸对H_2O_2引起的山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡具有一定的保护作用,该结果可为今后研究反刍家畜瘤胃氧化应激损伤机制提供技术支持和理论参考。

牛科物种胰岛素诱导基因1(INSIG1)研究进展

胰岛素诱导基因1编码蛋白(INSIG1)定位于内质网膜上,是调控脂代谢的重要因子。INSIG1主要通过调控固醇调控元件结合蛋白(SREBP)和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)来影响脂质代谢。越来越多的研究结果揭示了INSIG1在生物体内作用的复杂性。本文综述了INSIG1与SREBP和HMGR之间在脂代谢调控过程中的相互作用机制、INSIG1的结构及表达调控、INSIG1对牛科动物泌乳、生长等性状的影响。

“头翁四君子汤”对羊附红细胞体病血清SOD、MDA含量的影响

选用附红细胞体患病羊和健康羊,于用药前1天,用药后第1天、第4天、第7天分别自颈静脉采血,分离血清,用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,探讨羊患附红细胞体病后血清SOD、MDA的变化及中药对其调节作用。结果表明,羊患附红细胞体病后,血清SOD活性降低,MDA含量显著升高;而“头翁四君子汤”能显著提高SOD的活性,明显降低MDA含量,从而保护机体免受自由基损伤。

卵母细胞来源对水牛体细胞核移植胚胎发育潜能的影响

【目的】探索不同来源卵母细胞对体细胞核移植(SCNT)重构胚的发育能力及发育潜能关键蛋白表达水平的影响。【方法】试验分为活体采卵(OPU)和屠宰场(SLH)卵巢2组,OPU组用超声波活体采卵仪穿刺抽吸10头非泌乳期经产水牛卵巢的卵泡采卵,SLH组从屠宰场卵巢抽吸卵泡采卵。获得的卵母细胞分别进行体外成熟,体外成熟22~24 h后,吹打去除卵丘细胞,挑选具有第一极体的卵母细胞,去核后与水牛耳部成纤维细胞进行SCNT,分别统计SCNT重构胚的融合率、分裂率和囊胚率,用免疫荧光检测2种SCNT重构胚的E-钙黏蛋白(E-cadherin)和转录因子Sox2蛋白的表达水平。【结果】OPU组卵母细胞成熟率及其SCNT重构胚的囊胚率均显著高于SLH组(P<0.05),但2组SCNT重构胚的融合率和分裂率均无显著差异(P>0.05);免疫荧光结果显示,E-cadherin蛋白定位于细胞膜上,Sox2蛋白分布在细胞核膜及细胞质中,OPU组SCNT重构胚中E-cadherin和Sox2的表达水平均显著高于SLH组(P<0.05)。【结论】活体采集的水牛卵母细胞更适合用于SCNT重构胚的构建。

补中益气汤发酵制剂对肉鸡肠道环境和黏膜结构的影响

为探讨补中益气汤发酵制剂对肉鸡肠道主要菌群数量、酶活性、pH值及黏膜结构等的影响。试验选取300只健康状况良好的7日龄AA肉鸡,随机分为4组,分笼饲养。空白对照组饲喂基础日粮,中药对照组在基础日粮中添加1%未发酵中药,试验1组在基础日粮中添加0.5%发酵中药,试验2组在基础日粮中添加1%发酵中药。结果显示,补中益气汤发酵制剂能显著提高肉鸡肠道乳酸杆菌的数量,降低大肠杆菌的数量;显著提高肠道中淀粉酶和蛋白酶活性;降低肠道pH值;显著提高肠绒毛长度,降低隐窝深度和肠壁厚度。表明在肉鸡日粮中添加补中益气汤发酵制剂,能调节肠道菌群组成,增加肠道内源酶活性,调节肠道pH值,改善肠道形态结构。

奶牛卵丘细胞和共培养细胞对体外受精胚胎发育的影响

对奶牛卵母细胞进行体外受精,研究了卵丘细胞和共培养细胞对体外受精胚胎发育的影响。结果表明,奶牛卵丘细胞有助于卵母细胞的体外受精,能够显著提高体外受精的卵裂率(70.7%)和囊胚率(22.8%),而在B2胚胎培养液中添加Vero作为共培养细胞能显著提高体外受精后胚胎的囊胚率(22.7%)。

补中益气汤发酵制剂对肉鸡生长性能和免疫功能的影响

为探讨补中益气汤发酵制剂对肉鸡生长性能和免疫功能的影响,试验选取300只健康状况良好的7日龄艾拔益加肉仔鸡,空白对照组饲喂基础日粮,中药对照组在基础日粮中添加1%未发酵中药,试验1组和试验2组分别在基础日粮中添加0. 5%和1%发酵中药。结果表明,基础日粮中添加0. 5%补中益气汤发酵制剂一定时间后能显著提高肉鸡日增重;能显著降低肉鸡阶段料肉比,提高免疫器官指数和新城疫抗体效价,与空白对照组和中药对照组相比差异显著(P <0. 05);能显著提高一定日龄肉鸡血清中Ig G、Ig A和Ig M浓度。结论:在肉鸡日粮中添加补中益气汤发酵制剂,能显著提高肉鸡的生产性能和免疫功能,实际生产中在日粮中添加0. 5%量为宜。

禽白血病病毒感染对新城疫和禽流感疫苗免疫效果的影响

为研究禽白血病病毒(ALV)感染对新城疫(ND)和禽流感(AI)疫苗免疫效果的影响,采用ELISA方法对河南省某地方品种鸡场进行ALV-p27抗原检测,同时采集试验鸡的血清样品,检测ND、AI(H_9)和AI(H_5)亚型的免疫抗体水平,并比较了ALV经种蛋垂直传播感染1日龄雏鸡和后期感染对ND、AI疫苗免疫效果影响的差异。结果表明,ALV经种蛋垂直传播感染1日龄雏鸡,能显著降低ND、AI(H_9)和AI(H_5)疫苗免疫的抗体水平,阳性试验组与阴性组相比血清中ND、H_9、H_5(Re-6)、H_5(Re-7)和H_5(Re-8)抗体效价分别降低1.71log2、2.37log2、1.59log2、1.00log2和1.79log2;鸡群后期感染ALV,对ND和AI疫苗的免疫没有明显的抑制作用,阳性试验组与阴性组相比无显著差异。

武宣县“微生物+”生态养殖技术应用效果分析

近年来,随着我国畜牧业持续稳定快速发展,大量养殖废弃物没有得到有效处理和利用,对环境污染带来巨大影响。2016年武宣县在15家生猪养殖场和3家肉牛养殖场应用“微生物＋”生态养殖技术,然后又在8家生猪养殖场应用“微生物＋高架网床”生态养殖技术。

某规模场产蛋量下降鸡群新城疫病毒分离与鉴定

对某规模场鸡群采集的23份鸡咽喉或泄殖腔棉拭子进行病原分离,通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR检测,证实分离出17株新城疫病毒（NDV）。对F、HN基因经RT-PCR扩增、克隆并对其进行测序,选取具有代表性的4个毒株进行序列比对及遗传演化分析。系统发育分析结果表明,4株病毒均属于基因Ⅶe型,F基因裂解位点的氨基酸序列为^112R-R-Q-K-R-F^117,具备NDV强毒株裂解位点氨基酸排列特征。其F基因与XZ-12-08-Ch株核苷酸和氨基酸的同源性分别介于96.1%-96.7%、97.3%-98.0%;与P1株核苷酸和氨基酸的同源性分别介于95.0%-95.4%、96.2%-96.7%,其HN基因与XZ-12-08-Ch株核苷酸和氨基酸的同源性介于96.2%-96.5%、95.3%-95.9%;与SN-5-08-Ch株核苷酸和氨基酸的同源性介于94.9%-95.3%、96.4%-96.8%。血清学交叉试验显示,NDV分离毒株为抗原测得的同批血清样品抗体效价存在显著差异。近年流行的新城疫疫情主要由基因Ⅶ型NDV引起的,该规模场产蛋量下降可能与F和HN基因的变异有关。

山麻鸭卵泡发育的形态学及激素分泌调控基因的表达研究

为探讨各阶段山麻鸭卵泡发育水平以及激素分泌调控基因的表达情况,对不同发育等级山麻鸭卵泡壁的形态进行了观察,并检测了CYP19A1和3β-HSD基因的表达量.研究发现,发育过程中颗粒层和膜层细胞数量不断增加,密度和厚度也随着细胞的增殖而增长.对产蛋期山麻鸭卵泡膜层和颗粒层CYP19A1和3β-HSD的表达量进行检测结果表明,卵泡颗粒层的CYP19A1基因主要在等级前阶段表达,3β-HSD基因主要在等级阶段表达,卵泡膜层的CYP19A1和3β-HSD基因则主要都在等级阶段表达.